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1、 目录I I I I l l1 1111 t1 11L l l l l l l l l l l l lltllllll 19 010 9 8中文摘要l英文摘要6英文缩写1 1研究论文膜联蛋白A 家族与子痫前期引言1 3第一部分缺氧条件下滋养细胞的生长及胎盘滋养细胞凋亡和病理检测前言1 5刖舌1 5材料与方法1 5结果2 l附图2 2附表2 7讨论2 8小结2 9参考文献3 0第二部分膜联蛋白A 5 在子痫前期患者体内的表达前言3 2日I J 吾3 2材料与方法3 2结果3 9附图4 0附表4 3讨论4 4小结4 5参考文献4 6第三部分膜联蛋白A 2 在子痫前期患者体内的表达前言4 7刚看4
2、7材料与方法4 7结果5 4附图5 5附表5 8讨论5 9小结6 0参考文献6 l第四部分胎盘组织膜联蛋白A 5 提取纯化和体外抗凝实验前言6 3目I J 舌材料与方法6 3结果6 6附图6 8附表6 9讨论7 1小结7 2参考文献7 3第五部分相关抗体的检测及分析前言7 5刚舌)材料与方法7 5结果8 1附图8 3附表8 6讨论8 8小结9 0参考文献9 2结论9 5综述一膜联蛋白A 5 与产科疾病9 6综述二膜联蛋白在妇科疾病的研究进展1 1 1致i 射1 2 6个人简历1 2 7中文摘要膜联蛋白A 家族与子痫前期摘要子痫前期( p r e e c l a m p s i a ，P E )
3、 是妊娠期特有的疾病，是妊娠期高血压疾病最常见的类型。流行病学调查显示其发病率在我国约为9 4 1 0 4 ，国外报道其发病率为7 1 2 。尽管围产保健技术不断进步，该病仍严重影响母儿健康，是导致孕产妇和围生儿病率及死亡率增加的主要原因之一。尽管国内外学者对其病因及发病机制做了大量的研究，目前子痫前期的发病机制不明确，尚未发现明确单一致病因素，系多因素综合作用所致。膜联蛋i 兰t ( a n n e x i n s ) 是一种非常古老而又广泛存在的蛋白，是一种以钙离子依赖性方式与酸性磷脂结合的蛋白质。大量的研究显示，膜联蛋白在胞吞、胞吐作用、细胞间以及细胞与细胞外基质间的相互作用、离子通道的
4、形成等多种生理过程中起作用。研究发现，某些疾病的发生与膜联蛋白家族在细胞中的表达密切相关。在a n n e x i n 家族中，a n n e x i nA 2 和a n n e x i nA 5 与凝血纤溶密切相关。长期以来，研究发现a n n e x i nA 2 $ 1 1 a n n e x i nA 5 与不良妊娠结局如复发性流产、抗磷脂综合症的胎盘变化密切相关，但其与子痫前期的关系尚缺乏深入研究。第一部分缺氧条件下滋养细胞的生长及胎盘滋养细胞凋亡和病理检测目的：研究体内外缺氧环境对滋养细胞在生长、凋亡的影响及对胎盘的影响。方法：采用缺氧培养技术检测体外缺氧情况下滋养细胞的生长。通过
5、流式细胞术检测体内缺氧情况下( 子痫前期患者体内的缺氧状态) 滋养细胞的凋亡。同时通过H E 染色检测子痫前期患者胎盘组织的病理变化。结果：l 体外滋养细胞缺氧状态培养发现，随着缺氧时间的延长，滋养细胞生长受限，膜联蛋白表达水平下调。2 流式细胞术检测发现，子痫前期( 体内缺氧情况下) ，滋养细胞凋亡尤其是早期凋亡发生改变：早发型轻度子痫前期组为3 2 1 ，早发型子痫重度前期组为5 3 2 ，晚发型轻度子痫前期组为2 4 3 ，晚发型重度子痫前期组为4 2 8 ，正常妊娠组为1 0 5 。中文摘要3 在正常妊娠者的胎盘组织中未发现血管内微血栓的形成。而在子痫前期患者胎盘组织中可以见到胎盘血管
6、内微血栓的形成，且随着病情程度的加重，微血栓形成逐渐增多。结论：缺氧情况下，体外滋养细胞生长受限；体内滋养细胞( 胎盘滋养细胞) 凋亡尤其是早期凋亡明显增加。同时，子痫前期患者胎盘组织血管中可见微血栓形成。第二部分膜联蛋白A 5 在子痫前期患者体内的表达目的：探讨膜联蛋白A 5 ( a n n e x i n A 5 ) 在子痫前期及正常妊娠孕妇外周血及胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系。方法：选择2 0 0 7 年1 2 月2 0 0 9 年1 2 月在河北医科大学第二医院住院分娩患者早发型子痫前期( 轻度、重度) 、晚发型子痫前期( 轻度、重度) 及健康妊娠孕妇各3 0 例，共1 5
