《血瘀型子宫内膜异位症大鼠模型实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血瘀型子宫内膜异位症大鼠模型实验研究（38页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、Y9 5 7 9 3 0学院代号专业代码1 0 7 t 6学密号0 0 3 12 1 4 0 2 1 询级0 - 。- - - 。- 。o陕西中医学院S h a a n x iU n i v e r s i t yo fC h i n e s e 删c i n e，r 硕士学位论文v “ 血瘀型子宫内膜异位症大鬣模型的实验研究一t I 学位申请人费业名称豫 申请学位类型张瓤红中落 _ _ l 基结合临床专业学位。指j 导_ 教师姓名j 防鉴谶j 教授i 童氅经医：师：。”? 4 n 。i 秀鼍i _ 尊一论史。搓、凌罔期2 0 0 6 年垂厅，中文摘要目的：通过建立多种子宫内膜异位症的大鼠模型
2、，从中筛选最符合临床辨证的模型。以便进一步阐述内异症的病因及发病机理，并寻求药物治疗路径，为后期治疗机理的实验研究提供帮助。方法：将成年健康S D 雌性大鼠5 0 只随机分成5 组，A ：空白组；B ：远膜组；C ：去势组；D ：远腹组；E ：近腹组。通过外科手术法移植子宫内膜或加用卵巢摘除术并复合用己烯雌酚，造成多种血瘀型子宫内膜异位症的大鼠模型。造模后3 周、5 周分别称取大鼠体重、并开腹测量盆腹腔粘连程度及移植物体积大小、进行在位、异位内膜病理组织学观察和血液流变学指标的测定。结果：1 各种造模方法对大鼠体重无影响( P O 0 5 ) 。2 大鼠盆腹腔粘连程度观测：分别将造模后3 周、
3、5 周组间比较，其中D 、E 组与A组之间均有显著性差异( P 0 0 5 ) ，虽然无统计学意义，但有正相趋势，随着造模天数的增加，D 、E 组盆腹腔粘连程度逐渐加重。3 大鼠内膜移植物生长体积测定：A 组未见移植物生长；分别将造模后3 周、5 周组间比较：其中B 、E 组与D 组之间均有极显著性差异( P O 0 5 ) 2 B i gm o 峨t r o u g ha b d o m i n a lc a v i t ya d h e s i o nd e g r e eo b s e r v a t i o n ：T h ed i s t i n c t i o nW I Hm a k
4、 et h em o l dd u r i n gl a a e r3w e e k s ，5w e e kg r o u p st h ec o m p a r i s o n ，D ，Eg r o u pw i l lh a v et h es i g n i f i c a n c ed i f f e r e n c ew i t hAg r o u pb e t w e e n ( P 0 0 5 ) ，a l t h o u g hd o e sn o th a v es t a t i s t i c ss i g n i f i c a n c e ，b u th a st h
5、 ep o s i t i v ep h a s et e n d e n c y ，a l o n gw i t hm a k e st h em o l dn u m b e ro fd a y st h ei n c r e a s e ，D ，Eg r o u po ft r o u g h sa b d o m i n a lc a v i t ya d h e s i o nd e g r e ea g g r a v a t e sg r a d u a l l y 3 B i gm o u s ei n t e r n a lm e m b r a n et r a n s p
