《胚胎后肾细胞微环境诱导胚胎干细胞向肾脏细胞分化的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胚胎后肾细胞微环境诱导胚胎干细胞向肾脏细胞分化的实验研究（47页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、摘要摘要目的：胚胎干细胞( E m b r y o n i cS t e mC e l l s ，E S C s ) 由于具备强大的自我更新及多向分化潜能等特性，可作为再生医学中种子细胞的新来源，受到广大学者的普遍关注。有关E S C s 向肾细胞诱导分化的研究起步相对较晚，近年才见部分报道。体外研究表明，E S C s 经特定的细胞因子诱导可向一定类型的肾细胞分化；体内研究表明，后肾细胞微环境在诱导E S C s 向肾脏细胞分化过程中起重要作用。本研究通过体外共培养方式模拟后肾细胞微环境，探讨其对E S C s 向。肾细胞方向分化的诱导作用，为研究E S C s 向肾系细胞分化提供新的实验模
2、式，并为探索后肾细胞微环境中影响E S C s 向肾系细胞分化的关键因子打下实验基础。方法：1 以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层传代培养小鼠D 3 系E S C s ，R T - P C R 法鉴定多潜能标志基因O c t 4 、N a n o g 和S o X 2 的表达。2 通过悬滴法将E S C s 制备成拟胚体( E m b r y o i lB o d i e s ，E B s ) ，将E B s 分为共培养组和自然分化组。共培养组：通过T r a n s w e l l s 系统将E B s 与孕1 2 5 天的胎鼠后肾细胞进行间接接触共培养；自然分化对照组：常规方法培养E B s
3、，令其自然分化。3 采用免疫荧光细胞化学染色法观察后肾细胞微环境对E B s 表达肾小管细胞标志物P a x 2 和肾足细胞标志物W T l 的影响。4 采用R T - P C R 方法观察胚胎后。肾细胞微环境对E B s 表达肾脏发育相关基因( P a x 2 、W T l 、G D N F 、E m x 2 、B M P 7 、N e p h r i n 和K S P ) 及肾祖细胞标志C D 2 4 基因的影响。结果：1 E S C s 在饲养层细胞上呈集落样生长，R T - P C R 结果显示其多潜能标志基因O c t 4 、S o x 2 、N a n o g 强表达，说明用于本实
4、验的E S C s 处于未分化状态。2 免疫荧光细胞化学染色结果显示，共培养组E B s 第3 天即可见P a x 2 阳性细胞，且随着共培养时间延长，P a x 2 阳性细胞逐渐增多，且可见部分阳性细胞成簇排列，形态类似圆环状，而自然分化组E B s 于第7 天见少数P a x 2 阳性细胞，经统I I摘要计分析，共培养组P a x 2 阳性细胞数显著高于自然分化组( P - - j 和生活上无微不至的培养和关怀。我在本专业理论和实践上的每一个进步都凝聚了导师的心血和汗水。导师渊博的学识，严谨的治学态度，敏锐的思维，崇高的敬业精神，正直高尚的人格深深的影响了我，导师对我的言传身教和悉心培养将
5、使我受益终身!衷心感谢泌尿外科研究所谢安、娄远蕾和阮琼芳老师在课题设计、实验技术方面给予我精心指导和无私帮助!衷心感谢在带教期间给予我热心帮助和耐心指导的医学院生化教研室的所有老师!衷心感谢泌外研究所黄学明老师和汪芳老师给予我的关心和帮助!感谢郭菲师姐，刘玉霞师姐、桑海明师兄，桂婷学妹及冯年花和吴珏师妹在我学 - - j 期间给予我的许多支持和帮助!向同学刘丽乔、廖小兵、段修芳、胡维晟、何昆仑、斯轶凡以及所有曾经给予我帮助和指导的老师和同学们表示诚挚的感谢!最后特别感谢我的父母和我的家人三年来所给予的全力支持!参考文献参考文献【l 】M e g u i dE L ，N a h a sA ，B
6、e l l oA K C h r o n i ck i d n e yd i s e a s e ：t h eg l o b a lc h a l l e n g e L a n c e t ，2 0 0 5 ，3 6 5 ( 9 4 5 6 ) ：3 31 - 4 0 【2 】B j o r k l u n dL M ，S a n c h e z - P e r n a u t eRC h u n gS ，A n d e r s s o nT ，C h e nI Y ，M c N a u g h tK S ，B r o w n e l lA L ，J e n k i n sB G ，W a
7、h l e s t e d tC ，K i mK S ，I s a c s o n0 E m b r y o n i cs t e mc e l l sd e v e l o pi n t of u n c t i o n a ld o p a m i n e r g i cn e u r o n sa f t e rt r a n s p l a n t a t i o ni naP a r k i n s o nr a tm o d e l P r o eN a t lA c a dS c iU S A ，2 0 0 2 ，9 9 ( 4 ) ：2 3 4 4 - 2 3 4 9 【3 】
8、B l y s z e z u kP ，C z y zJ ，K a n i aG ，e ta 1 E x p r e s s i o no fP a x 4i ne m b r y o n i cs t e mc e l l sp r o m o t e sd i f f e r e n t i a t i o no fn e s t i n p o s i t i v ep r o g e n i t o ra n di n s u l i n - p r o d u c i n gc e l l s P r o eN a t lA c a dS c iU S A ，2 0 0 3 ，1 0
