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1、 独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：日期：。，。年月L 日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文全文或部分内容编入中国学位论文全文数据库、中国优秀博硕士学位论文全文数据库等数据库进行检索。可以采用
2、影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 黼黼姆鳓日期：沙o 年月p 日目录摘兰要。1 A b s t r a c t 。4 英文缩略此表7 前言。8 胃i l 吾一8 ( 一) 量子点的研究进展8 1 、概述。8 2 、量子点的光学特性8 3 、量子点的合成方法及生物学应用9 4 、量子点毒理学效应研究现状一1 1 ( 二) 黑色素瘤细胞13 1 、概j 丕13 第一章人黑色素瘤细胞A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 以及人正常表皮细胞H a C a T 的研9 宅15 ( 一) 引言。15 ( 二) A 3 7 5 ，A 3 7 5 s
3、2 以及H a C a T 细胞的培养及生物学性状1 5 1 、材料与仪器16 2 、方法与结果16 第二章Q D s - 6 0 5 与Q D s 5 4 5 对人黑色素瘤细胞A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 以及人正常表皮细胞H a C a T 的毒性研究2 4 ( 一)引言。2 4 ( _ - - ) C C K - 8 检测Q D s 6 0 5 与Q D s 5 4 5 对人黑色素瘤细胞A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2以及人正常表皮细胞H a C a T 的细胞毒性一2 5 1 、材料与仪器一2 5 2 、方法- 2 6 3 、结果分析- 2 7 4 、讨论- 31
4、-( 三)荧光显微镜检测细胞吞噬水溶性硒化镉量子点一3 2 1 、材料与仪器- 3 3 2 、方法一3 3 3 、结果分析一3 4 4 、讨论- 4 0 一5 、小结一4 l 一( 四) 流式细胞仪检测细胞吞噬一4 1 -1 、材料与仪器一4 1 2 、方法- 4 2 -3 、结果分析一4 3 -4 、讨论一4 8 -5 、小结一5 3 一( 五) P I 单染法检测Q D s 5 4 5 对人黑色素瘤细胞A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 以及人正常表皮细胞H a C a T 的细胞毒性一5 4 一l 、材料与仪器一5 4 5 、小结6 6 参考文献6 7 在读期间发表的论文7 0 综
5、述：从诊断到治疗：展望量子点在生物医学最新研究进展一7 l 致谢8 0 摘要近年来，半导体量子点由于其独特的性质越来越受到人们的重视，其研究内容涉及物理、化学、材料、生物等多学科，已成为一门新兴的交叉学科。目前研究较多的是C d S 、C d S e 、C d T e 、Z n S 等。半导体纳米微晶体( 又称量子点) 由于其特有的物理和化学性质，如激发光谱宽、发射光谱窄，而且可通过改变量子点内核心材料的尺寸大小对其发射光波长进行调频等，它开始被作为一种新型的荧光标记物在生物医学中获得广泛使用。随着量子点的应用，人体暴露机会日益增加，其安全性问题也日益受到关注。本论文从人黑色素瘤细胞( A 3
6、 7 5 ，A 3 7 5 s 2 ) 以及正常人表皮细胞( H a C a T )的基本培养入手，对于细胞培养过程中需要的传代、冻存、复苏等基础而必需的实验环节进行了摸索和完善；通过C C K 8 试剂盒，绘制出了三种细胞系的增殖曲线，以及三种细胞系的生长曲线，并观察了处于对数生长期细胞的形态；同时以量子点( Q D s - 5 4 5 和Q D s 6 0 5 ) 为研究对象，以人黑色素瘤细胞( A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 )为模型，人正常表皮细胞H a C a T 为阴性模型，首先采用C C K - 8 法检测两种不同粒径量子点Q D s 6 0 5 ，Q D s 5 4
