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1、1沙枣多糖对小鼠免疫功能影响的研究作者：廉宜君，李炳奇，肖芙蓉，吕新建【摘要 】 目的研究沙枣多糖(EAPS)对正常小鼠免疫功能的影响。方法将沙枣多糖分为 3 个剂量组(60，120，240 mgkg-1)，连续给小鼠 ig 7 d，进行免疫脏器指数的检测、碳粒廓清试验、血清溶血素形成和绵羊红细胞诱导的迟发型超敏反应，探讨沙枣多糖对正常小鼠免疫功能的影响。结果沙枣多糖能显著提高小鼠免疫脏器指数，单核巨噬细胞系统的吞噬功能，增强小鼠迟发型超敏反应，促进溶血素的生成。结论沙枣多糖能提高机体的非特异性和特异性细胞免疫功能。 【关键词】 沙枣 多糖 免疫功能沙枣 Elaeagnus angusti f
2、olia L.又名香柳、桂香柳、银柳、七里香等，属胡秃子科落叶小乔木或灌木，在西北各省的干旱沙区广为栽培。据新疆中草药手册记载，沙枣能“强壮，镇静，固精，健胃，止泻，调经，利尿” 。维吾尔医多将其用于脾胃虚弱，消化不良，肠炎腹泻等疾病的治疗1，2 。目前沙枣主要是以食用为主，其深加工还没有得到充分的开发利用。为了提高沙枣产品的附加值，石河子大学投入大量精力对沙枣进行了研究，发现沙枣中2含有丰富的沙枣多糖，对动物具有良好的免疫保健功能。为了开发这一药用资源，我们将沙枣多糖作用于小鼠，通过测定以观察对小鼠免疫器官脾、胸腺指数、单核巨噬细胞吞噬功能、血清半数溶血值（HC50） 、迟发型超敏反应功能的
3、影响，为中药有效成分的进一步研究提供理论基础。1 材料与仪器1.1 动物昆明种小鼠，812 周龄，体重 1825 g，雌雄随机，石河子大学实验动物中心提供。1.2 试剂丙酮，乌鲁木齐化学试剂厂产品；石油醚，乌鲁木齐化学试剂厂产品；印度墨汁，北京笃信精细制剂厂产品；绵羊红细胞悬液（SRBC） ，石河子大学实验动物中心提供； Alsevers 血球保存液，按常规配制；都氏试剂（NaHCO3 1.0 ，KCN 0.05 ） ，高铁氰化钾 0.2 ，加水至 1 000 ml，4保存；补体（豚鼠血清） 。1.3 仪器 KQ-250 型超声波提取仪，昆山市超声仪器有限公司产品；SENCOR502B 旋转蒸
4、发器，上海申生科技有限公司产品；SartoriusBS210S 电子天平，北京塞多利斯天平有限公司产品；SHZ-C 型循环水式多用真空泵，巩义市英欲予华仪器厂产品；7223型光栅分光光度计，上海精密科学仪器厂产品；镀铬游标卡尺，湖北省教学仪器厂，精密度 0.02 mm。2 方法2.1 沙枣多糖的提取称取沙枣粉末 200.0 g，加少量水浸泡24 h 湿润。加入石油醚（沸程 3060）2.0 L，在超声循环提取仪中提取 30 min，过滤。在滤渣中加入 95%的乙醇 2.0 L，超声提取 30 min，过滤。在所得滤渣中加入蒸馏水 2.0 L，超声提取 30 min，重复用水提取 3 次。提取完
5、毕后过滤、合并滤液，在旋转薄膜蒸发仪上减压浓缩至 200 ml。加入 95%的乙醇使溶液中乙醇含量达到 80%，低温静置过夜，抽滤，滤渣分别用乙醚、丙酮、无水乙醇洗涤数次，得灰白色粉末样物质，放入烘箱中于 60干燥备用。由苯酚-硫酸法测得提取物中沙枣多糖含量为 50.28。2.2 检测项目及方法2.2.1 实验动物分组及给药方式本实验设计了高、中、低 3个剂量组(每组 10 只)，即小鼠每日每只经口给予(加入饮水法)沙枣多糖 60 mgkg-1 体重（低剂量)，120 mgkg-1 体重（中剂量)和240 mgkg-1 体重（高剂量) ，分别相当于人体推荐用量的5，10 ，20 倍。对照组给予
