《荷人卵巢癌裸鼠循环无细胞DNA的来源及其与瘤负荷、凋亡的关系论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《荷人卵巢癌裸鼠循环无细胞DNA的来源及其与瘤负荷、凋亡的关系论文（74页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中文摘要荷人卵巢癌裸鼠循环无细胞D N A 的来源及其与瘤负 荷、凋亡的关系摘要目的：循环无细胞D N A ( c i r c u l a t i n gc e l l f r e eD N A c f D N A ) 是存在于体液中的碎裂的核酸片段。本实验利用人卵巢癌细胞株S K O V 3 建立荷人卵巢癌裸鼠移植模型。采用半定量P C R 的方法，检测荷人卵巢癌裸鼠血清和腹水中无细胞D N A 的含量，并与肿瘤的重量、凋亡率进行对比，研究人卵巢癌移植瘤裸鼠模型血清及腹水中c f D N A 的血流动力学改变，探讨c f D N A 在卵巢上皮性癌临床诊断及病情监测中的意义。通过检测荷瘤裸鼠
2、经化疗前后血清c f D N A 水平的变化规律，并与细胞凋亡进行对比，从而为c f D N A 是否可作为无创性的卵巢癌患者病情监测及疗效观察的生物学指标提供理论依据。方法：将人卵巢癌细胞株S K O V 3 种植于6 8 周龄雌性裸鼠的皮下及腹腔中，观察裸鼠成瘤和肿瘤生长情况。分别于1 4 天( 荷瘤1 组) ，2 1 天( 荷瘤2 组) 和3 0 天( 荷瘤3组) 取皮下种植瘤模型血清及肿瘤，1 4 天取腹水种植瘤模型血清和腹水。皮下种植瘤模型化疗组在种植后第3 0 天用顺铂3 m g k g 化疗1 次，于化疗后第1 天( 化疗l 组) ，第3 天( 化疗2 组) 和第l O 天( 化
3、疗3 组) 取血清及肿瘤。用Q I A G E N微量提取试剂盒提取血清及腹水中游离的D N A 片段。我们针对临床常用的诊断和监测指标血清C A l 2 5 蛋白的基因序列设计了扩增产物为1 0 1 b p 、2 6 1 b p 、1 8 9 b p 和3 3 6 b p 大小中文摘要的四组D N A 片段引物。用半定量P C R 方法扩增I B - a e t i n ，C A l 2 5 D N A 片段和A L U 重复片段。肿瘤相关c f D N A 的量用A L U 2 4 7 A L U l l 5 来表示，C A l 2 5 c f D N A 的相对水平用C A l 2 5D
4、 N A 1 3 a c t i n 来表示。检测荷瘤1 、2 、3 组；化疗1 、2 、3 组和腹水组的血清及腹水组腹水中c f D N A 的含量，并与相应的肿瘤重量进行对比。用T U N N E L 法检测荷瘤3 组及化疗1 、2 、3 组组织细胞的原位凋亡，将其凋亡率与相应的c f D N A 含量进行相关性分析。试验结果采用S P S S1 3 0 统计软件进行独立样本t 检验，单因素方差分析，和s p e a r m a n相关分析进行统计学处理。结果：1 各组基因片段在人卵巢癌裸鼠移植瘤模型血清及腹水中的表达情况在人卵巢癌裸鼠移植瘤模型的血清及腹水中均能检测到人类特有的基因片段1
5、 3 - a c t i n 、A L U l l5 、A L U 2 4 7 以及C A l 2 5 c f D N A 中的1 0 1 b p 片段。其中7 8 例卵巢癌血清标本中，有4 1 例能检测到C A l 2 5 c f D N A 的2 6 1 b p 基因片段，18 9 b p片段含量很少，3 3 6 b p 未能检测，三个指标相应的1 3 - a c t i n 均能检测出来。故本实验所作数据分析中的C A l 2 5 c f D N A 仅就1 0 1 b p 片段进行比较和讨论。3 A O 组( 种植3 A O 细胞株后3 0 天取材) 与S K O V 3 瘤负荷3 组
6、( 种瘤时间相同) 血清 中的肿瘤相关c f D N A 的含量没有显著性差异( t = 0 1 9 3 ，尸 O 0 5 ) ，C A l 2 5 c f D N A 的含量没有显著性差异( t = 1 4 2 3 ，P 0 0 5 ) 。腹水组荷瘤裸鼠腹水中的肿瘤相关c f D N A 的含量与血清中的含量相比没有显著性差异( t = 1 4 1 2 ，t 9 0 0 5 ) ，腹水中的C A l 2 5 c f D N A 的含量与血清中文摘要中的含量没有显著性差异( t - 3 5 3 5 ，P 0 0 5 ) 。( T a b l e1 ) 。2 各组人卵巢癌裸鼠移植瘤模型血清中c
7、f D N A 水平的变化情况及其与瘤负荷的关系分别于皮下种植S K O V 3 卵巢癌细胞株后1 4 天( 荷瘤1组) ，2 1 天( 荷瘤2 组) 和3 0 天( 荷瘤3 组) 取人卵巢癌裸鼠移植瘤模型血清中的C A l 2 5 c f D N A 及肿瘤相关c f D N A ，结果发现血清中的C A l2 5 c f D N A 的表达各组间有差异( F = 1 5 1 9 1 ，P O 0 5 ) 。在化疗第l O 天其值明显低于化疗前水平，差异有显著性( C A l 2 5 e f D N A 的P = 0 0 4 7 ，肿瘤相关c f D N A 的P = - 0 0 1 3 ，
8、均 0 0 5 ) ，C A l 2 5 c f D N A 的含量没有显著性差异( 仁1 4 2 3 ，P 0 0 5 ) 。腹水组荷瘤裸鼠腹水中的肿瘤相关c f D N A 的含量与血清中的含量相比没有显著性差异( t _ 1 4 1 2 ，P 0 0 5 ) ，腹水中的C A l 2 5 e t D N A 的含量与血清中的含量没有显著性差异( t = 3 5 3 5 ，尸 O 0 5 ) 。( T a b l e1 ) 。2 各组人卵巢癌裸鼠移植瘤模型血清中c f D N A 水平的变化情况及其与瘤负荷的关系分别于皮下种植S K O V 3 卵巢癌细胞株后1 4 天( 荷瘤1组) ，2
