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1、实验肠道菌的分离与鉴定实验三肠道菌的分离与鉴定-11.录像：细菌感染的实验室诊断；1.录像：细菌感染的实验室诊断；2 2 学生操作学生操作2 2. .学生操作学生操作： 粪便标本的采集与细菌分离（接粪便标本的采集与细菌分离（接 种麦康凯平板）种麦康凯平板） 抗酸染色抗酸染色 抗酸染色抗酸染色3. 3.讨论讨论：沙门菌感染的鉴别诊断沙门菌感染的鉴别诊断3. 3.讨论讨论：沙门菌感染的鉴别诊断沙门菌感染的鉴别诊断（肥达氏实验）（肥达氏实验）细菌学诊断常通过直接通过 分离出病原菌达到疾病诊断的 目的目的。有时也可通过检测病原菌的 抗原成分特殊代产物或其抗原成分、特殊代谢产物或其 核酸达到诊断目的。核
2、酸达到诊断目的。血清学诊断血清学诊断原理原理血清学诊断血清学诊断用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体 液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化， 可作为某些传染病的辅助诊断。(抗原未知抗体)标本标本 双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期 血清中抗体效价升高抗体效价升高4倍倍者方有意义种类种类 凝集试验：肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等凝集试验： 沉淀试验： 中和试验：肥达试验外斐试验显微镜凝集试验等梅毒VDRL、RPR试验等 抗“O”试验等 补体结合试验：中和试验：抗O 试验等Q热柯克斯体抗体检测等一一、病原学诊断与防治病原学诊断与防治临床标
3、本一一般检验程序般检验程序、病原学诊断与防治病原学诊断与防治临床标本般检验程序般检验程序预处理增菌涂片染色快速诊 断试验初步诊接种培养基，分离单个菌落各种鉴定试验初步诊 断报告各种鉴定试验生化试验血清学实验涂片染色药敏试验动物试验最终诊断报告肠道菌的分离与鉴定肠道菌的分离与鉴定肠道菌的分离与鉴定肠道菌的分离与鉴定 实验目的实验目的实目的实目的 熟练无菌操作熟练无菌操作 掌握粪便的细菌学检查过程掌握粪便的细菌学检查过程 实实 实验步骤实验步骤粪标本采集法粪标本采集法粪标本采集法粪标本采集法（一）目的（一）目的 对粪便标本的检验有助于评估病人对粪便标本的检验有助于评估病人 排泄功能及准确评估疾病。
4、排泄功能及准确评估疾病。1 1、常规标本常规标本用于检查粪便的性状用于检查粪便的性状、颜色颜色、常规标本常规标本用于检查粪便的性状用于检查粪便的性状、颜色颜色、 混合物及寄生虫等混合物及寄生虫等。2 2、隐血标本隐血标本用于检查粪便内肉眼不能观察用于检查粪便内肉眼不能观察 到的微量血液到的微量血液。到的微量血液到的微量血液。3 3、寄生虫及虫卵标本寄生虫及虫卵标本 用于检查寄生虫成虫用于检查寄生虫成虫、幼幼 虫及虫卵虫及虫卵虫及虫卵虫及虫卵。4 4培养标本培养标本 用于检查粪便中的致病菌用于检查粪便中的致病菌4 4、培养标本培养标本 用于检查粪便中的致病菌用于检查粪便中的致病菌。（二二）用物用
5、物蜡纸盒或容器蜡纸盒或容器（如小瓶如小瓶、塑料盒或塑料盒或 便器便器）、竹签竹签。培养标本备无菌培养管或无菌培养标本备无菌培养管或无菌 蜡纸盒和无菌长棉签蜡纸盒和无菌长棉签竹签竹签蜡纸盒和无菌长棉签蜡纸盒和无菌长棉签、竹签竹签（三三）方法：操作前必要时用屏风或床帘遮挡病方法：操作前必要时用屏风或床帘遮挡病 人人。粪便标本采取、保存 （甘油保存液）、送检粪便标本采取、保存 （甘油保存液）、送检（一一）分离培养分离培养（分区划线接种分区划线接种）（）分离培养分离培养（分区划线接种分区划线接种）（二）分离培养分离培养（分区分区革兰染色革兰染色 （二）分离培养分离培养（分区分区 划线接种）划线接种）氧
