关于蝙蝠携带冠状病毒以及乙脑病毒的研究

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1、;藿雾l 羹里姜蓁;辇蘑露孽薹萋! 霎奏l 翮;墅萋墓霎堇l ! 耋! 薹摹茎羔| 蚤酉霹翼匡薹雪主喜雪童鼍羹雪i 堂至耋i 墓墓霎妄嚣! 耋i l 瞳薹蚤辇l 基冒薹! i 茎主艄i l 铲荔! 毒甏窜蓁谴慵量耋妻鬟;! 譬囊鼋螽| :堑彳i 茎妻窝i 啸i 塞 ! 婚蠢! 霎奏奏塞i羞l | il 墨菱嚣i 匡主ji 争l 羹羹主雾羹 蓁羹荸i 薹萋囊矍耋雾匡l 鬟鋈引! 耋矿i | | | | | | | | d i 嶷蓁蓁髻雾l i 峪皂i 耋妻i 国姜蚤i 篁雾鼋j 二蓁i 冀耋冀墓l 囊攀莺蓬l 羹萎翼冀匿| 叠萤鎏葶i :璧誓霹霹! 霆蠢 。叁墓霉霉够主! 雾玉i 罄蓁;i 霎;

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5、毒R N A 依赖的R N A 聚合酶( 尺刎印) 和蝙蝠线粒体细胞色素b ( C 弦6 ) 的基因序列数据为对象,提取关键部位基因的序列后使用相关进化生物学软件分析蝙蝠冠状病毒与宿主的进化关系。通过蝙蝠宿主进化与蝙蝠携带冠状病毒进化的比对,以及蝙蝠携带冠状病毒内部的分支比对分析蝙蝠及其携带的冠状病毒在种系发生上的关联,揭示S A R S 爆发以及其它冠状病毒出现与蝙蝠宿主之间的关系。另一部分研究通过E L I S A 方法检测蝙蝠血清中的乙脑抗体,并且辅助以中和抗体实验进一步验证E L I S A 的准确性,检测蝙蝠是否能够携带乙脑病毒。并使用R e a l T i m eP C R 扩增寻

6、找乙脑病毒序列。目的为分析蝙蝠作为乙脑病毒储存者所起到的作用。1文献综述1 1蝙蝠简介1 1 1 分类与进化地位蝙蝠是对翼手目动物的总称,是哺乳动物中仅次于啮齿目动物的第二大类群,占据超过2 0 的现存哺乳动物种类,包括2 个亚目:大蝙蝠亚目 ( 蚴c 砌印胞阳) 和小蝙蝠亚目( 施册c 砌叩胞,口) 。大蝙蝠指旧大陆的果蝠,个体大,专以植物果实、花蜜等为食,分布范围限于非洲、亚热带等地区,现存种类大约18 6 种,全部隶属于狐蝠科( 尸陀心印以妇) 。小蝙蝠分布较广泛,除南极外各大陆均有发现,体型一般小于大蝙蝠。尽管小蝙蝠的祖先几乎无一例外地以昆虫、节肢动物、血等为食,但现存的小蝙蝠食性复杂

7、多样。小蝙蝠亚目大约包括9 3 0 种,隶属于1 7 个科。下表是目前对蝙蝠( 1 1 1 6 种) 的分类1 1 】:2表1 蝙蝠种类1 a b l e l B a ts p e c i e s 蝙蝠的科属种大蝙蝠亚目( M 矽g 口c 乃f ,印胞M ) 狐蝠科( 觑,唧舭)小蝙蝠亚目( 舭r D 如护印纪阳)凹脸蝠科( C r 甜e o 砂c 纪r f 觑)鞘尾蝠科( 砌6 口肋以材,以)烟蝠科( 凡口印纪,玩孵) 假吸血蝠科( M 瓣聊l 口I 钮如)犬吻蝠科( 胁蛔弛孵)髯蝠科( 勿朋D 印死加)短尾蝠科( 购脚邪加以孵) 吸足蝠科( 必蚴抛) 长腿蝠科( 删以)4 21 8 6l钉

8、25嘲m2。8lB24M213兔唇蝠科( ,D c f f D ,| 以)夜凹脸蝠科( 批胞,胁P )叶口蝠科( 尸砂,D s f D 朋f 出e )菊头蝠科( 尺 f “ D 却 妇P )蹄蝠科( 硒雪p 谢盯此缸P )鼠尾蝠科( 尺厅f 以叩。肌口f 死栅)盘翼蝠科( 确吵印f P ,矗如e )蝙蝠科( 阮印P 厂f 讲D 玎翻卵)总计蝙蝠是一种古老的动物,蝙蝠同时代的动物绝大多数都被自然所淘汰了,而蝙蝠经历各种灾难之后顽强地活了下来,经过千万年的发展,蝙蝠家族成为仅次于啮齿类动物的第二大哺乳动物。蝙蝠的进化还是个谜,不仅因为化石证据十分匮乏,早期蝙蝠化石与现在蝙蝠形态十分相似,另外也从未

9、发现过介于蝙蝠和其始祖间的化石标本。T e e l i n g 等【2 J 结合化石证据提出蝙蝠起源于5 2 0 0 万至5 0 0 0 万年前,而这段时间正是全球气温回升,植物、昆虫物种多样性丰富的世纪。三枝蝙蝠系起源地为北美( 当时属于劳亚古大陆的一部分) ,另一枝起源地为冈瓦纳古大陆。1 1 2 蝙蝠的行为蝙蝠是唯一真正能够飞翔的兽类,其前肢十分发达,上臂、前臂、掌骨、指骨都很长,并由它们支撑起一层薄而多毛的,从指骨末端至肱骨、体侧、后肢及尾巴之间的柔软而坚韧的膜,形成蝙蝠独特的飞行器官翼手,蝙蝠类也因此而得名翼手目。有些种类的蝙蝠还有季节性迁徙习性,例如长翼蝠能迁徙5 0 0 公里、伏