6、正常饲料和饮水。4连续给予受试物 7 d 后活杀小鼠并测定各项免疫指标。2.2.2 小鼠免疫器官重量的测定3称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，脾脏、胸腺称其湿重，计算脾指数和胸腺指数。脾指数= 脾重量（mg）/体重（g）胸腺指数= 胸腺重量（mg）/体重（ g）2.2.3 单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率 )的测定4 末次给药后 1 h，称体重，各鼠均按 0.1 ml/10 g 剂量由尾静脉注入印度墨汁（以生理盐水按 1:5 稀释） ，注射后分别在 1 min(t1)、5min(t2)从小鼠眼眶静脉丛取血 20 l，溶于 2.0 ml 0.1% Na2CO3 溶液中摇匀，放置 20 min 后于
7、 680 nm 处测其吸光度值（A） ，以 0.1% Na2CO3 溶液做空白对照，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数 K 值和校正廓清指数 值。计算公式：K（logA1logA2）(t2t1) ； K1/3体重/ （肝重脾重）2.2.4 小鼠血清溶血素的检测5 给药第 3 天，每鼠腹腔注射 2SRBC 0.2 ml 致敏，并继续给药。致敏后第 4 于末次给药5后 90 min 取小鼠眼球血，静置 1 h，2 000 r/min 离心 10 min，取上层血清 20l，用 NS 稀释 500 倍，取此血清样 1 ml 作为补体，37温浴 1 h，反应结束，将反
8、应管立即移入冰浴中，以终止反应，以 2 000 r/min 离心 10 min，取 1 ml 上清液盛于由 3 ml 都氏试剂的试管摇匀，放置 10 min 后于 540 nm 测其吸光度值（A） 。计算小鼠的半数溶血值（HC50） 。样品 HC50=(样品的吸光度值/SRBC 半数溶血时的吸光度值)稀释倍数2.2.5 迟发型超敏反应（ DTH）检测 按文献方法6 给药第 3 天 ，每鼠腹腔注射 2SRBC 0.2 ml 致敏，并继续给药。致敏后第 4 日取 20SRBC50 l 悬液注射在小鼠右侧足垫皮下，左侧注射 50 l 生理盐水， 24 h 后用游标卡尺（精密度 0.02 mm）测定小
9、鼠左右足垫厚度之差为肿胀程度。同一部位测量 3 次，取平均值。3 结果3.1 对小鼠免疫器官的影响结果（见表 1）显示 EAPS 各剂量组均能增加小鼠胸腺和脾脏的重量。与对照组胸腺指数比较，EAPS 在 120 mgkg-1 和 240 mgkg-1 剂量组有显著性差异(P0.05)；6与对照组脾脏指数比较，EAPS 在 120 mgkg-1 剂量组，呈极显著性差异(P0.01)；60 mgkg-1 和 240 mgkg-1 剂量组，均有显著性差异(P0.05)。表 1 沙枣多糖对小鼠免疫器官的影响（略）与对照组比较,* P0.05，*P0.01；n=103.2 对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能 (
10、碳粒廓清速率)的影响由表2 数据可知，EAPS 各剂量组均能明显提高廓清指数和吞噬指数。与对照组比较，EAPS 的 120，240 mgkg-1 剂量组廓清指数均达到极显著水平(P0.01)，EAPS 的 60 mgkg-1 剂量组的廓清指数也达到了显著水平(P0.05)。EAPS 各剂量组对小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能的增强作用，以 120 mgkg-1 剂量组最为显著。表 2 沙枣多糖对小鼠碳粒廓清的影响（略）与对照组比较,* P0.05，*P0.01；n=103.3 对小鼠血清溶血素及迟发型超敏反应（ DTH）的影响由表 3 可知，EAPS 在 240 mgkg-1 剂量组的半数溶血值与对