6、化酶试验氧化酶试验肉汤接种肉汤接种（增菌增菌）肉汤接种肉汤接种（增菌增菌）（三）接种生化反应条、药敏试验（三）接种生化反应条、药敏试验（）察读察读（四四）结果观结果观察察和判和判读读（一）分离培养（一）分离培养（一）分离培养（一）分离培养用用用用棉签棉签棉签棉签取标本取标本直接在直接在取标本取标本直接在直接在麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板用用用用棉签棉签棉签棉签取标本取标本，直接在直接在取标本取标本，直接在直接在麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板 上划上划第第上划上划第第区区，再再用区用区，再再用用接接种种环接环接种种环环进行进行第第进行进行第第、第第第第，再再，再再种种种种第
7、第第第 、区的划线。区的划线。、区的划线。区的划线。麦康凯琼脂麦康凯琼脂：麦康凯琼脂麦康凯琼脂：麦康凯琼脂麦康凯琼脂：麦康凯琼脂麦康凯琼脂：胨胨2 2NaClNaCl 0.5% 0.5% 胨胨2 2NaClNaCl 0.5% 0.5% 乳糖乳糖乳糖乳糖1 11 1中性红指示剂中性红指示剂中性红指示剂中性红指示剂 牛胆盐牛胆盐牛胆盐牛胆盐 0 5%( 6 80 5%( 6 80 5%( 6 80 5%( 6 88 08 08 08 0 红红亮黄亮黄红红亮黄亮黄 ) ) ) )牛胆盐牛胆盐牛胆盐牛胆盐 0 0. .5%5% ( ( 6 6. .8080. .5%5% ( ( 6 6. .8 88
8、8. .0 0, , 8 8. .0 0, , 红红亮黄亮黄红红亮黄亮黄 ) ) ) )Pink lawn抗酸染色法抗酸染色法 (Ziehl-Neelsen, ZN，齐-尼抗酸染色) 外层：脂质（60） G:14%G :1 4% G:1122%抗酸染色的原抗酸染色的原抗酸染色的原抗酸染色的原抗酸染色的原抗酸染色的原理理抗酸染色的原抗酸染色的原理理 结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌含脂质多含脂质多, ,不易着色不易着色, ,含脂质多含脂质多, ,不易着色不易着色, , 石石石石 炭酸复红初染炭酸复红初染（时间长时间长炭酸复红初染炭酸复红初染（时间长时间长加温加温）加温加温）炭酸复
9、红初染炭酸复红初染（时间长时间长炭酸复红初染炭酸复红初染（时间长时间长, , , , 加温加温）；加温加温）； 细菌染上颜色细菌染上颜色由于脂质的存在由于脂质的存在细菌染上颜色细菌染上颜色由于脂质的存在由于脂质的存在强脱强脱强脱强脱 细菌染上颜色细菌染上颜色，由于脂质的存在由于脂质的存在，细菌染上颜色细菌染上颜色，由于脂质的存在由于脂质的存在，强脱强脱强脱强脱 色剂也不易使之脱色色剂也不易使之脱色色剂也不易使之脱色色剂也不易使之脱色, ,其它细菌均脱色；其它细菌均脱色；, ,其它细菌均脱色；其它细菌均脱色； 经碱性美兰复染经碱性美兰复染, ,所以所以经碱性美兰复染经碱性美兰复染, ,所以所以结
10、核分枝杆菌呈结核分枝杆菌呈结核分枝杆菌呈结核分枝杆菌呈 红色红色红色红色 其它细菌呈蓝色其它细菌呈蓝色其它细菌呈蓝色其它细菌呈蓝色红色红色红色红色, , , ,其它细菌呈蓝色其它细菌呈蓝色。其它细菌呈蓝色其它细菌呈蓝色。齐齐齐齐- -尼抗酸染色法尼抗酸染色法尼抗酸染色法尼抗酸染色法( (ZiehlZiehl- -NeelsenNeelsen, ZN), ZN)操作步骤水洗/晾干水洗/晾干涂片石炭酸复红水洗/晾干水洗/晾干 涂片 5min 盐酸酒精脱色1 2min美蓝液复染30s1-2min30s学生操作每人张已固定卡介苗的痰涂片学生操作：每人一张已固定卡介苗的痰涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片抗酸染色法下结核杆菌涂片结核杆菌痰涂片结核杆菌组织涂片结核杆菌痰涂片结核杆菌组织涂片实验日期:实验人员:实验名称实验名称:实验目的：实验目的： 实验原理： 实验材料：实验材料： 实验方法与步骤： 1. 2. 实验结果：实验结果： 1. 2.2. 讨论分析：记录人:
