《临床慢性丙型肝炎个体化治疗疗效的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床慢性丙型肝炎个体化治疗疗效的研究（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、临床慢性丙型肝炎患者流行病学、临床慢性丙型肝炎患者流行病学、 病毒变异、临床表型及个体化治疗病毒变异、临床表型及个体化治疗 疗效关系的研究疗效关系的研究第三军医大学西南医院第三军医大学西南医院 感染病专科分院感染病专科分院 全军感染病研究所全军感染病研究所 国家感染病学重点学科国家感染病学重点学科范可 王宇明 陈文 陈嵩 范懿 毛青 王小红范可 王宇明 陈文 陈嵩 范懿 毛青 王小红研究背景研究背景 前 言前 言?感染率感染率：全国初步调查为：全国初步调查为3.2%，但各家实际报道病 例数偏少（常不到，但各家实际报道病 例数偏少（常不到HBV感染者的感染者的1/10）?诊断问题诊断问题：国内基
2、因型检测不普遍，方法不精确， 分类不统一（本世纪后才统一采用：国内基因型检测不普遍，方法不精确， 分类不统一（本世纪后才统一采用Simmonds法）法）?研究较为缺乏的领域研究较为缺乏的领域- 不同基因型的不同基因型的CHC患者患者流行病学资料流行病学资料- 治疗后的治疗后的病毒准种漂移病毒准种漂移- 国内病人的国内病人的转归（重症化）及自身免疫性肝炎（转归（重症化）及自身免疫性肝炎（AIH）合并症发生率合并症发生率- 个体化治疗疗效（过去常关注疗程而非个体化治疗疗效（过去常关注疗程而非剂量剂量）一 般 资 料一 般 资 料?2004年至今共年至今共305例在我院诊治的例在我院诊治的CHC病人
3、病人?男男171 例，女例，女134例，年龄例，年龄988岁岁?基因分型：基因分型：- 重庆地区病人重庆地区病人123例例- 非重庆地区病人非重庆地区病人182例例注：注：1994年年2003年共年共22例（不完全统计），因资料不够完整，仅统计例（不完全统计），因资料不够完整，仅统计病例数病例数材料与方法材料与方法?PEG IFN-2a+RBV：139例例?PEG IFN-2b+RBV：96例例?IFN-+ RBV： 50例例#?小剂量小剂量PEG IFN-2a+RBV： 41例例#：IFN-+ RBV治疗的情况较差，不少病人在使用后换成治疗的情况较差，不少病人在使用后换成PEG IFN进行治
4、进行治 疗，因此未作疗效统计疗，因此未作疗效统计接受接受IFN治疗病人（有记载者共治疗病人（有记载者共285例）例）材料与方法材料与方法分组分组180g 135g 90g 男男/女女11/97/3 8/3 平均年龄（岁）平均年龄（岁）36.332.2 41.0基因型分布基因型分布1b型型5 2 52a型型1 2 33a型型2 3 03b型型6 0 06a型型3 2 2未分型未分型3 1 0分型分型失败失败0 0 1表1 PEG IFN-2a治疗前三组病人的基本情况表1 PEG IFN-2a治疗前三组病人的基本情况材料与方法材料与方法检测检测/研究方法研究方法?生化检测生化检测：HITACHI
5、7020自动生化分析仪 （自动生化分析仪 （ HITACHI，日本），日本）?HCV RNA定量定量：荧光定量逆转录套式：荧光定量逆转录套式PCR （Lightcycler，美国），美国）?RT套式套式PCR扩增扩增: 标本提取采用标本提取采用QIAamp viral RNA mini kit(Qiagen公司，美国公司，美国)， PCR扩增采用扩增采用PE9700 PCR扩增仪（扩增仪（PE 公司，美国）公司，美国）?HCV RNA基因分型基因分型：PCR扩增产物送上海生工生物工程有限公司扩增产物送上海生工生物工程有限公司直接测序直接测序?自身抗体谱自身抗体谱（ANA、AMA、SMA、LKM
6、1）：欧蒙试剂（德国）：欧蒙试剂（德国）材料与方法材料与方法准种研究方法准种研究方法?HCV RNA 提取提取?HCV NS5A 片段扩增片段扩增?PCR 产物的克隆（产物的克隆（TA克隆）：克隆）：Qiagen公司试剂盒（美国）公司试剂盒（美国）?同 一 凝 胶 上 用同 一 凝 胶 上 用 单 链 构 象 多 态单 链 构 象 多 态 / 异 源 性 双 体（异 源 性 双 体（SSCP/HD）分析（分析（BioRad公司电泳仪，美国）对公司电泳仪，美国）对NS5A区进行克隆型筛选区进行克隆型筛选?克隆型的确定和组成分析克隆型的确定和组成分析材料与方法材料与方法Agarose gel el
