《泛酸激酶4基因对抗β细胞凋亡的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《泛酸激酶4基因对抗β细胞凋亡的研究（107页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国协和医科大学博士学位论文 丛学位论文原创性、真实性声明本人郑重声明：此处所提交的j 堑L 学位论文泛酸激酶4 基因对抗p 细胞凋亡的研究，是本人在导师指导下，在中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系攻读j 盘L 学位期间进行研究工作所取得的成果。据本人所知，论文中除已注明部分外不包括他人已发表或撰写过的研究成果；对本文的研究工作做出重要贡献的个体和集体，均已在文中以明确方式注明。本人并对论文中所有实验数据和结果的真实性负责作者签名：繇蔓日期：口舌年，月订日中国协和医科大学博士学位论文谴学位论文及论文相关实验材料使用授权书泛酸激酶4 基因对抗D 一细胞凋亡的研究系本人在中国协和医科
2、大学基础医学院生物化学与分子生物学系攻读簦学位期同在导师指导下完成的j 茎兰三- 学位论文本论文的研究成果归中国协和医科大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表本人完全了解中国协和医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文的复印件和和电子版本，允许论文被查阋和借阅。本人授权中国协和医科大学，可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。论文的全部内容或部分内容将根据论文所承担国家或地方级课题的要求，与导师商定后，予以公布论文相关的所有实验材料归实验室所有，未经实验室同意，不得提供给他人或带离实验室外导师签日期：口厂年，月， 日中国协和医科大学博士论文泛酸激酶4
3、 基因对抗D 细胞凋亡的研究中文摘要本工作旨在探讨大鼠泛酸激酶4 ( r P a n K 4 ，m tp a n t o t h e n a t ek i n a s e4 ) 基因对抗胰岛B 细胞凋亡的作用，并在基因转录，蛋白表达、蛋白活性水平三个层次，比较系统地综合探讨r P a n K 4 抗凋亡的作用机制。我们实验室过去多年来对2 型糖尿病发生的分子生物学机制的研究已取得了一定的进展，从多方面验证了P a n K 4 基因与2 型糖尿病相关，并发现该基因是2 型糖尿病的保护性因子在本次研究中我们构建了全长r P a n K 4 的真核表达载体，并转入胰岛瘤细胞系R I N m 5 F
4、细胞中，构建了稳定表达细胞株r P a n K 4 - R I N m 5 F 在加入2 5 m g m l 凋亡诱导剂S T Z 作用2 4 小时后，稳定表达r P a n K 4 的R I N m 5 F 细胞相比起未转染的R I N m S F 细胞凋亡率有了明显的下降。定量r e a l - t i m eP C R 的结果显示，r P a n K 4 明显抑制了p r o c a s p a s e - 9 的转录表达水平，但对B c l 2 ，B a x ，B a d ，p r o c a s p a s e 3 ，a n dp r o c a s p a s e - 8 的转录没
5、有影响。这种作用与葡萄糖的刺激无关由于p r o c a s p a s e - 9 转录水平的下降进而抑制了p r o c a s p a s e - 9 的蛋白表达水平，同时，r P a n K 4 不会影响p r o c a s p a s e - 3 的蛋白表达水平在加入凋亡诱导荆作用后，c a s p a s e 9 的活性随其蛋白表达水平的下降而降低，由于c a s p a s e 9 是c a s p a s e - 3 的直接激活物，c a s p a s e ，3 的活性也出现了明显的降低对c a s p a s e 9 的上游激活物胞浆内细胞色素c 的含量进行检测后发现，c
6、 a s p a s e 9 活性的降低与细胞色素c 无关，即与线粒体通路无关。结果表明，r P a n K 4 通过直接抑制p r o c a s p a s e 9 的转录水平，降低了c a s p a s e 9 的活性，进而抑制了c a s p a s e - 3 的活性，并最终抑制了胰岛D 细胞的凋亡A C t i i ：2 型糖尿病，泛酸激酶，9 - 细胞，凋亡，c a s p a s e! 里堡塑墨型，大兰堕主丝奎一P a n K 4b e i n ga na m i - b e t a - c e l la p o p t o s i sa g e n t ：ap o t e
7、n t i a lt a r g e tf o rd i a b e t i ct h e r a p yA b s t r a c tS i g n i f i c a n ti n c r e a s e si np c e l la p o p t o s i sh a sb e e nr e p o r t e da s s o c i a t e dw i t hT y p e2d i a b e t e s P a n t o t h e n a t ek i n a s e ( P a n K ) a sak e yr e g u l a t o r ye n z y m ei
8、nt h ec o e n z y m eA ( C o A )b i o s y n t h e t i cp a t h w a yi sap o t e n t i a lm o l e c u l a rt a r g e to fr e g u l a t i n g1 3 - c e l la p o p t o s i si nT y p e2d i a b e t e s H e r e , w et e s t e dah y p o t h e s i st h a tr a tp a n t o t h e n a t ek i n a s e4 ( r P a n K