11、照组差异极显著（P0.01 ） ，120 mgkg-1 剂量组与对照组的差异显著（P0.05） ，60 mgkg-1 剂量组的半数溶血值只是略有升高，差7异不显著（P0.05） 。60mgkg-1 剂量组足跖肿胀度差值明显高于对照组（P0.01） ， 60 mgkg-1 剂量组和 240 mgkg-1 剂量组足跖肿胀度差值与对照组相比差异显著（P0.05） 。表 3 沙枣多糖对小鼠血清溶血素及迟发型超敏反应（ DTH）的影响（略）与对照组比较，* P0.05，*P0.01；n=104 讨论多糖类化合物是生物体的重要结构成分，主要影响机体的网状内上皮系统和蛋白质的合成及抗体的生成，含有激活淋巴细
12、胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞，具有促进细胞因子的生成，改善机体的免疫功能的作用7，8 。本实验采用连续经口给药的方式进行免疫相关指标的测定，结果发现当多糖给药剂量为 120 mg kg 时受试物能明显升高小鼠的胸腺指数和脾脏指数，这将对提高机体的免疫功能有一定的影响，因为胸腺是 T 细胞分化成熟的场所，也是机体细胞受抗原刺激后发生免疫应答的部位9 。溶血素作为抗绵羊红细胞抗体，经绵羊红细胞（SRBC）诱导由小鼠体内的 B 淋巴细胞产生，溶血素生成的增加，反应了 RP 对8免疫反应较后期阶段抗体分泌细胞形成具有增强作用。SRBC 作为半抗原接触皮肤与皮肤蛋白结合成为完全抗原，使 T 淋巴
13、细胞致敏，因此迟发型超敏反应是由特异性致敏效应 T 细胞介导的细胞免疫反应，是检测细胞免疫功能的常用方法之一。实验数据说明沙枣多糖可以显著增强小鼠抗体分泌细胞产生抗体的能力，从而增强小鼠的体液免疫，并可明显增强由 T 细胞介导的迟发型超敏反应。单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一。当细菌、异物等抗原性物质进入机体后，可迅速被单核巨噬系统吞噬和清除，其消除的速率（碳廓清指数）反映了吞噬功能。实验结果，沙枣多糖能显著增加小鼠的廓清指数和吞噬指数，其免疫调节机理值得深入探讨。实验显示，灌服沙枣多糖能显著提高小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能，增强小鼠迟发型超敏反应，促进溶血素的生成
14、，以增强机体的特异性和非特异性免疫功能。沙枣多糖对小鼠的免疫功能有明显的调节作用。【参考文献】1 黄俊华,买买提江,杨昌友,等.沙枣研究现状与展望J. 中国野生植物资源, 2005, 24(3):26.92 辛艳伟. 沙枣的开发和利用J.安徽农业科学, 2007,35(2):399.3 沈关心 ,周汝麟.现代免疫学实验技术 M.武汉:湖北科学技术出版社,2002 ：396. 4 徐叔云 .药理实验方法学M.北京:人民卫生出版社,1991：1233. 5 陈 奇.中药药理实验方法学 M.北京:人民卫生出版社,2002：315.6 林飞卿.医学基础免疫学M.上海:上海医药科技出版社, 1991：362.7 高 海 ,李秀岚.中草药多糖免疫调节剂研究进展J .动物医学进展,2003,24(5):55. 8 沈先荣,蒋定文,贾福星,等. 角燕胶囊对小鼠免疫功能的影响J.中国海洋药物,2004，4:31.9 何 燕, 吴雄志,曾升平.中药多糖的免疫调节作用J .10四川中医, 2001, 19(2):15.
