《CpG基序重组质粒增强小鼠免疫和抗病力的效应》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CpG基序重组质粒增强小鼠免疫和抗病力的效应（66页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、C p G 基序重组质粒增强小鼠免疫和抗病力的效应遗传学专业研究生：靳艳指导老师：高荣教授为研制安全高效免疫调节剂增强动物免疫抗病能力，本实验设计合成含1 1 个Cp G 基序的寡聚核苷酸，重组构建含C p G 的V R l 0 1 2 质粒( V R l C ) ：制备壳聚糖纳米颗粒包裹重组质粒( C N P - V R l C ) ，肌注接种3 周龄昆明小白鼠，设壳聚糖包裹空质粒和生理盐水对照组；接种后2 8 天口服大肠杆菌攻毒观察小鼠天然免疫的变化和对强毒感染的抵抗力，S a n d w i c hE L I S A测定血清免疫球蛋白和白细胞介素含量。研究结果表明：C N P - V R
2、 l C 能显著提高小鼠血清I g G 、I g M 和I g A 含量，促进小鼠血清I L 一2 、I L 一6 及I L 一4显著增多，同时淋巴细胞和单核细胞数量增加，与对照组小鼠差异显著( P C G C T G C A G A A C G T T G T C G T C A A C G T T G T C G T C A A G C T T G A C G T T A T C G A TG G C G T T G A C G T T G A C G T C A T C G A T G T C G T T C T G C A G C G C G C T G C A G A A C G T
3、 T G T C C G C T G C A G A A C G A C A T C G O 0 5 )0i a l “ f 人学顾f 学位论文0 5 8 30 ，8 2 90 6 2 10 ，6 9 60 7 3 50 7 4 9O 9 4O 6 1O 7 8 10 5 8 80 6 6 20 6 7 20 7 3 50 8 7 70 5 5 70 4 5 30 3 9 90 4 2 50 3 9 50 5 4 90 7 5 8071 42 12 83 54 2，R R 变化雠 缸网川人学坝I 学位论文0 4 21 1 1 31 2 6 51 1 3 91 0 2 90 8 4 61 4 2
4、 40 4 0 61 0 5 51 1 8 21 0 8 80 9 5 40 7 4 31 1 3 8O 4 1 60 4 1 30 7 0 50 8 2 90 8 0 40 5 5 4O 9 6071 42 l2 83 54 2、! 酬音量变化姐。2旧J 1 1 人学顾I 。学位论文0 2 3 40 5 2 70 4 0 20 7 0 61 4 2 71 3 8 31 5 6 l0 2 5 80 5 0 90 3 3 l0 6 2 81 0 5 21 2 6 21 3 3 50 1 90 2 7 9O 2 1 50 4 0 6O 3 3 l0 7 4 31 0 3 2071 42 l2 83
5、 54 2弋觳*艚一些型生兰堡! ：兰些丝竺I _ m7c )攻毒后天数工葑1 4口A I：口B Il 口C i图34 实验小鼠血清免疫球蛋白和攻毒后抗体含量的变化F i g 3 4C h a n g eo ft h ec o n t e n to fi m m u n o g l o b u l i n sa n da n t i b o d yi nt h es e r ao fe x p e r i m e n t a lm i c ea l t e ri n o c u l a t i o na n dc h a l l e n g e4，87654j2l0OOOO0OOOO。n看o)
6、牛蔷蛙憾呻J 1 1 人学颂I j 学位论文2 3 血清细胞因子含量测定2 3 1 非特异性免疫组细胞因子含量测定( 图3 5 )0 4 7 80 7 2 50 9 0 8O 7 7 30 9 7 81 0 1 60 9 6 60 5 0 80 5 7 60 6 6 2O 7 1 81 0 1 80 8 8 80 9 2 80 4 7 60 5 3 60 5 0 80 5 5 20 6 2 40 5 4 30 5 9 1O71 42 12 8 3 54 22 i 女mm m x m 、_ l ，【】J 1 1 人学顾f 学位论文0 4 5 8O 5 6 l0 6 8 3O 6 6 10 7 5
7、 3O 8 40 9 5 90 4 1 30 5 4 80 5 0 80 5 7 60 6 7 60 6 7 90 6 8 5O 4 20 4 7 80 3 4 70 3 7 60 4 8 50 4 9 80 5 6 8O71 42 12 83 54 2J L 一4 i 女m雠枷6P qJ I 人学硒iI ：学位论文0 4 5 80 5 6 l0 6 8 3O 6 6 l0 7 5 3O 8 40 9 5 90 4 1 30 5 4 80 5 0 80 5 7 60 6 7 60 6 7 90 6 8 5O 4 20 4 7 80 3 4 70 3 7 60 4 8 50 4 9 80 5 6
8、 8071 42 12 83 54 2! ! ：4 自齄盘* 卜图3 5 实验小鼠接种和攻毒后血清白细胞介素一2 、4 、6 含量的变化F i g 3 5C h a n g eo ft h ec o n t e n to fI L - 2 儿。一4a n d 儿。一6i nt h es e f ao fe x p e r i m e n t a lm i c ea f t e ri n o c u l a t i o na n dc h a l l e n g e由图3 5 可知，肌注C N P - V R l C 质粒免疫组小鼠血清中I L 一2 、I 一4 和I L 一6 的含量均较对照组