9、 1 天( 荷瘤2 组) 和3 0 天( 荷瘤3 组) 取人卵巢癌裸鼠移植瘤模型血清中的C A l 2 5 c f D N A 及肿瘤相关c f D N A ，结果发现血清中的C A l 2 5 c f D N A 的表达各组间有差异( F = 1 5 1 9 1 ，P O 0 5 ) 。在化疗第1 0 天其值明显低于化疗前水平，差异有显著性( C A l 2 5 c f D N A 的P = 0 0 4 7 ，肿瘤相关c f D N A 的P = 0 0 1 3 ，均 O 0 5 ) 。此时细胞凋亡率与化疗前相比没有显著性差异。相关分析显示：血清c f D N A 的含量与肿瘤的凋亡率呈正相
10、关。2 0 0 6 年A p a m a 等【1 4 】应用紫杉醇对接种了H e y A 8 卵巢癌细胞株的裸鼠进行化疗，而后检测血清肿瘤特异性c f D N A的水平，结果发现血清c f D N A 与肿瘤细胞的凋亡率呈正相关，化疗后凋亡率达到了2 0 以上，由于我们选用的化疗药物为顺铂，化疗后细胞的凋亡率最多达到1 0 ，与文献有所不同。由此我们推断，一方面血清c f D N A 可以直接应用于评估细胞毒性药物的活性，另一方面可应用于临床，评价恶研究论文性肿瘤患者治疗后的反应情况，为指导治疗及预测早期复发提供了理论依据。结论1 荷人卵巢癌裸鼠血清及腹水中可以检测到人卵巢癌细胞株的特异性c
11、f D N A ，并与T U N E L 检测的凋亡细胞数量成正相关，由此可以证实c f D N A 来源于肿瘤细胞的凋亡。2 荷人卵巢癌裸鼠血清中C A l 2 5 e f D N A 和肿瘤相关c f D N A 的含量与瘤负荷成正相关，且含量在化疗后先显著升高而后下降，提示c f D N A 可能成为卵巢癌病情监测和疗效评价的标记物，为临床工作中卵巢癌的诊断及预测早期复发提供理论依据。研究论文参考文献U m e t a n iN ，G i u l i a n oA E ，H i r a m a t s uS H ，e ta 1 P r e d i c t i o no fB r e a
12、s tT u m o rP r o g r e s s i o nb yI n t e g r i t yo fF r e eC i r c u l a t i n gD N Ai nS e r u m C l i nO n c o l ，2 0 0 6 ，2 4 ：4 2 7 0 - 4 2 7 6J i nZ ，E 1 D e i r yW S O v e r v i e wo fc e l ld e a t hs i g n a l i n gp a t h w a y s C a n c e rB i o lT h e r ，2 0 0 5 ，4 ：13 9 16 3G i a c o
13、 n aM B ，R u b e nG C ，I c z k o w s k iK A ，e ta 1 C e l l f r e eD N Ai nh u m a nb l o o dp l a s m a ：l e n g t hm e a s u r e m e n t si np a t i e n t sw i t hp a n c r e a t i cc a n c e ra n dh e a l t h yc o n t r o l s P a n c r e a s ，19 9 8 ，17 ：8 9 9 7D e l i g e z e rU ，Y a m a nF E r
14、t e nN ，e ta 1 F r e q u e n tc o p r e s e n c eo fm e t h y l a t e dD N Aa n df r a g m e n t e dn u c l e o s o m a lD N Ai np l a s m ao fl y m p h o m ap a t i o n t s C l i nC h i mA c t a ，2 0 0 3 ，335 ：8 9 9 4R a m i r e zJ L ，T a r o nM ，B a l a n aC ，e ta 1 S e r u mD N Aa sat o o lf o rc
15、 a n c e rp a t i e n tm a n a g e m e n t R o c zA k a dM e dB i a l y m s t ，2 0 0 3 ，4 8 ：3 4 4 1G o e b e lGZ i t tM ，M u l l e rH M C i r c u l a t i n gn u c l e i ca c i d si np l a s m ao rs e r u m ( C N A P S ) a sp r o g n o s t i ca n dp r e d i c t i v em a r k e r si np a t i e n t sw
16、i t hs o l i dn e o p l a s i a s D i sM a r k e r s ，2 0 0 5 ，2 l ：1 0 5 1 2 0G a r c i a O l m oD ，G a r c i a O l m oD C ，O n t a n o nJ ，e ta 1 T u m o rD N Ac i r c u l a t i n gi nt h ep l a s m am i g h tp l a yar o l ei nm e t a s t a s i s T h eh y p o t h e s i so ft h eg e n o m e t a s t a s i s H i s t o lH i s t o p a t h o l ，1 9 9 9 ，1 4 ：11 5 9 - 11 6 4Z i e g l e rA ，Z a n g e m e i s t e