7、5 分别对A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 ，H a C a T 细胞增殖的影响；其次采用荧光显微镜观察两种不同粒径量子点Q D s 6 0 5 ，Q D s 5 4 5 分别对A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 ，H a C a T 细胞形态的影响，以及三种细胞系分别与两种不同粒径量子点Q D s 6 0 5 ，Q D s 5 4 5 t 特异性结合；然后根据荧光显微镜与C C K - 8 法所得结果，分别筛选低剂量量子点Q D s 6 0 5 ，Q D s 5 4 5 浓度，通过流式细胞仪检钡f J A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 ，H a C a T 细胞与量子点
8、Q D s 6 0 5 ，Q D s 5 4 5 的非特异性作用；然后利用P I 单染法流式细胞术检测低剂量量子点Q D s 5 4 5 导致A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 ，H a C a T 细胞凋亡；最后利用水飞蓟宾能够有效调节氧化带来的损伤，考查了其对量子点在细胞中毒性的干预作用。论文初步探讨了不同粒径C d S e Z n S 量子点Q D s - 6 0 5 和Q D s - 5 4 5 的细胞毒性及相关的毒性机制，并且首次考查药物调节量子点对细胞的氧化损伤，为C d S e Z n S 量子点的安全性提供一定的实验依据。实验结果表明：1 、C C K - 8 法检测C
9、d S e Z n SQ D s - 5 4 5 和C d S e Z n SQ D s 6 0 5 对A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 ，H a C a T 细胞的毒性随着Q D s 一6 0 5 浓度的增加，A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 细胞存活率随之下降。不同浓度的Q D s 6 0 5 作用于A 3 7 5 ，A 3 7 5 s 2 细胞，2 4 h 后其细胞存活率均低于空白组，并具有显著性差异( P 6 2 0 n m ：F L 3 最大发射波长6 4 0 士3 0 n m ；Q D s - 6 0 5 属于F L 2 至F L 3 之间，因此考察其通道：同时相对
10、于Q D s 5 4 5 ，Q D s 6 0 5 粒径较大，因此考察低剂量量子点浓度孵育时间。通过流式细胞仪检测，结果发现：低剂量Q D s 6 0 5 在细胞中孵育2 4 h ，并且采用F L 3 通道不能检测出荧光信号。所以三种细胞吞噬Q D s - 6 0 5 ，通道选择F L 2 ，孵育时间选择4 8 h ；这一发现为这种型号量子点特异性结合黑色素瘤细胞奠定基础。( 图7 1 2 )Q D s 6 0 5 ：孵育2 4 h ，流式细胞仪通道选择F L 3B l a n k2 5n m o l LQ D a - 6 0 55 0n m o l LQ D 5 - 6 0 51 0n m
11、o l LQ D s - 6 0 55n m o l LQ D $ - 6 0 5o v e r l a y图7A 3 7 5 吞噬Q D s 6 0 5 ( F L 3 )F i g u r e7A 3 7 5u p t a k eQ O s 6 0 5 ( u s eF L 3i n2 4 h ) G r e e nl i l l e ：5 0n m o l L ；r e dl i n e ：2 5n m o l L ；b l u el i n e ：1 0n m o l L ；p u r p l el i n e ：5n m o l L ； b l a c kl i n e ：b l a
12、 n kg r o u pB l a n k5 0n m o l LQ D s - 6 0 54 9 2 5n m o l LQ D s 一6 0 51 0n m o l 几Q D s - 6 0 55n m o l LQ D s 6 0 5o v e r l a y图8A 3 7 5 s 2 吞噬Q D s - 6 0 5 ( F L 3i n2 4 h )F i g u r e8A 3 7 5 s 2u p t a k eQ D s - 6 0 5 ( F L 3i n2 4 h )G r e e nl i n e ：5 0n m o V L ；r e dl i n e ：2 5n m o l L ；b l u el i n e ：1 0n m o l L ；p u r p l el i n e ：5n m o l L ；b l a c kl i n e ：b l a n kg r o u p5 0 Q D s 6 0 5 ：孵育4 8 h ，流式细胞仪通道选择F L 3B l a n k2 5m n o i LQ O s - 6 0 55 0n m o l LQ D s - 6 0 51 0m n o l LQ D s - 6 0 55n m o l LQ D