6、 l a n tg r o w t hv o l u m ed e t e r m i n a t i o n ：Ag r o u ph a sn o ts e e nt h et r a n s p l a n tg r o w t h ；T h ed i s t i n c t i o nw i l lm a k et h em o l dd u r i n gl a t t e r3w e e k s ，5w e e kg r o u p st h ec o m p a r i s o n ：B ，Eg r o u ph a v et h ee x t r e m e l ys i g
7、n i f i c a n c ed i f f e r e n c ew i t hDg r o u pb e t w e e n ( P 3 5 。i n l 为标准诊断内异症，其敏感性为4 0 ，特异性为踟，因此，C A l 2 5 不能作为诊断内异症的常规筛选方法，又有研究认为内异症患者月经期与月经间期血C A l 2 5 差值明显高于正常妇女，其诊断敏感性达9 3 ，特异性达9 2 。近年来研究表明局部芳香化酶的测定有望为新的内异症诊断标志物，所以内异症无创诊断的建立将成为今后研究的重要课题。最后，关于内异症的治疗，目前的治疗原则：减轻及去除病灶，减轻及控制疼痛，促进生育，预防及减少
8、复发。由于内异症临床病变分布的广泛性和临床病理表现的多样性，因此，治疗方案的选择要考虑到病人的年龄、症状程度、病变分布及轻重、婚姻和妊娠的需求，以及过去的治疗情况。就盆腔疼痛的治疗，内异症患者8 0 有痛经，7 0 有慢性下腹痛，5 0 有性交痛，但这三大疼痛症状与内异症的病灶严重及粘连程度并不相关，甚至与部位亦不相符。而且有些病人在病灶去除后，疼痛仍无缓解，因此加强对内异症疼痛机制的认识尤其重要。就不孕症的治疗，内异症合并不孕者高达4 0 5 0 ，内异症可引起粘连或输卵管阻塞，卵巢功能不全，胚胎着床障碍。故目3陕西中医学院2 0 0 6 届硕士学位论文前认为，助孕技术和妊娠是内异症引起不孕
9、的最好治疗方法。2 子宫内膜异位症的动物模型研究进展2 1 中医对血瘀证模型研究的进展近年来，为了探讨血瘀证的病理本质及活血化瘀方药的疗效和作用机理，现已采用不同方法，从不同途径研制出多种血瘀证模型。如用疼痛法激怒动物制造气滞血瘀证模型【1 川；将大鼠置于水箱中游泳使其劳累耗气以制造气虚血瘀证模型【1 1 】；采用家兔股动脉放血法模拟出血虚血瘀证模型【1 2 1 ；将动物置于寒冷环境中受冻制出寒凝血瘀证模型【捌；用外力压伤动物使其局部血肿，造成经外之血致瘀之模型【1 4 1 ；采用给动物注射病原微生物或内毒素，以制造典型的热毒血瘀证模型【1 5 】等。血瘀模型的病理改变，有血液性状改变，血管受
10、损，组织的实性变。这些血瘀证模型紧扣传统的中医理论，具有血瘀证的证候表现，又具有较高的科学性，有较明显的病理生理变化，其制造经过一系列的反复研究、验证，使其更具有科学性和说服力。2 2 子宫内膜异位症动物模型的研究进展内异症的病因和发病机制尚不明确，需依靠腹腔镜检查或手术病理组织学检查确诊，反复进行创伤性检查，由于伦理学和实际操作的约束，很难在人体中进行内异症的对照研究，所以动物模型的研究，有其重要的价值。2 0 世纪2 0 年代，就有学者以家兔为实验对象，成功地将自体子宫内膜移植到腹腔为早期内异症的病因积累了宝贵资料。经过近年的发展，造模的方法有自发性模型，诱发性模型，种植性模型。自发性模型
11、：自发性子宫内膜异位症自然发生的前提是有月经周期，除人以外只有非人灵长类有周期性的月经。动物有恒沙猴、南美猕猴、狒狒等，但其模型发病率低，观察周期长，饲养条件高，所需经费昂贵，故应用面较窄。诱发性模型：许多动物都可用于诱发子宫内膜异位症，可通过外科手术方法，直接将自体子宫内膜种植到子宫腔以外的部位，或者通过手术闭锁其子宫颈或阴道口，造成经血逆流入腹腔而诱发疾病。动物有猕猴、家兔、大鼠，而猕猴的饲养条件高，耗费的人力、物力、财力大，所需观察时间长，而家兔无月经周期，无自发排卵，其生育能力也不同于人类，故用其体内发生的内异症不足以完全解释人类该疾病的发生。种植性模型：是将人子宫内膜或子宫内膜异位症
