小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇_don_的薄层色谱测定

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1、卫生研究小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(ODN)的薄层色谱测定魏润蕴(卫生部 食品卫生监督检验所)提要本 文用水 和三氯甲烷一乙醇(8+2)提取小麦中的DNO。样品提取液 的浓缩物经己烷和 甲醇一水(4+l)振摇 去油 再过 中.性氧化铝一活性炭 往、净化。用乙酸乙醋溶解过柱液 的蒸发残渣,除去乙酸乙醋,加入三氯甲烷一乙睛(4+l)溶解 残渣作薄层 层析 用。用乙醚或乙醚一丙酮(9 5+5)作横展 剂,.三氛甲烷一丙 酮一异丙醇(8+1+1)作纵 展 剂双向展 开薄层板,加热薄层板,DON与三氯化 铝作用显蓝 色荧光,与标准比较。方法 灵敏度loo ppb,定性检出达so p pb。在0.1、0.5

2、、1和Zo p pm时,DON的回收率达8。肠 以上。脱氧 雪腐镰刀菌烯 醇D。 xyinva le no l(D ON)是镰刀菌产生 的毒素,属单端袍 霉烯族化合 物。D ON主 要污染小 麦、玉米等泞类作物,麦类赤霉 病 就是感染了镰刀、畜引起 的,不仅会使谷物 减产,而 且人畜食用病麦后会 引起中毒。为此 我们建立了 小麦中DON的 测定 方 法。这是参考了AO AC的方 法,改变一 些 条件,以甲醇一水提 取液代替乙睛提取 液 过中性氧化铝一活性炭 柱;所用 层 析 柱不具 滤板,直径为2厘米,便于用水泵控制 流速;再 配 合薄层双 向展开,操作方便可行。旧本 法侧 定小麦 中DON在

3、0.1、0.5、一。和Zo p pm四个水 平,I川1父率 均大于80帕,方法灵敏度为o.l p p m,定性检出飞,J达0.0 5PPm。一、原理小麦中的D ON经提取、净化、浓缩和薄层 展开后,加 热薄层 板。由于在制备薄层板时加入了三氯化铝,使DO N点在365 nm紫外光灯下 显兰色荧光,与标准比较定 量。二、仪器小型 粉碎机;电动眼荡器;收璃 蒸发皿7 5ml,层析柱:内径2cm、长1 0om,不具活塞,抽 滤瓶;水汉或直与 l长;平底管;下 端具 小 管 的1 0ml浓 缩小 瓶,玻璃板:sxZoem;薄层涂布器:0.3, llm;展开僧:I匀长z sem、宽6em、高4e,二;紫

4、外光灯36 5nm,微 量 注射器:10 林l和5 0卜1。三、试剂以下 溶剂 均为分析 纯三氯甲烷、无水乙醇、甲醇、正 己烷、乙酸乙醋、乙睛、丙酮、异丙 醇、乙醚。AICI:6f!:O化学 纯中性氧化铝层析用,经30 0活化4小时,备用。9156年第25卷第5期4 1活性炭029活性炭,用3N盐酸浸泡过夜。抽滤后,用燕馏水洗至中性,在1 20烘 干备用。硅 胶G薄层 层析用,青岛海洋化工厂生产。D ON标准溶浓精密 称取smgD ON,加乙酸乙酚 溶解后转入1 0n l r容量 瓶中,加乙酸乙酷至刻度。此标准溶液含D ONo.smg/m!。吸 取此标准溶液o.sml,用乙酸乙醋稀释至10 m

5、l,此溶液每毫升含D ON25协g。四、操作步骤1.样品的提 取称 取粉 碎 的样品2 09置一于20 0ml具塞锥瓶中,加8mT水和10 0ml三氯甲 烷一无水乙醇(8+2),密塞,在瓶塞上涂上一 层水盖严防漏,振 荡1小时,通过析叠快速 定 性滤纸过 滤,取 滤 液2 5ml于7 5m玻璃 蒸发皿 中,置8 0 9 0水浴 上通风挥千。用 4 0ml正己烷分 次溶解蒸发皿中的残渣,洗入10 001分 液漏斗中,再用Z oml甲醇-水(4+1)分 次洗涤蒸发皿,转入 同 一分液 漏斗中,振摇1.5分 钟,静置约1 5分 钟,使分层后将下层甲醇一水提取 液 过柱 纯化。不要将两相 交 界处的白