9、4 ) i sa l la n t i p - e e l la p o p t o s i sa g e n t T ov e r i f yt h i sh y p o t h e s i s ，r e c o m b i n a n tr P a n K 4W a st r a n s f e e t e di nR I N m 5 Fc e l l s ( r P a n K 4 - R I N m 5 na n dR I N m 5 Fc e l l st h a ta p o p t o s i sW a si n d u c e du s i l 培S T Z T h ea p
10、o p t o t i er a t eW a sf o u n ds i g n i f i c a n td e c r e a s e di nR I N m 5 Fc e l l st h a ts t a b l er P a n K 4w e r ee x p r e s s e d S i g n i f i c a n td e c r e a s ei np r o - c a s p a s e 9m R N Ae x p r e s s i o nW a so b s e r v e di nt h er P a n K 4 - R I N m S Fc e l l s
11、H o w e v e r , n os i g n i f i c a n tc h a n g e sw e r ef o u n di nt h et r a n s c r i p t i o na n dt r a n s l a t i o nl e v e l so f t h eB c l - 2 ，B a x ，B a d ，p r o - c a s p a s e - 3 ，a n dp r o - c a s p a s e 8g e n e s S i m i l a rg e n ee x p r e s s i o np r o f i l e sw e r ef
12、 o u n db yd o p i n gg l u c o s ei nc u l t a r a lm e d i a T h e r eW a sl i t t l ee f f e c to fo v e r e x p r e s s e dr P a n K 4i nt h ee x p r e s s i o no fp r o - c a s p a s e 一3g e n ea n dt h em i t o c h o n d r i a lf u n c t i o n A f t e re x p o s i n gR I N m 5 Fc e l l st oS T
13、 Zi I lt h ep r e s e n c eo fo v e r l ye x p r e s s e dr P a n K 4 ，c a s p a s e - 9a n dc a s p a s e 一3a c t i v i t i e si nt h e s ec e l l sw e r es i g n i f i c a n t l ys u p p r e s s e d T h es u p p r e s s i o no ft h ec a s p a s e - 3a c t i v i t yw a sa l s oo b s e r v e da sar
14、e s u l to fd e p r e s s i o no ft h ee a s p a s e - 9a c t i v i t y T h e s er e s u l t ss u g g e s tt h a tt h eo v e r e x p r e s s i o no f r P a n K 4c a u s e sp a r t i a li n h i b i t i o no f t h ea p o p t o t i cs i g n a l i n gb y d e c r e a s i n gt h et r a n s c r i p t i o n
15、 a ll e v e lo ft h ec a s p a s 0 9a n ds u b s e q u e n ti n h i b i t i o no ft h ee f f e e t e r ,e a s p a s e s - 3 K e y w o r d s ：t y p e2d i a b e t e s ；P a n K 4 ；I B - c e l l ；a p e p t o s i s ；c a s p a s e2中国协和医科大学博士论文前专糖尿病( D M ，d i a b e t e s m e l l i t u s ) 是以血浆葡萄糖浓度异常升高为主要特
16、点的一组代谢紊乱性综合征，它是导致晚期肾脏疾病、失明和非损伤性截肢的首要原因，世界卫生组织将糖尿病列为三大疑难病之一，并把每年的1 1 月1 4 日定为“世界糖尿病日”。糖尿病主要分为1 型和2 型，前者占发病人数的5 1 0 ，由胰岛昏细胞破坏造成胰岛素分泌绝对不足而致病，需依赖外源性胰岛素，因此也称为胰岛素依赖型糖尿病；后者占糖尿病患者的9 0 以上，称为非胰岛素依赖型糖尿病( N I D D M ，1 1 0 n i n s u l i n - d e p e n d e md i a b e t e sm e l l i t u s ) 。2 型糖尿病的发病机理尚未完全阐明，目前普遍认为是由遗传因素和环境因素共同作用而发病，其中胰岛素抵抗( I R ，i n s u l i nr e s i s t e n c e ) 和D 细胞分泌功能不全是2 型糖尿病发病和病程中的两个重要环节( g a h nS E 2 0 0 3 ) 众所周知，2 型糖尿病已经成为发展