12、病灶种植到免疫缺陷动物体内，任其生长并保持原有形态和生化活性，有利于进一步研究该病的发生、发展、复发、4血癖型子宫内膜异位症大鼠模型的实验研究对药物和激素治疗的敏感性等。动物有裸鼠、S C I D 小鼠，其免疫功能缺陷，饲养条件要求高，不能用来研究内异症病灶引起的机体免疫方面的改变，而且体积小，抵抗力低下很难耐受多次手术。理想的动物模型，应该尽可能与人类疾病相似，且规范化，能够准确地再现该疾病的特点，能可靠地反映疾病的发展变化，还应对临床有适用性和可控性，复制时经济易行。选择动物模型应紧密围绕研究目的，权衡各种模型的利弊，充分发挥动物模型的优点，为临床研究提供指导，通过对内异症造模历史状况的回
13、顾，结合考虑我们的实验条件和实用性，我们选择S D ( s p r a g u ed a w l c y ) 大鼠，进行诱发性模型造模。5陕西中医学院2 0 0 6 届硕士学位论文实验研究1 试验目的通过建立多种子宫内膜异位症的大鼠模型，从中筛选最符合临床辨证的模型。观测以子宫内膜的组织病理变化和移植物生长体积为主，以便进一步阐述内异症的病因及发病机理，并寻求药物治疗路径，为后期治疗机理的实验研究提供帮助。2 材料与方法2 1 实验材料2 1 1 实验动物：健康S D 雌性大鼠5 0 只( 体重1 5 0 - - - 1 8 0 9 、性成熟、普通级、鼠龄4 0 印天) ，西安交通大学医学院动
14、物实验中心提供。动物合格证：医动字第0 8 0 0 5号2 1 2 主要药品和试剂0 9 生理盐水5 0 0 m l 瓶西安京西双鹤药业有限公司批号0 5 0 4 0 5 4 8 1己烯雌酚片0 5 m g ) ! “合肥久联制药有限公司批号2 0 0 4 0 6 0 3注射用青霉素钠8 0 万”瓶哈药集团制药总厂批号A 0 5 0 3 1 7 1 47 5 酒精5 0 0 m l 瓶陕西中医学院附属医院提供1 0 福尔马林5 0 0 n d 瓶陕西中医学院病理教研室提供1 0 水合氯醛5 0 m l 瓶西安交通大学医学院第二附属医院生化室提供2 1 3 实验仪器和设备A C S I G 电子
15、称( 6 k g , l g )西安衡器厂A O 8 0 0 病理切片机上海医疗器械厂X S Z - 8 1 光学显微镜广西梧州市光学仪器厂普通眼科手术器械；两脚规陕西中医学院组胚教研室提供2 2 实验方法2 2 1 实验前动物的处理实验前，在本院动物实验室饲养1 周以适应新的环境，动物室内环境控制在光照1 4h ( 6P m 一8P m ) ，黑暗1 0h ( 8P m 一6A m ) ，相对湿度5 5 1 0 ，温度( 3 0 + 2 ) C ，给予食物( 动物实验中心提供) 和新鲜水，在1 周时间内，每天定时( 4 Pm ) 观察阴道脱落细胞确定性周期，以4 5d 为一个性周期者作为实验
16、对象，择期造模。2 2 2 动物分组适应性喂养7 天，随机分成5 组，每组1 0 只。6血疼型子宫内腱异位症大鼠模型的实验研究A 组：脂肪组织种植于腹膜处简称“空白组”B 组：子宫远端内膜组织种植于肠系膜处简称“远膜组”c 组：子宫远端内膜组织种植于腹膜处并行双侧卵巢摘除术简称“去势组”D 组：子宫远端内膜组织种植于腹膜处简称“远腹组”E 组：子宫近端内膜组织种植于腹膜处简称“近腹组”2 2 3 各组动物处理方法在确定为动情前期时( 即造模前2 4 小时) ，给予己烯雌酚O 1 m g k g d 进行灌胃【1 6 1 ，使子宫内膜生长肥厚，更利于移植，于动情期行开腹手术。A 组：将切取的5 m m X 5 m m 脂肪组织片段种植于腹膜的血管丰富处。B 组：将切取分离的5 m m X 5 m m 子宫远端内膜组织片段种植于肠系膜血管丰富处。C 组：步骤同D