6、色絮状物放入柱 内。2.柱 纯化在层析柱下 端 与小管连结处塞 少许 脱 脂棉,尽 量塞紧,先装入0.5 9中性氧化铝,敲平表面,再加入0.4 9活性炭,敲紧,将层析柱下端小管插入一橡皮塞,塞 在抽滤瓶上,抽滤瓶中放一 平底管接受过柱液。将抽滤瓶接上水泵,开水泵使 活性炭 压紧。将分液漏斗中的甲醇一水提取液小心 沿管壁加入柱 内,控制 流速为每半分钟3 54 0滴。甲醇一水提取液过柱快完毕时,加入 1 0ml甲醇一水(4+l)淋洗柱,抽滤,直至 柱内不再有液体流出,使3 0 毫升液体在1 01 1分钟内过柱完毕。过柱速度 要 均 匀,不 要 时快时慢。3.制备薄层层析用样液将过柱后 的洗脱液倒

7、入7 5ml蒸发皿 中,用 少 量 甲 醇一水(4+1)洗涤平底管。将蒸发皿置沸水浴上浓缩至 干(约4 0分钟),趁 热加入3ml乙酸乙醋,加 热 至沸。轻轻转动蒸发皿溶解D ON,放冷至室 温后转入1 0ml底部具小管 的浓缩瓶中,再 用三份1.sml乙酸乙脂洗涤蒸发皿,并入 浓 缩瓶中。将 浓缩瓶 置 约9 0水浴上吹N:浓缩至干,放冷至室温后加 入。.2ml三氯甲烷一乙猜(4+1)溶 解残渣,留作薄层 层析用。4:薄层层析(1)薄层板的制备4克硅胶G加1 0ml ls肠AC II:6HZO水溶液,研磨至粘稠状,铺成5x2c 0m的薄层板 三块。置室温干燥后,于1 05活化l小时,贮 干燥

8、 器中备用。(2)展开剂横展剂乙醚、乙醚一丙酮(9 5十5)、无水乙醚。任选 其 中一种使样品D O N点偏离原点。.71cm,刚好 与 杂质荧光分开。纵展剂三氯甲烷一丙酮一异丙醇(8+l+1)。(3)点样在每块薄层板 上距下端2.s cm的基线 上点样。第一块板:对每 一个样品先点第一块薄层板。在距械 笼边缘。.:。m处点样液25,1,在距左边缘l.sem处点标准液l 林l(25ng),在距板右边缘l.Zem处 点标准液20 林l(5 0 0ng)。再在薄层板上距 上端3.s cm处的横线上,并 与下端基 线上 三点相对应的位置 上42卫生研究点三个D O N标准点,各2 卜l(s ong)

9、。D ON的最低 检 出 量达2 5ng,目视 比较用s ong、7 sng和10 0ng。显荧光后观察。如阳性样品 的D O N点荧光 强度小于5。ngD O N标准点,则不需要稀释,只要估计减小滴加 量,如样品D O N点荧光 强度大于soong标准点,需稀释后估计滴加量。第二块板:在 第一块板上未 显荧光 的样品则需在第二块薄层板上距左边缘。.s cm处滴加样液2 5林1加标准液1卜l(2 5ng),在距 左边 缘1.sem处 滴加标准液l卜l(25ng),在距右边缘1.c 2m处滴加标准液2时(song)。对阳性样品则进 行概略定 量:在薄层板上距左边缘o.s cm处滴加样液点(根据情

10、况估计滴加 量),在距 左边缘1.s cm处和在距右边缘1.c 2m处 分别滴加 二个标准 点,D ON量可为5 0“g、7 5ng、10 0ng,根据情况选 择滴加 量。(4)展开展 开槽 均 不需先加 入溶剂饱 和。横展在展开槽内倒入1 0ml横展剂。将点好样的薄层板靠样液点 的 长边 斜 浸入溶剂,展至板端过 一分钟,取出通 风挥干5分钟。纵展在展开槽内倒入1 0ml纵 展剂。将横展挥干后 的薄层板置展开槽 内纵展1c 3m(约3 5分钟),取出通风挥干1 0分钟。(5)显荧光先观察未加热的薄层板可 见到显蓝 紫荧光的 干扰点(这时DO N点不显荧光),加热后它也显荧光,它在DON点 附

