《水提-壳聚糖澄清-大孔树脂纯化法制备葛根总黄酮工艺研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《水提-壳聚糖澄清-大孔树脂纯化法制备葛根总黄酮工艺研究（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1水提- 壳聚糖澄清- 大孔树脂纯化法制备葛根总黄酮工艺研究作者：张彤，郑彩美，陶建生，丁越，沈婷婷【摘要 】 目的优化葛根总黄酮提取工艺。方法采用水提壳聚糖澄清法与传统水提醇沉法平行对比，正交实验考察解吸剂（乙醇）浓度、解吸温度、洗脱速度 3 个因素，以总黄酮提取量、葛根素提取量、得膏率为考察指标综合评价。结果壳聚糖澄清工艺能有效保留葛根中葛根素及总黄酮等有效成分，节省乙醇用量，缩短生产周期。选取最佳纯化条件：乙醇浓度为 70%，洗脱温度 35，洗脱速度为 2BV/h。采用该工艺葛根总黄酮纯度达 60%以上。结论该法简单可取，适合于工业化大生产。 【关键词】 葛根总黄酮 葛根素 提取 大孔树
2、脂Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction technology of the total flavones in Radix Puerariae. MethodsContrast the methods of clarifying water extractive solution of Radix Puerariae by chitosan and by alcohol. The orthogonal design method was adopted to study the effect of three factors includin
3、g the concentration of the alcohol, 2the temperature and the speed of desorption. Extraction rate of total flavones and puerarin, the yielding rate of extractive were regarded as indexes.ResultsThe clarifying process of chitosan could remain the effective contents such as the total flavones and puer
4、arin. It not only saved the volume of alcohol, but also cut down the period of production. The optimum separation conditions were the elute solution of 70% alcohol, the speed of 2 drops per second and the temperature of 35. The yield of total flavones from Radix Puerariae by the purity reached above
5、 60%. ConclusionThe process is simple and preferable, which adapts to industrial production.Key words：Total flavones in Radix Puerariae; Puerarin; Extraction; Macroporousresin葛根为常用中药，始载于神农本草经 ，性味甘、辛、凉,归脾、胃经。具有解肌退热、生津、透疹和升阳止泻等功效。用于外感发热头痛、项背强痛、心绞痛、高血压病、口渴、麻疹不透、热痢等。已知葛根中所含的主要成分为异黄酮：葛根素、大豆苷、大豆苷元等。本工艺采用的
6、水提-壳聚糖澄清-大孔树脂纯化制备葛根总黄酮，以期为工业化大生产提供参考。31 仪器与试药美国惠普 UV-8453 紫外-可见分光光度计； Agilent 1100 液相色谱仪；Sartorius Cp225D 型电子天平；上海申生 RE-52AA 型旋转蒸发器；DZF-6050 型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司） ；LXJ-IIB 低速大容量多管离心机（上海安亭科学仪器厂） ；HHS型电热恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂） 。AB-8 大孔树脂（天津南开大学树脂厂生产） ；葛根饮片（批号：061216，上海康桥中药饮片有限公司） ；葛根素对照品（批号：110752-20020
7、9，中国药品生物制品检定所） ；壳聚糖、乙醇、甲醇为分析纯（国药集团化学试剂有限公司） 。2 方法与结果2.1 大孔吸附树脂预处理取大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗脱，至洗脱液蒸干后无残留物，经乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。2.2 含量测定用紫外-可见分光光度法测定葛根总黄酮的含量1 。用高效液相色谱法测定总黄酮中葛根素的含量2 。2.3 葛根总黄酮的提取取葛根饮片 20 g，置 800 ml 烧杯中，4加 200 ml 水，浸泡 30 min ，煮沸 1 h ，纱布滤过，药渣用 160 ml 水再煮沸 30 min ，纱布滤过，合并两次的滤液，浓缩至 6 ml/g 生药。2.4 葛根总黄酮
8、的纯化2.4.1 初步纯化工艺选择水提壳聚糖澄清工艺：水煎液浓缩至浓度为 6 ml/g 生药时，取 50 ml 的浓缩液 3 份，每份加10%15%体积的 1%壳聚糖溶液沉淀，静置一夜， 1 500 r/min 离心 30 min ，弃去沉淀，上清液进行含量及得膏率测定。水提醇沉工艺：水煎液浓缩至浓度为 1 ml/g 生药时，以 95%乙醇醇沉至含醇量 70%。1500 r/min 离心 30 min，弃去沉淀，上清液进行含量测定及得膏率测定。浸膏得率测定：分别取上述两种提取方法的供试品适量，转移到 100 ml 蒸发皿中，水浴蒸发，近干后置烘箱内 105干燥 2 h，取出置干燥器内冷却 30
9、 min，称重。再以 105干燥 2 h，冷却，至恒重。结果见表 1。表 1 澄清工艺与醇沉工艺比较（略）结果表明，与醇沉工艺相比，壳聚糖澄清工艺能有效保留葛根中葛根素及总黄酮等有效成分，能节省乙醇用量，缩短生产周期。5壳聚糖澄清剂能以电中和及吸附架桥的方式去除水提液中各种悬浮颗粒及蛋白质、鞣质、果胶等大分子物质，达到分离纯化的目的。但单独应用得膏率仍偏高，一般可作为初步精制方法。与其它方法联用，分离纯化效果较好。2.4.2 大孔树脂纯化条件优化3在大孔树脂洗脱过程中，解吸剂乙醇浓度、解吸温度、洗脱速度对纯化过程影响较大。故采用正交实验以进一步优化洗脱工艺条件。按 L9（34）正交表进行实验，
10、因素水平表见表 2。结果见表 34。表 2 正交实验因素水平（略）表 3 正交实验设计（略） 表 4 正交实验方差分析（略）直观分析表明，以综合评分为标准，在所选因素水平范围内，解吸剂洗脱时的温度对洗脱效果影响较大，其次为洗脱速度，而乙醇浓度影响较小。方差分析表明，因素 B（解吸剂洗脱时的温度）为显著性影响因素，因素 A 和 C 则影响不显著。故选取最佳提取条件为 A2B2C3，即 70%乙醇、35洗脱，洗脱速度为 2.0BV/h。洗脱速度与层析柱的大小有关，需要根据实际情况进行调整。2.5 优选工艺验证实验根据以上优化的提取纯化工艺条件，制备 5 批次总黄酮提取物。结果见表 5。表 5 不同
11、批次葛根总黄酮提取物的含量测定结果（略）验证结果表明，葛根总黄酮提取物质量稳定，所选择工艺合6理、可行。2.6 大孔树脂吸附葛根总黄酮的使用次数和再生次数考察当树脂使用一定时间和次数以后，树脂就会受到污染导致吸附能力降低，此时必须经过再生处理后才能继续使用。AB-8 树脂再生的方法同上文所述的 AB-8 树脂预处理的方法。参考厂家说明书，AB-8 大孔树脂使用后，以 95%乙醇洗柱，至流出液加入等量水不显浑浊，再以去离子水洗柱，至流出液无乙醇味，可继续使用。当树脂吸附量下降 30%时，树脂应进行再生。考察结果见表 6。表 6 AB-8 大孔树脂精制葛根总黄酮的使用次数和再生次数考察结果（略）结
12、果显示，AB-8 大孔树脂使用 30 次后仍然保持葛根总黄酮吸附量为初始的 90%以上。3 讨论微波助提葛根总黄酮4 ，提取效率很高，但微波提取工业化的设备还处于研发阶段，尚未得到广泛推广应用。本实验以水煎提取葛根总黄酮，其提取率与 30%，90%乙醇提取效果相似，故拟以水为提取溶剂，降低成本，提高生产安全性。AB-8 大孔树脂精制葛根总黄酮，树脂可反复使用。这可能7与壳聚糖澄清剂能有效除去葛根水提液中的胶质、蛋白质、鞣质有关，从而延长了树脂使用寿命。因此，水提-壳聚糖澄清 -大孔树脂纯化制备葛根总黄酮，降低了生产成本，极大地提高了经济效益，有利于工业化大生产。此法得到的葛根总黄酮纯度达 60%以上，为进行基于中药有效部位的新药开发提供了参考。【参考文献】1刘逢芹,刘田云, 李贵海,等.分光光度法和 HPLC 法测定野葛藤总黄酮及葛根素含量J.中药材,2005,28（10）:895.2国家药典委员会. 中国药典,部 S.北京：化学化工出版社,2005:233.3桂 本,郭 嘉, 池汝安,等.大孔吸附树脂对葛根总黄酮吸附性能的研究J.应用化工,2007,36（5 ）：451.4白兰莉, 蒋柏泉 ,黄庆荣,等. 葛根总黄酮提取新工艺的研究J. 南昌大学学报 工科版,2006,28（3）： 227.
