《液相色谱-串联质谱(lcmsms)方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相色谱-串联质谱(lcmsms)方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、http:/ - 1 -液相色谱液相色谱-串联质谱（串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量 王健 吉林大学药物代谢研究中心（130021） E-mail: 摘 要：摘 要：本文建立了液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量。色谱柱：Zorbax Extend-C18柱，5 m 粒径，1504.6 mm I.D.，美国 Agilent 公司；流动相：甲醇-水-甲酸（80:20:1，v/v/v）；流速：0.8 mL/min。本方法具有良好的灵敏度、准确度、精确度以及专属性，完全适用于临床应用及药物代谢研究。 关
2、键词：关键词：佐米曲普坦；LC/MS/MS 1. 引言引言 佐米曲普坦（Zolmitriptan）为选择性 5-HT1B/1D 受体激动剂，通过对颅部血管扩张和三叉神经系统感觉神经的 5-HT1B/1D 受体的激动作用，促进颅部血管收缩，抑制炎症后神经肽的释放，临床用于治疗偏头痛1,2。本试验建立了测定人血浆中佐米曲普坦含量的液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）分析方法用于临床应用及药物代谢研究。 2. 试验试验 2.1 仪器与药品仪器与药品 API 4000 型三重四极杆串联质谱仪，配有离子喷雾离子化源以及 Analyst 1.3.2 数据处理软件，美国 Applied Biosystem
3、 公司；Agilent 1100 高效液相色谱系统，包括二元输液泵，自动进样器，切换阀，美国 Agilent 公司。 佐米曲普坦标准品（纯度99）：英国 AstraZeneca 公司提供；苯海拉明对照品（纯度99）：中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，空白人血浆由吉林大学第一医院提供。 2.2 血浆样品的分析方法血浆样品的分析方法 血浆样品的预处理血浆样品的预处理 精密取血浆样品 0.5 mL 置具塞试管中，加入内标溶液（2 ng/mLhttp:/ - 2 -苯海拉明甲醇溶液） 100 L， 加入 100 L 甲醇-水 （50:50， v/v） 混合溶液， 加入 1
4、mol/L Na2CO3溶液 100 L， 混匀； 加入 3mL 正已烷-二氯甲烷-异丙醇 （300:150:15， v/v） ， 涡流混合 1 min，往复振荡 10 min（240 次/分），离心 5 min（3500 rpm），取上层有机相于另一试管中，40C空气流下吹干，残留物加入 100 L 流动相溶解，涡流混合，取 20 L 进行 LC/MS/MS 分析。 色谱条件色谱条件 色谱柱：Zorbax Extend-C18柱，5 m 粒径，1504.6 mm I.D.，美国 Agilent公司；流动相：甲醇-水-甲酸（80:20:1，v/v/v）；流速：0.8 mL/min；柱温：室温；
5、进样量：20 L 质谱条件质谱条件 离子源：离子喷雾离子化源；离子喷射电压：5000 V；温度：550C；源内气体 1（GS1，N2）压力：65 psi；气体 2（GS2，N2）压力：55 psi.；气帘气体（N2）压力：20 psi；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测（MRM）；DP 电压：50 V；碰撞气（N2）压力：3 psi；佐米曲普坦和苯海拉明的碰撞诱导解离（CID）电压分别为 44 V 和 25V；用于定量分析的离子反应分别为 m/z 288.4 m/z 58.0（佐米曲普坦）和 m/z 256.3 m/z 167.1 （苯海拉明）。 2.3 分析方法确证 分析方法确证 质谱分
6、析质谱分析 将佐米曲普坦、苯海拉明溶于流动相中，按“质谱条件”项操作，相应的二级全扫描质谱图见图 1。 方法的专属性方法的专属性 分别取 6 名受试者的混合空白血浆 0.5 mL，按“血浆样品的分析方法”项下操作，进样 20 L，得色谱图 2A；将一定浓度的佐米曲普坦标准溶液和内标溶液加入空白血浆中， 依同法操作， 得色谱图 2B， 佐米曲普坦和内标苯海拉明的保留时间分别为 0.63 min 和 0.80 min；取受试者给药后收集的血浆样品，依同法操作，得色谱图 2C。结果表明，空白血浆中的内源性物质不干扰佐米曲普坦和内标苯海拉明的测定。 标准曲线的制备标准曲线的制备 取空白血浆 0.5 m
7、L，加入佐米曲普坦标准系列溶液 100 L，配制成相当于血浆浓度为 0.10, 0.20,0.60, 2.00, 6.00, 20.0 和 40.0 ng/mL 的血浆样品，按“血浆样品的分析方法”项下依法操作，制备标准曲线。以血浆中待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权（W=1/x2）最小二乘法进行回归运算6，求得的直线回归方程，即为标准曲线。每个分析批（每天）建立一条标准曲线（例如图 3）。 线性范围线性范围 根据标准曲线， 佐米曲普坦的线性范围为 0.10-40.0 ng/mL, 定量下限为 0.10 ng/mL。 精密度精密度 按“标准曲线的制备”项下操作, 制
8、备佐米曲普坦低、中、高三个浓度（分别为 0.20, 2.00, 32.0 ng/mL）的质量控制（QC）样品，每一浓度进行 6 样本分析，连续测定三天，根据当日的标准曲线，计算 QC 样品的测得浓度，根据 QC 样品结果计算本法的准确度与精密度，结果见表 1。 http:/ - 3 -提取回收率 提取回收率 取空白血浆 0.5 mL，按“血浆样品的分析方法”项下操作，制备低、中、高三个浓度（佐米曲普坦分别为 0.20, 2.00, 32.0 ng/mL）的样品，每一浓度进行 3 样本分析。同时另取空白血浆 0.5 mL，按“血浆样品的分析方法”项下操作，向获得的上清液中加入相应浓度的标准溶液和