11、 近,但不 干扰DO N点。然后将此薄层板置13 0烘箱中加热7分钟取 出放在冷 的表面 上,1分钟后 于365nm紫外光灯下观察.(6)观察与评定薄层板经横展 后,板上的DON点都有移动,样品的D ON点移动约。.71cm,正 是 根据这一点在纵展后使样品D ON点摆脱了杂质 荧光 的 干扰。薄层板上端未经 纵展 的 三个DON标准 点可分别作为纵展 后样品DON点和二个D ON标准点的横向定位点。样品DON点 又可与纵展后的D ON标准 点 比较Rf值 而 定性,这样从横向和纵 向 两个方面确定样品D ON的位 置,达到定性的目的。在第一块薄层板上如样品D ON点上有很浅的斜的荧光通过,这

12、是过柱时没掌握好速度,净化不够,但两个标准DON点的位置 上 均无杂质 荧光干扰。如在第一块薄层板上样液未显荧光 点,而在第二块薄层 板上样 液25时+标准25ng所显荧光 强度与标准25 ng相等,则样品中D ON含量在s o ppb以下。阳性样品概略定 量 时,虽然薄层板.上三个DON点在横展中都稍有移动,但对各点荧光强度影响不大,二个标准点均可用于 和样品DO N点比较荧光强度.另还可用光密度计进行 定盆 测 定。5.计算x一*、率、Dx李 VZm式中:x样品中DON的含量(p pm)A薄层 板 上测得样品点 上D O N的 量(协g)v;加 入 三氯甲烷一乙猜混合液溶解残渣的体积(ml

13、)1968年第i卷第5期VZ滴加样液 的体积(ml)D样液的总稀释倍数m三氯甲烷一乙猜混合液溶解残渣相 当样品的重 量(g)五、结果与讨论方法 的回收率:于 空 白样品中加入NDO标准 测 定四个水平。附衰小安中OON回收率试脸DON加人t(P Pb)测定次数回收率范围1026754790%8500%8090%8090%大于08%测定样品七 份,其中四份未检出,天然污染DO N的小麦中含量 分别为。.7 5 p pm、1p p m、2 6.6 7P Pm。还 测 定了 三份玉米,含量为0.3p pm、o.3 p pm、o.4Ppm。本法 用 三氯甲 烷一乙醇(8+2)提取样品中的D ON,再

14、用 正己烷和甲醇一水(4+l)溶解和 振摇提取 物,除 去了大 量杂质.但甲醇一水提 取 液必须经 过 中性氧化铝一活八nU甘n八U八U八甘,占O自勺1 00 02 0PPm性炭 柱 纯化,否则点样困难。经柱纯化后 的样品提 取 液 的浓 缩 液滴加在薄层板 上 经一次纵展后,D O N点仍受杂质荧光 的 干扰。我们采用 双向展开既可去除干 扰,又保证了8 0肠以上 的回收率。此外,薄层板的涂布对D O N与杂质的分离效 果和D O N荧 光点的 灵敏 度影响很大,硅胶浆液必 须研磨得比较稠,板要铺得均匀。薄层板上的残留溶剂也会降低D O N荧光 强度,横展后挥干5分钟,纵展后挥干1 0分钟能

15、得到荧光 强度较稳定 的DON点.注意:薄层板上的AIC I。6H:O在加热时失去H C I和HZO会腐蚀烘箱,这 尚有待解决。本法所用 仪 器及操作都 较简单,不 需大t有机溶剂,易于推广。,考文做1。Plat tnerRDetal.:JAO AC66.1 470,1 98 32。Tv uekse s sMWetal.:JAOAC67:4 0,19843.BataAetal。:JChromatgr286:55 7,198-4。WareGMetal:JAO AC67:731,1984, 肺通气量计的研制周冠雄句树铭张 初芳(中国预防医学科学 院卫生 研究所卫生防护研究 室)提要肺通气量计是一种小型、便于携带、准确度高的测量人体平均肺通气t的仪器。它采用气流 经过喷咀喷射叶轮转动的原理和利用光电计数方式,因而具有体积小、重量轻、单向性好、灵敏度高等特点。由于采用了单向阀控制的光电开关,消除了叶轮情性转动而出现 的误差,提高了仪 器的准确度。在校对方法 上采用标准气体计量器与旋塞阀相结合方式较好地解决了肺通气量计等一类测 量装置的准确标定 问题。该仪器的准确度为士2.7%,在10 0升/分 流量时阻力损失约为4毫米水柱.现场使用表明与道 氏袋相比可提高工效2 0 3 0倍。