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1、 本科生毕业论文题 目 基于基因组重排技术的角蛋白酶 高产菌株的筛选 学 院 轻纺与食品学院 专 业 轻工生物技术 学生姓名 程 双 学 号 1043095006 年级 2010 级 指导教师 吴 重 德 二 一 四 年 六 月 四 日四川大学本科毕业论文 基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选专业：轻工生物技术学生：程 双 指导老师：吴重德摘摘 要要角蛋白酶以其特异性分解角蛋白的特性，在废弃羽毛的处理，清洁制革技术等领域中得到广泛应用。本论文以实验室保存的地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenifo
2、rmis X-47)作为亲本菌株，利用基因组重排技术，筛选高产角蛋白酶的菌株。对基因组重组的条件进行了优化，得到 Bacillus licheniformis X-4 的最佳基因组重排条件为：菌龄 8 h，溶菌酶酶浓度1.0 mg/mL，酶解时间 30 min，酶解温度 40，融合时间 15 min，融合温度 35，融合pH9.0，融合 PEG 浓度 400 g/mL。通过筛选得到第一代融合子 Y1-28 和 Y1-31，Y1-28 角蛋白酶活力为 240.97.2 U/mL，Y1-31 角蛋白酶活力为 257.517.5 U/mL，较原始菌株分别提高了 68.4%和 80.0%。以 Y1-2
3、8 和 Y1-31 为亲本，筛选的第二代融合子 Y2-33 角蛋白酶活力为 318.231.2 U/mL，与较原始菌株相比提高了 122.4%。关键词：关键词：基因组重排技术 角蛋白酶 地衣芽孢杆菌四川大学本科毕业论文 基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选iScreening of high keratinase-producing strains by genome shuffling Major: Biotechnology for Light IndustryStudent: Cheng Shuang Supervisor: Wu ChongdeAbstractKeratinase
4、, specialized in degradation of keratin, is used extensively in the treatment of waste feather and the technology of clean production in leather industry. This manuscript aimed to screen high keratinase-producing strain through genome shuffling by using Bacillus licheniformis X-47 as parental strain
5、. The conditions for genome shuffling were optimized. the optimal cell age was 9 h, and the optimal lysozyme concentration, enzymatic time, and temperature were 1.0 mg/mL, 30 min, and 40, respectively. The fusion time, fusion temperature, pH, and PEF concentration were 15 min, 35, pH 9.0 and 400 g/m
6、L, respectively. Under the optimal conditions, the first generation of fusants Y1-28 and Y1-31 were screened, and the keratinase activities were 240.97.2 U/mL and 257.517.5 U/mL, which increased 68.4%, and 80.0%, respectively, compared to the parental strain. The second generation of fusant Y2-33 wa
7、s isolated by using Y1-28 and Y1-31 as partental strains. The activity of Y2-33 was 318.231.2 U/ml which increased 122.4% compared with the original strain.Key words：Genome shuffling Keratinase Bacillus licheniformis四川大学本科毕业论文 基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选目目 录录第一章 前言 .11.1 角蛋白酶概述 .11.1.1 角蛋白及其利用 .11.1.2 角蛋白
8、酶的研究 .11.2 基因重排技术（Genome shuffling） .21.2.1 基因组重排技术原理 .21.2.2 基因组重排技术方法 .21.2.3 基因组重排技术的优点 .31.3 本论文研究的目的意义、思路设计及主要内容 .41.3.1 研究目的意义 .41.3.2 论文设计思路 .41.3.3 主要内容 .5第二章 材料与方法 .62.1 实验材料 .62.1.1 菌种 .62.1.2 药品与试剂 .62.1.3 培养基 .72.1.4 主要仪器设备 .72.2 实验方法 .72.2.1 角蛋白酶活力分析方法 .72.2.2 原生质体的制备和再生 .82.2.3 原生质体的灭活 .82.2.4 原生质体的融合及其条件优化 .