9、明显升高( P ( O 0 5 ) 。V R l 0 1 2 空白质粒组小鼠血清中3 种白细胞介素的含量与生理盐水对照组差异不显著( P O 0 5 ) 。四川人学坝I 学位论文2 4 免疫小鼠外周血免疫细胞数量的动态变化2 4 1 非特异免疫小鼠外周血免疫细胞数量的动态变化( 图3 6 )7 691 0 891 0 81 0 81 2 36 28 87 88 4l O8 61 1 46 25 666 28 686 6071 42 12 83 54 2琳t 自胞化觚脂8叫川人学顽f 学位论文1 82O 82 22 222 61 21 80 61 621 62 41 21 4O 51 41 2O
10、 81 2O71 42 12 83 54 22 B 胞女m 女僧馏9四川人学母! I 学位论文1 61 8l1 41 81 61 81 61 8O 81 41 211 41 2O 80 80 8O 811O71 42 l2 83 54 2世c 化删盘图3 6 实验小鼠血液免疫细胞数量的变化F i g 3 6c h a n g eo ft h en u m b e ro fi m m u n ec e l l si nt h eb l o o do fe x p e r i m e n t a lm i c ea f t e ri n o c u l a t i o na n dc h a l
11、l e n g e叫川人学顾J 。学位论文从图3 6 可见：小鼠在注射壳聚糖纳米颗粒包装V R I C 质粒后，其外周血淋巴细胞和单核细胞数量均较B 和C 对照组( C N P 包裹空白质粒对照组与生理盐水组) 明显升高( P O 0 5 ) ；大肠杆菌攻毒后，对照组的中性粒细胞数量明显增多，与C N P V R I C 质粒接种组小鼠差异显著( P I N I R ：而当C p G D N A 为大剂量时( 1 0 L g 或1 0 0 L g ) ，口服和I N 相当，且高于I R 途径”。9 、C p GD N A 的应用前景由于C p GD N A 具有激活多种免疫细胞，诱生多种细胞因
12、子，尤其可调节免疫应答向T h l 型免疫应答转换等免疫学效应。由此预测其可能将在疫苗佐剂的研制、哮喘等T h 2 型细胞免疫应答相关性疾病的防治等中发挥作用。9 1 疫苗佐剂的应用C p GD N A 可激活巨噬细胞、B 细胞等，且可诱导I L - 6 ，I L 一1 2 ，T N F d 和I F N Y 等多种细胞因子的产生。出于巨噬细胞具有抗原递呈作用，B细胞可产生I g ：而I L - 6 可促进淋巴细胞的增殖和分化，I L 1 2 和I F N Y等可诱导T h l 型免疫应答，由此可设想，C p GD N A 可能作为疫苗的有效佐剂而起作用。在常规疫苗中的应用：C h u 等研究
13、了c pGO D N 作为鸡卵溶菌酶( H E L ，h e ne g gl y s o z m e ) 佐剂的效应。结果显示，以C F A H E L ，I F A H E L ，I F A H E L C p GO D N 或I F A H E L n o n 2 c p GO D N 分别腹膜内注射小鼠后，各免疫组小鼠抗一H E L 总I g 及I g G l 的产生无显著差异，但C F A H E L 和I F A H E L C o GO D N 两组抗H E LI g G a 的水平明显高于其余两组，四川1 入学硕l 学位论文且I F A H E L C p GO D N 组高于C
14、 F A H E L 组。检测各免疫组小鼠脾细胞分泌的H E L 特异性细胞因子( 主要由C D 4 + T 细胞产生) 亦发现，I F A H E L ，I F A H E L n o n C p GO D N 组I L 2 5 的产生较高，而C F A H E L ，I F A H E L C pGO D N 组I F N 2Y 的产生较高，且I F A H E L C pGO D N组产生的I F N 2Y 水平约为C F A H E L 组的2 4 倍。这些结果提示，C p GO D N选择性地诱导T h l 型免疫应答，其效应优于C F A 。进一步研究表明，C p GO D N 对
15、具有T h l 型或T h 2 型免疫应答倾向的小鼠均可诱导产生T h l 型为主的免疫应答。D a v i s 等比较了单用或联合应用C p GO D N 和铝化合物，对H B s A g 免疫小鼠的佐剂效应。结果显示，以铝化合物作为佐剂主要诱导T h 2 型免疫应答：而C p GO D N 作为佐剂主要诱导T h l 型免疫应答。若二者联合应用，免疫应答可明显增强，但T h l 型免疫应答强于T h 2 型免疫应答。另外将C p GO D N 作为肿瘤疫苗的佐剂亦显示出较好的效应。不过，T h r e a d g i1 1 等以C p GO D N 作为绿脓杆菌脂多糖的佐剂，发现应用C p GO D N 可抑制小鼠对绿脓杆菌脂多糖的免疫应答性，其机制不清。在基因疫苗中的作用：基因免疫是近年研究较为活跃的领域。它是将编码外源蛋白的基因表达载体直接导入机体，以激发机体产生特异性免疫应答。基因疫苗接种后，机体内仅表达p g n g 水平的外源蛋白，但其却能诱导强而特久的细胞和体液免疫应答。S a t o 等研究发现，编码B 一半乳糖苷酶( BG a l ) 的表达载体，若含氨苄抗性基因(
