《一种基于途径分析提高丙酮酸产量的育种策略》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种基于途径分析提高丙酮酸产量的育种策略（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、!“ 卷# 期 $%“ 年 $ 月微生物学报 !“#$ %8?+ABC0D.)+E.)?A作者简介： 刘立明 （#F47 G ） ， 男， 安徽宿松人， 博士研究生， 从事生化工程研究。;8(?， 检测器： A 3“%， 流动相： “23B （A$A）/46.!， 流速： 32“%+$%。!“#“$丙酮酸代谢关键酶活性的测定： 将在 4“?下 培养了 !E 的细胞用无菌生理盐水离心洗涤 4 次，然后悬浮在 “23%)*$+ 磷酸钾缓冲液 （0/ F21） 中， 用玻璃珠于 !?下振荡 1%U9 )X -U;9-9; ) U;* R#)Y9E )X 9E; %Z9-9 -= 9E; 0-#;9G
2、9#-* I：OO；6-;* “3T 在OO 上生长较弱但在 7O 培养基上却生长良好？为 确定原因， 作者比较了突变株 77P77 O“3T 与出发株 K8/5N64“4 在不同培养基上 （OO 和 7O） 与丙酮酸代谢相关酶 （6H/、 6H7、 I+H/、 I78、 IH/ 和67） 活性的变化情况。如表 3 所示， 与出发株相比， 突变株中 6H/ 旁路酶活性发生了明显的变化：（3）6H7 活性下降了 !“B （7O 或 OO） ；（）I78 活性在 含有乙酸的 7O 培养基上提高了 3“421B， 而在无乙酸的 OO 培养基上提高了 1F2!B。添加乙酸和突变对 6H/、 67、 I
3、+H/ 和 IH/ 等酶的活性没有明显影响。这一结果表明， 尽管突变株的 6H7 活性下降了(F微生物学报!1 卷!“#， 但在含有乙酸的培养基中的细胞干重比出发 株仍高出 $% +, +) 1-?88?849 .; ?A4 5B?1:? 1: ?A4 6174:? 9?718:1+174:? 9?718: =+ C“CDB?1:? )0) D$“$“%E)DDD)DDD+,17 481?8.:9（: K C） ；20A4 B:8? .; ?A4 964-8;8- 1-?88?L .; +, ()* 89 %“M $（5.3N （58:N5ON67.?48:） ；-0A4 B:8? ;.7 ?
4、A4 964-8;8- 1-?88?L .; (, +) 89 %“M %!5.3N （58:N5ON67.?48:） P)*+乙酸钠浓度对突变株的生长和积累丙酮酸的 影响在培养基中添加一定浓度的乙酸钠可促进突变株 )0) D$“$“%E 生长和丙酮酸产量。乙酸钠对突变株 )0) D$“$“%E 生长和积累丙酮酸的影响如图 $ 所示 （% O 乙酸钠中碳摩尔数相当于 “;4-? .; 1-4?1?4 -.:-4:?71?8.: .: ?A4 67.B-?8.: .; 6L7B1?4 2L5B?1:? )0) D$“$“%E)*0!1 “#$% 6L7B1?4 67.B-?8.: 2L 5B?1
5、:? )0) D$“$“%E本文基于对光滑球拟酵母中丙酮酸节点主要代谢途径的分析， 提出选育 +,) 活性组成型降低而()* 活性增强的突变株的育种策略， 以期提高丙酮酸的产量， 并降低对维生素 S%的依赖性。由于该突变株中丙酮酸经 +,) 途径的降解被进一步抑制， 且对乙酸的利用能力加强， J 发酵罐中丙酮酸的产量和产率与前期研究相比又有了进一步的提高%“。此外， 本研究表明， 提高 !P “#$% 6L7B8-1-8P ()# *+,;4-?9 .; O3B-.94，8?158:9，1: ,Y -.:-4:?71?8.:9 .: 6L7B1?4 ;4754:?1?8.: B98:O !-3
6、B 1:13L989P.+-/,01-#-“45/609?127A95;?B/609?127 ;7B19E5F0G1H7“ -.(“/( .(“01)，),，$： )I! + )IJ- K L956M N #，4;7 O2776HP1 Q，16 R/SM76 N L“ L09?127 P721E5G/HP/6 2*/3*#“45/0 /0#06(*0“ 70*,， ),K，%!：)KI + )K!- I L956M N #，T76U7G # N，V?22/M . %，0, *%“ W6797B2H 5=09?127A;780;9509?127 U? 1B720GAB576U0P7% /6 Q7
7、=7“ .(/304(,#5 ),*I，#!：)I* + ),)- , ZG/MC7792 . #，16 ;79 Y16;76 V，N16HH76 T .，0, *%“ L09?127;7B19E5F0G1H7：16 /6;/H76H1EG7 76U0P7 =59 79=59P16B7 G/D?/; B895PA125805=H8592A16;G568760G80;91U/;7H“ - 93#“4*,“)#，),J*，#!%： )K* + )I(-)?B2/56 5= 8?P16A9527/6 ;5P1/6 E0 197B5PE/6162 :(/3(* 7 H7D?76B7，16; 80H/5
8、G57B2958525P729/B 1HH10=59 09?127 ;780;95G7F /6 B9?;7 2/HH?7 85P57B2 25 M/672/B 95792/7H 16; 2916HB9/2/561G 97971912/56 5= B90H21GG/6B196/2/67 1B720G2916H=791H7“ .(“/3(4 .(“.; 70;6 ;1=016: 63803/6; 186 ,=209?127 95;?B2/20 E0 P?G2/A/21P/6 1?F52958/B 071H2 !“#$%“/609?127 ;7B19E5F0G1H7 E?2 /6B971H/67;
9、E1H7; 56 161G0H/H 5= 09?127A97G127; P721E5G/B 128C10H“ /295H5G727 95;?B7; 09?127 C1H 09?127 95;?B2/56，287 1B2/2/7H 5= 76U0P7H 2812 /65G7; /6 09?127A97G127; P721E5G/B 128C10H 5= 287P?2162 16; 287 19762 H291/6 C797 ;7279P/67;“ W6U0P12/B 161G0H/H 9771G7; 2812，B5P197; C/28 287 19762 H291/6 TOQAL!，287 1B
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