9、内标溶液各 100 L，涡流混合，40C 空气流下吹干。残留物以流动相溶解，进样分析，获得相应峰面积（三次测定的平均值）。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。高、中、低三个浓度的提取回收率分别为 50.5%，47.1%和46.6%。 稳定性考察 稳定性考察 血浆样品经处理后，室温下放置 12 h 稳定。 结果表明： 测定血浆中佐米曲普坦的分析方法符合有关规范要求7， 可用于药物动力学试验。 2.4 未知样品的测定 未知样品的测定 按“血浆样品的分析方法”项下操作，每个分析批（一天内测试的同种样品）制备一条工作曲线，同时制备低、中、高（0.20，2.00 和 32.0 ng/mL）
10、三个浓度的质量控制样品，每个浓度的质量控制样品进行双样本分析。根据每一分析批的工作曲线计算质控样品和未知样品的浓度。上述质控样品中最多允许两个不同样品的浓度超出理论值的 15%（低浓度点为 20%），否则此批数据不被接受。 3 结果分析结果分析 22 名健康受试者口服佐米曲普坦 5 mg 后平均血药浓度-时间曲线见图 4，药代动力学参数如下：血浆中佐米曲普坦的 Tmax为 1.8 0.6 h； Cmax为 8.63 3.77 ng/mL；t1/2为 5.57 2.82 h；采用梯形法计算，AUC0-t为 41.27 15.94 ngh/mL，AUC0-为 43.65 17.16 ngh/mL。
11、 表 1 血浆中佐米曲普坦 LC/MS/MS 测定方法的准确度与精密度 浓度 (ng/mL) RSD (%) 加入量 平均值 日内 日间 RE (%) 0.20 0.20 10.00 13.60 -2.45 2.00 2.07 1.77 13.90 3.27 32.00 32.08 3.77 7.26 2.41 http:/ - 4 -20 40 60 80 100120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 m/z, amu20004000600080001.0e41.2e4Intensity, cps58.0182.1243.3288.4m/z,HNNCH
12、3CH3ONHOA20 40 60 80 100120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 m/z, amu20004000600080001.0e41.2e4Intensity, cps58.0182.1243.3288.4m/z,HNNCH3CH3ONHOA20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 m/z, amu2.0e54.0e56.0e58.0e51.0e61.2e61.4e61.6e61.8e6Intensity, cps167.1256.3CHOCH2CH2NCH3CH3B20 40
13、 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 m/z, amu2.0e54.0e56.0e58.0e51.0e61.2e61.4e61.6e61.8e6Intensity, cps167.1256.3CHOCH2CH2NCH3CH3CHOCH2CH2NCH3CH3B图 1 佐米曲普坦和内标苯海拉明M+H+的二级全扫描质谱图 （A） 佐米曲普坦 （B） 苯海拉明 http:/ - 5 -0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 288 m/z 58 Max.
14、230.0 cps.0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 256 m/z 167Max. 390.0 cps.A0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 288 m/z 58 Max. 230.0 cps.0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 256 m/z 167Max. 390.0 cps.AB0.20.40.60.
15、81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 288 m/z 58 Max. 3.3e4 cps. 峰 I0.63Rel. Int. (%)0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100% m/z 256 m/z 167Max. 2.3e5 cps. 峰 II0.80B0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 288 m/z 58 Max. 3.3e4 cps. 峰 I0.63Rel. Int
16、. (%)0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100% m/z 256 m/z 167Max. 2.3e5 cps. 峰 II0.80C0.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 288 m/z 58 Max. 4.1e4 cps. 峰 I0.630.20.40.60.81.01.21.4 Time, min0%20%40%60%80%100%Rel. Int. (%)m/z 256 m/z 167Max. 1.9e5 cps. 峰 II0.80C0.20.40.60.81.01.21.4
