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1、 为什么选择 EndoGrade OVA？什么是卵白蛋白OVA？卵白蛋白ovalbumin，缩写OVA，是鸡蛋白中的主要蛋白成分，约占总蛋白的60- 65%。OVA是一个糖蛋白，蛋白质分子量为45000道尔顿。鸡蛋白是很常见的过敏原。OVA和卵类粘蛋白 (Ovomucoid) 是鸡蛋白里面主要的过敏原。内毒素是一个重要的多效致炎因子，因此，静脉注射的药品规定内毒素的含量不能超过5 EU/kg。商品化的OV A 里如果含有高的内毒素， 会引发炎症，不能真实反映OVA本身在体内的作用。大部分商品化OVA不能令人满意的去除内毒素，亦或是需要繁杂的步骤。SDS沉淀或者苯酚抽提也不能有效的去除内毒素，或
2、者不能提供可溶性的蛋白溶液。EndoGrade OVA产品为体内（注射，气化）或者体外（细胞增殖分析）科学研究提供了内毒素低于1EU/mg的OVA,有效避免因残留内毒素导致的干扰问题。1、OVA通常被用于作为过敏原建立一系列实验模型，比如气道高反应性(Airway Hyper Reactivity, AHR) 模型动物；通过注射和雾化吸入OV A的方法来制作小鼠哮喘模型；可建立OVA变应原致敏的变应性鼻炎( Alle- rgic Rhinitis, AR) 大鼠模型；OVA雾化吸入制备豚鼠过敏性支气管哮喘动物模型；通过OVA建立大鼠，小鼠豚鼠过敏性休克模型；利用OVA经皮致敏诱发小鼠异位性皮炎
3、病变的实验模型。2、在模型动物里，OVA作为一种抗原，引起特异性免疫反应，用于抗原提呈信号转导研究。3、OVA 蛋白疫苗或其DNA疫苗，通过调节过敏性哮喘的Th1/Th2 失平衡反应，可预防哮喘嗜酸性气道炎症,并作为一种疫苗治疗哮喘。4、OVA可以作为载体蛋白用于与半抗原及其他抗原的交联，使它们在免疫中具有更强的免疫原性。尽管不常用于初级免疫原的制备，在对使用钥孔血蓝蛋白KLH或其他更具免疫原性的载体蛋白生产的抗体进行分析时，OVA是一种普遍使用的载体蛋白以使抗原更经得起检验。OVA独立的结构使其格外适于作为ELISA中难于处理的肽段和其他小抗原的载体。尽管与BSA相比更疏水，在水相缓冲液中的
4、溶解度更低，卵白蛋白在高达70%的DMSO中仍具有一定的溶解度，使其适用于与溶解需要DMSO的半抗原的交联。同时OVA含有大量的伯胺和羧基基团可以成为与戊二醛，N-羟基琥珀酰亚胺酯，EDC以及其他交联试剂交联的靶点。OVA应用在哪些科研 领域？，蛋白，多糖和DNA样本中去除内毒素是最困难的，特别是蛋白。因为蛋白的电荷状态、疏水性等内在特性抑制了内毒素的去除，同时也容易损失目的蛋白。噬菌体细胞受体是指在宿主细胞表面，存在着某些可被噬菌体吸附蛋白所识别，并与之特异性结合的正常生理功能物质。不同噬菌体其细胞受体各不相同，有的在细胞壁上，有的则在荚膜上、鞭毛上或性菌毛上，例如T3、T4和T7等噬菌体，
5、其细胞受体是脂多糖。噬菌体尾蛋白是与细胞膜成分结合的蛋白，通常位于噬菌体的尾部，也存在于头部，或者存在于没有尾部的噬菌体的衣壳上。本专利中利用基因工程重组的T4噬菌体尾蛋白p12，改变尾蛋白结合部位的氨基酸序列，并经过化学修饰，优化其结合内毒素的特异性和高亲和性，还能提高尾蛋白本身的稳定性和溶解性。重组的T4 p12固定在某固相载体上，样本中内毒素与p12结合后，即可达到去除内毒素的目的。用EDTA等螯合剂可使p12与内毒素分离，重生，载体可重复利用来去除内毒素。本专利适应去除的样本很广泛，包括蛋白，质粒DNA，基因组DNA，RNA，蛋白核酸复合物，噬菌体，病毒，糖，疫苗，药物，透析液，盐分，
6、及其他被内毒素污染的溶液。运用噬菌体技术检测和去除内毒素，申请了世界，美国，欧洲，香港等专利。(Publication No.：WO/2004/001418, WO/2005/062051, WO/2006/076905, 1516188, 1020050027223, US2009/0017445 A1) 。经过此专利工艺处理后，OVA蛋白回收率可高达90%以上，同时没有改变OVA蛋白的性质，有效的去除了内毒素。EndoGrade OVA内毒素去除专利EndoGrade OVA与其他商业化OVA比较Supplier Protein CAS Item number Batch number P
7、uritiy Endotoxin contentSigma Ovalbumin A5503 080M7012V 98% 1267.7Serva Ovalbumin 11841.03 111018 98% 8.94Calbiochem Ovalbumin 32467 D00107280 98% 9.24Affymetrix Ovalbumin 10865 4150592 98% 37.6Pangaea Ovalbumin - BC8071 98% 70.33Pangaea Ovalbumin - BB10492 90% 25.23Hyglos Ovalbumin 321000 (10 mg) 1
8、1915 98% 0.169006- 59- 1SDS- PAGEEU/mg LAL- testEndoGrade OVA的内毒素含量明显低于其他商品化的OVA，仅为Sigma的0.01%。 187(12), Pages 6491-64982.Plasmacytoid dendritic cellderived type I interferon is crucial for the adjuvant activity of Toll-like receptor 7 agonists. Deepa Rajagopal, et al. Blood, 11 March 2010, Vol. 115
9、, No. 10, Pages 1949-1957 3.Mycobacterium bovis BCG decreases MHC-II expression in vivo on murine lung macrophages and dendritic cells during aerosol infection. Nicole D. Pecoraa, et al. Cellular Immunology, Volume 254, Issue 2, 2009, Pages 94-1044.Spatial and mechanistic separation of cross-present
10、ation and endogenous antigen presentation. Burgdorf S, et al. Nature Immunology, 2008 May; 9(5), Pages 558-66 5.Use of a genetic cholera toxin B subunit/allergen fusion molecule as mucosal delivery system with immunosuppressive activity against Th2 immune responses. Merima Bublina, et al. Vaccine, V
11、olume 25, Issue 50, December 5, 2007, Pages 8395-8404 什么是内毒素？内毒素是一种脂多糖 (Lipopolysaccharide，LPS)，是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上特有的结构，细菌死亡或分解后释出的毒素，又称之为“热原”。内毒素主要由类脂A (lipid A)、核心寡糖 (core oligosaccharide) 和O- 特异性多糖 (O- specific polysaccharide，O-antigen) 三部分组成。内层 (类脂A) 和中层 (核心寡糖) 含有大量的磷酸基和羧基，因此内毒素的等电点较低，约3.1，在通常pH条件下
12、带负电荷。内毒素抗原性弱，可刺激机体产生抗体，但无中和作用，形成抗毒素。与外毒素不同，内毒素不能被稀甲醛溶液脱去毒性成为类毒素。内毒素不是蛋白质，因此非常耐热。在100的高温下加热1小时也不会被破坏，只有在200的温度下加热2到4个小时，或用强碱、强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。内毒素具有化学异源性，不同来源的内毒素的分子量从几千到几万不等，且内毒素的两亲性使其易在水溶液中形成分子量高达40 万至100 万不等的聚集体。内毒素的性质极不均一，使得很难找到一种简单或通用的去除方法。 为什么要检测和去除内毒素？在生物技术产业中，革兰氏阴性菌被广泛地应用于生物制品 (如多肽和蛋白
13、质) 的生产，这些产品中经常会含有大量的内毒素。即使生物制品本身不含内毒素，也可能由于生产环境或操作过程而受到内毒素污染。内毒素对人体有很大的危害。少量的内毒素 (20 EU/kg 体重) 静脉注射就可以引起发烧、腹泻等反应，大剂量时可引起血液循环障碍和内毒素休克。内毒素的主要致病机理是作为致热原刺激体温调节中枢引起机体发热；直接或间接损害肝细胞，抑制糖原的异生，加速葡萄糖分解，造成持续低血糖症；引起白细胞和血小板减少，激活凝血纤溶系统，导致弥漫性血管内凝血或严重的休克症状。因此，各国对生物制品的内毒素含量都有严格的要求，一般规定每剂注射用针剂的内毒素含量必须低于5 EU/kg 体重。生物制品
14、中内毒素的去除一直是一项十分重要的工作。内毒素是大多数生物制品的污染源，严重影响着医学、药学试验和各种药物的质量。1）药物：化学合成的西药、植物中提取的中药，在其合成或提取工艺过程中被内毒素所污染。2）生产原料：各种血液制品和细胞培养基在制备过程中被内毒素污染。3）生物制剂：干扰素、白介素或其他重组的各种具有治疗作用的蛋白质或多肽，在生产过程中采用大肠杆菌作为表达的载体，存在内毒素的污染。内毒素检测和去除在临床上也有很广泛的应用。举例来说，血液透析用水的内毒素含量关系到晚期肾功能衰竭患者的治疗效果和安全, 检测和去除透析用水中的内毒素含量至关重要。肝炎患者常并发内毒素血症。检测血浆内毒素水平对判断病情轻重和预后有一定的临床意义，指导病毒性肝炎的抗内毒素治疗。急性胰腺炎早期测定血浆内内毒素有助于判断疾病的严重程度，指导治疗。内毒素检测和去除应用在哪些领域？内毒素去除Trap内毒素去除主要分为非选择性去除方法和选择性去除方法。非选择性去除方法有活性炭吸附法（兼容性差）、萃取法（易损失目的蛋白，有毒性）、超滤法（只能去除小分子溶液中的内毒素）和离子交换法（不适合于溶液中存在其他带负电荷的物质）、高温法（200 的温度下加热2- 4h）、酸碱法（强碱、强酸或