10、翼能迁徙1 2 0 0 公里。有些病毒如狂犬病在蝙蝠迁徙过程中得到传播,如银毛蝠( 伽i D 缈绍r 括加c 疗v 口g 口凇) ,从阿拉斯加跨越加拿大季节性迁徙到德克萨斯,这些蝙蝠将携带的狂犬病毒以及变异株四处传播【3 】。现已发现他们携带的狂犬病毒株已经成为加拿大和美国主要流行的狂犬病毒株。蝙蝠的这种迁徙行为也可能导致新病毒或病毒变种在迁徙蝙蝠与非迁徙蝙蝠之间传播,即跨种传播。S h a n k a r 对蝙蝠及其他动物狂犬病毒的遗传进化分析表明,不同种类的蝙蝠可以携带相同基因型的狂犬病毒,这表明狂犬病毒的跨种传播。他们认为,在科罗拉多州狂犬病毒主要流行32M姗“趴43 螂 。弘,9。钉抛

11、在蝙蝠,而他们在家猫、狄狐、臭鼬也发现了蝙蝠狂犬病毒变种,这表明狂犬病毒已经从蝙蝠传播给了家养动物及其他野生动物【4 1 。许多种类的蝙蝠可以冬眠,这有利于蝙蝠在冬季节约能量,从而渡过漫长的寒冬。据研究,冬眠对于病毒过冬起到了一定的作用。科学家研究证明,当大棕蝠( E p ,I 盼f c 姗_ ,i 掷淞) 感染R 本乙型脑炎( J 印a n e s ee n c e p h a l i t i sv i m s ,J E V ) 后,让它们处于低温环境( 8 2 4 ) 模拟诱导冬眠,蝙蝠会表现持续的病毒血症【引。蝙蝠接种狂犬病毒后,让他们冬眠,虽然他们外观健康,但是从他们的褐色脂肪里可以检

12、测到高滴度的病毒【铺】。蝙蝠行集群生活。其生存环境多种多样,岩洞、屋檐、竹筒、树洞等。蝙蝠以及其后代在不被人为干扰的情况下喜好固定地栖息于某一洞穴之类的场所达数年之久。洞穴为冬眠中的蝙蝠提供了很好的场所,也有利于他们避开天敌。洞穴的某些适宜条件,加之共同生活对体温调节的有利因素,一些种类就会在洞内构成巨大的群体。曾有报道在同一个洞穴中发现上百万只同种的蝙蝠。即使栖息在其他地方的蝙蝠,也通常是成小群聚集。蝙蝠的这种易于群居的行为非常了有利于病原微生物的传播。已有研究表明狂犬病毒能够通过蝙蝠排泄物或气溶胶在蝙蝠洞穴中传播。这样某一群体携带的病毒会传给其他还未产生抵抗力的群体,有些疾病就会随之出现定

13、期的爆发。有些小蝙蝠,如长翼蝠、鼠耳蝠等习惯随机组成群,成千上万群居在同一洞穴。病毒在这些群体储存和传播十分便利。对亨得拉病毒的进化分析表明,该病毒是一种古老的病毒,他们很可能与其果蝠宿主早就有着一种协同进化关系,只是近期传播给了人类而已【9 】。回声定位是蝙蝠的重要特性之一。回声定位不是翼手目所特有的,但在所有具有类似功能的哺乳动物中,蝙蝠的回声定位达到了进化的最高点。一些动物以这种方式利用声波与外界环境进行交流,并且有许多种类是利用高频声波或超声波,此类声波频率超过人类的听觉范围,这些动物包括鲸和海豚等。哺乳动物中的一些啮齿目和有袋目也发射超声波,但还不知道它们是用于回声定位,还是仅用于通

14、讯。所有的小蝙蝠以及少数大蝙蝠科成员可以发出超声波用于回声定位。蝙蝠使用高频声的原因可能如下:自然界中很少有其它声音具有这样高的频率,所以其它声源的干扰小;超声波在空气中传播一段距离会很快衰减。高频声的应用可能既是避免个体之间回声定位叫声相互干扰的一种方式,也会使蝙蝠能够充分接近猎物,同时,惊动天敌的可能性也小。但最重要的原因可能还在于目标的4P a r n n 够伽i r i d a eH e n d l av i I u sN i p a l lV i m sP 国Q m y ) c o t r i d 口eM a p u e r aV i m sM e n a n g l eV i n

15、塔T i o m a l lv i r u sP a r n n 够o v i r i d Q eP a r a i n f l u e n z a v i m sc o r o n 6 W i r i d aS A RS 1 i k ec o r o n a v i n l sR t l b t l t m i r “ s未鉴定C h i k I m 母m y aV i n l s6S i I l d b i sv i n 塔V e n e z u e l a ne q u i n ee n c 印h a l i t i sV i n 腮P t e r o p t l s 文e c t o

16、P t e r o p u sp o l i o c e p h Q l u s ,P t e r o p u Ss c c l p t l t n t u s ,P t e r o p u sP t e r o p u Sh y p o m e l Q 眦S ,P t e r o p u Sp o l t o c e p t n t u SP t e r o p u Sh y p o m e l n m l SR o u S e t n l st e s c h e n Q u h nR h i 1 0 p h SS i n i c t l S ,R h i t o p h l Sp e a l r s o n i i -R h i n o l o p h u sm 锄贸o t i s ,R 拥D 锄咖搬乃,厂甜m 已g “f 甩姗n e g 印n 僦懈,H i p l 0 s i c l e r o

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