7、ectrophoresis of PCR productsTA cloningPCR verification of white colonies材料与方法材料与方法图图1 PCR 产物的克隆（产物的克隆（TA克隆）策略克隆）策略图图2 我们创立的我们创立的SSCP/HD准种筛选策略准种筛选策略材料与方法材料与方法图图3 异源性双体（异源性双体（HD）/单链构象 多态（单链构象 多态（SSCP）联合分析）联合分析A、B分别显示不同驱动子的效果分别显示不同驱动子的效果Wang YM, et al. J Clin Microbiol, 1998, 36(10):2982-2989材料与方法材料与方
8、法图图4 HCV感染在总体、重庆地区、非重庆地区 的基因型分布情况感染在总体、重庆地区、非重庆地区 的基因型分布情况注：各组间注：各组间HCV基因型分布无显著差异（基因型分布无显著差异（P0.05） 未见不同基因型的现症混合感染未见不同基因型的现症混合感染 CHB患者发生患者发生HCV混合感染共混合感染共24例例总体重庆地区非重庆地区总体重庆地区非重庆地区结果结果图5 传播途径：总体、重庆地区、非重庆地区情况图5 传播途径：总体、重庆地区、非重庆地区情况注：各组间注：各组间HCV传播途径无显著差异（传播途径无显著差异（P0.05）总体重庆地区非重庆地区总体重庆地区非重庆地区结果结果表2 不同传
9、播途径的基因型分布情况（%）表2 不同传播途径的基因型分布情况（%）基因型例数输血及血制品静脉药瘾者性接触手术不明途径基因型例数输血及血制品静脉药瘾者性接触手术不明途径 （包括吸毒）（包括侵入式）（包括吸毒）（包括侵入式）1b 76 48（63.2）2（2.6）0 5（6.6）21（27.6）2a 27 16（59.3）0 2（7.4）2（7.4）7（25.9）3a 25 3（12.0）8（32.0）0 2（8.0）12（48.0）3b 33 3（9.1）8（24.2）1（3.0）3（9.1）18（54.5）6a 23 1（4.3）4（17.4）0 1（4.3）17（73.9）总数）总数184
10、 71 22 3 13 75注： 经输血及血制品使用感染的病人注： 经输血及血制品使用感染的病人HCV基因型大多基因型大多集中在集中在1b型，其次为型，其次为2a型型结果结果图图6 病人发现患丙型肝炎的时间分布病人发现患丙型肝炎的时间分布注：病人从有感染注：病人从有感染HCV的行为（输血或的行为（输血或IDU等）到等）到发现感染发现感染HCV的平均时间为的平均时间为12年年结果结果?重症化重症化：未见急性肝衰竭（：未见急性肝衰竭（ ALF），未见肝细胞肝癌（），未见肝细胞肝癌（HCC），仅见），仅见4例失代偿性肝硬化，且病情偏轻例失代偿性肝硬化，且病情偏轻?AIH合并症合并症：174例经例经欧
11、蒙四项欧蒙四项自身抗体谱检查均为自身抗体谱检查均为阴性阴性临床表现（重症化）及临床表现（重症化）及AIH合并症合并症结果结果基因型基因型RVREVR ETVR 治疗中突破治疗中突破1b8/17 (47.1%)20/23(87%) 7/7 (100%) 6/37 (16.2%)2a 5/5 (100%) 7/7 (100%) 6/6 (100%) 1/10 (10%)3a 7/7 (100%) 10/11(91%) 3/3 (100%) 1/13 (7.7%)3b 6/7 (85.7%) 12/12(100%) 3/3 (100%) 1/14 (7.1%)6a 6/6 (100%) 7/7 (1
12、00%) 2/2 (100%) 2/13 (15.4%)总体总体32/42（76%）56/60（93%）21/21（100%）11/87 (12.6% )表表3 不同基因型疗效比较不同基因型疗效比较注：注：1b型的型的RVR低于其他各基因型，但无统计学差异（低于其他各基因型，但无统计学差异（P0.05）1b型治疗中突破发生较多，但与其他各型之间无统计学差异（型治疗中突破发生较多，但与其他各型之间无统计学差异（P0.05）1b型的复发率大于型的复发率大于2a型，分别为型，分别为37.5%及及16.7%，两者之间的差异有统计学意义（，两者之间的差异有统计学意义（P0.05）结果结果组 别病例号克隆型分布克隆型数量（种）组 别病例号克隆型分布克隆型数量（种）表表4 HCV NS5A区克隆型数量及分布情况区克隆型数量及分布情况完全应答组完全应答组1 16，5，4，4，1，1，1，1 8 2 21，3，3，2，1 5 3 19，5，3，1，1，1 6 6.3（平均（平均) 部分应答组部分应答组4 14，6，3，3，2，2 6 5 9，5，5，4，3，1，1，1，1 9 6 12，3，3，3，3，1，1，1，1，1，1 11 7 19，6，1，1，1，1，1 7 8 11，5，5，2，2，1，1，1，1