9、 0 ( 3 ) ：9 9 8 - 1 0 0 3 【4 】C h i n z e i 凡T a n a k aY ，S h i m i z u - S a i t oKe ta 1 E m b r y o i d - b o d yc e l l sd e r i v e df r o mam o u s ee m b r y o n i cs t e mc e l ll i n es h o wd i f f e r e n t i a t i o ni n t of u n c t i o n a lh e p a t o c y t e s H e p a t o l o g y ,
10、2 0 0 2 ，3 6 ( 1 ) ：2 2 - 2 9 【5 】C h o iD ，O hH J ，C h a n gU J ，e ta 1 I nv i v od i f f e r e n t i a t i o no fm o u s ee m b r y o n i cs t e mc e l l si n t oh e p a t o c y t e s C e l lT r a n s p l a n t 2 0 0 2 ，l1 ( 4 ) ：3 5 9 6 8 【6 】T i a nX ，W o l lP S ，M o r r i sJ K ，e ta 1 H e m a t
11、 o p o i e t i ce n g r a f t m e n to fh u m a ne m b r y o n i cs t e mc e l l - d e r i v e dc e l l si sr e g u l a t e db yr e c i p i e n ti n n a t ei m m u n i t y S t e mC e l l ，2 0 0 6 ，2 4 ( 5 ) ：13 7 0 - 13 8 0【7 】K o b l a sT ，Z a c h a r o v o v f iKB e r k o v aZ ，e ta 1 I s o l a t
12、i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no fh u m a nC X C R 4 - p o s i t i v ep a n c r e a t i cc e l l s F o l i aB i o l ，2 0 0 7 ，5 3 ( 1 ) ：13 - 2 2 【8 】S c h u l d i n e rM ，Y a n u k aO ，I t s k o v i t z - E l d o rJ ，e ta 1 E f f e c t so fe i g h tg r o w t hf a c t o r so nt h ed i f f
13、e r e n t i a t i o no fc e l l sd e r i v e df r o mh u m a ne m b r y o n i cs t e mc e l l s D e v e l o p m e n t a lB i o l o g y ,2 0 0 0 ，9 7 ( 2 1 ) ：1 1 3 0 7 1 1 3 1 2 【9 】T h o m s o nJ A ，I t s k o v i t z - E l d o rJ ，S h a p i r oS S ，e ta 1 E m b r y o n i cs t e mc e l ll i n e sd e
14、 r i v e df r o m h u m a nb l a s t o c y s t s S c i e n c e ，1 9 9 8 ，2 8 2 ( 5 3 9 1 ) ：11 4 5 - l1 4 7 【10 】K o b a y a s h iT ，T a n a k aH ，K u w a n aH ，e t 鲥W n t 4 t r a n s f o r m e dm o u s ee m b r y o n i cs t e mc e l l sd i f f e r e n t i a t ei n t or e n a lt u b u l a rc e l l s
15、 B i o c h e m i c a la n dB i o p h y s i c a lR e s e a r c hC o m m u n i c a t i o n s ，2 0 0 5 3 3 6 ( 2 ) ：5 8 孓- 5 9 5 【11 】K i mD ，D r e s s i e rG R N e p h r o g e n i cF a c t o r sP r o m o t eD i f f e r e n t i a t i o no fM o u s eE m b r y o n i cS t e mC e l l si n t oR e n a lE p i
16、 t h e l i a JA mS o cN e p h r o l ，2 0 0 5 ，16 ( 12 ) ：3 5 2 7 - 3 5 3 4 【12 】H e r z l i n g e rD ，K o s e k iC ，M i k a w aT ，e ta 1 M e t a n e p h r i cm e s e n c h y m ec o n t a i n sm u l t i p o t e n ts t e mc e l l sw h o s ef a t ei sr e s t r i c t e da f t e ri n d u c t i o n D e v e l o p m e 吐1 9 9 2 ，l1 4 ( 3 ) ：5 6 5 - 5 7 2 【13 】Y a n gJ ，B l u mA ，N o v a kT ，e ta 1 A ne p i t h e l i a lp r e c u r s o ri sr e g u l a t