7、 0 例，收集其外周血及胎盘组织，应用免疫组化研究a n n e x i nA 5 在胎盘组织中的定位、应用W e s t e r nb l o t 、R T - P C R 测定患者外周血及胎盘组织中a n n e x i nA 5 的表达。结果：1 通过免疫组化检测发现，膜联蛋白A 5 ( a n n e x i nA s ) 主要在胎盘滋养细胞表面高表达。与正常妊娠相比，子痫前期患者胎盘滋养细胞表面a n n e x i nA 5 染色减少。2 通过W e s t e r nb l o t 检测子痫前期患者胎盘组织及外周血中a n n e x i nA 5 的表达水平。胎盘组织及外周血中
8、a n n e x i nA 5 水平：早发型轻度子痫前期组分别为0 5 4 士0 1 2 及0 6 2 - - b 0 1 7 ，早发型重度子痫前期组分别为0 4 7 ：L - 0 1 5 及0 5 6 ：L - 0 2 4 ，晚发型轻度子痫前期组分别为0 7 4 + 0 2 3 及1 0 8 土0 3 2 ，晚发型重度子痫前期组分别为0 6 8 i - 0 2 8 及0 7 2 - - ：0 2 1 ，正常妊娠组分别为1 7 3 ：L - 0 3 5 及1 5 5 ：L - 0 2 7 。与正常妊娠相比，子痫前期患者组织中的膜联蛋白A 5 ( a n n e x i nA 5 ) 表达明显
9、减少。 3 通过l m P C R 技术检测胎盘组织中a n n e x i nA 5m R N A 的表达水平：早发型轻度子痫前期组为2 5 o 3 0 4 ，早发型重度子痫前期组为2 4 8 士2 9 6 ，晚发型轻度子痫前期组为2 5 钍3 9 2 ，晚发型重度子痫前期组为2 5 1 + 2 7 4 ，正常妊娠组为3 0 6 士2 6 8 。结论：通过免疫组化和W e s t e r nb l o t 检测发现，膜联蛋白A 5 ( a n n e x i nA 5 )主要在胎盘滋养细胞表面高表达，与正常妊娠相比，子痫前期患者胎盘滋养细胞a r m e x i nA 5 表达下调，可能影响
10、胎盘凝血纤溶系统，促使子痫前期患者高凝状态的形成，与子痫前期的发生、发展相关。第三部分膜联蛋白A 2 在子痫前期患者体内的表达目的：探讨膜联蛋白A 2 ( a n n e x i nA 2 ) 在子痫前期及正常妊娠孕妇外周血及胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系。方法：选择2 0 0 7 年1 2 月2 0 0 9 年1 2 月在河北医科大学第二医院住院分娩患者早发型子痫前期( 轻度、重度) 、晚发型子痫前期( 轻度、重度) 及健康妊娠组患者各3 0 例，共1 5 0 例，收集其外周血及胎盘组织，应用免疫组化研究a n n e x i nA 2 在胎盘组织中的定位、应用W e s t e
11、r nb l o t 、R T - P C R测定患者外周血及胎盘组织中a n n e x i nA 2 的表达。结果：1 通过免疫组化发现，膜联蛋白A 2 ( A n n e x i nA 2 ) 主要在胎盘滋养细胞表面高表达。与正常妊娠相比，子痫前期患者胎盘滋养细胞表面a n n e x i nA 2 染色减少。2 通过W e s t e r nb l o t 检测子痫前期患者胎盘组织及外周血中a n n e x i nA 2 的表达水平。胎盘组织及外周血中a n n e x i nA 2 水平：早发型轻度子痫前期组分别为O 7 7 O 1 5 及O 6 3 O 0 9 ，早发型重度子痫前期组分别为O 7 6 O 1 9 及O 6 6 0 1 3 ，晚发型轻度子痫前期组分别为O 7 4 O 2 3 及O 7 1O 2 3 ，晚发型重度子痫前期组分别为O 8 l O 3 5 及O 5 9 O 1 4 ，正常妊娠组分别为1 8 2 O 1 8 及O 5 0 O 0 4 。与正常妊娠相比，子痫前期患者组织中的膜联蛋白A 2 ( a n n e x i nA 2 ) 表达明显减少。3 通过R T - P C R 技术检测胎盘组织中a n n e x i nA 2m R N A 的表达水平：早发型轻度子痫前期组为2 7 9
