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1、中国药理通讯 2 0 0 9 年第 二十六卷第 二期 ( 4 ) 骨骼肌成肌细胞在 MOO诱导后可出现心脏转录因子 G A T A 4基因的表达，并随着剂量的增加表达增强， 但其 是否具有心肌细胞特有的电生理特征及功能，还有待进一步研究证实。 巴戟天寡糖对成肌细胞增殖及分化的影响 王奎鹏冯国清胡香杰 郑州大学基础医学院药理教研室郑州4 5 0 0 0 1 目的：观察巴戟天寡糖 ( Mo r i n d a O ff i c i n a l i s Ho w Ol i g o s a c c h a r i d e ，MO O)对成肌细胞增殖分化的影响。方法：采 用离体纯化培养乳 鼠双侧后肢骨骼
2、肌成肌细胞的方法，制成浓度为 l 1 0 S mm 的成肌细胞悬液， 接种到2 5 ml 培养瓶中 培养 。实验分为5 组：空 白对照组 5 氮杂胞苷 ( 5 - Az a ) ( 1 0 mo l mL)对照组；MOO d , 、中、大剂量 ( 1 O 0 t g ml 、 3 0 0 g ml 、5 o o ， m1 )组；并检测以下指标：l _ 成肌细胞形态学变化。2 免疫细胞化学法鉴定结蛋白 ( D e s mi n ) 。3 免疫细胞化学法测定转化生长因子 B l( T G F 一 13 1 )和增殖细胞核抗原 ( P C N A) 。4 四甲基偶氮唑蓝 ( MT T)法检测 巴戟天
3、寡糖对成肌细胞增殖的影响。5 绘制生长曲线。结果：1 倒置显微镜下，成肌细胞培养2 4 h后，可见大量折光 率强的圆形细胞贴壁， 且有极少量细胞有小突起；4 8 h后，细胞呈梭形并出现单个细胞核；7 2 h后，成肌细胞变得细 长，并相互拉网，从单核期进入合体细胞阶段；继续培养，成肌细胞相互融合，形成多核性长管状初生肌管；培养第 5 天后，可观察到分化状态较好的肌管有自发性搏动的收缩；用d e s m i n抗体对分裂增殖4 5天的成肌细胞进行间接 免疫酶染色， 细胞核外周及胞浆呈棕黄色的d e s m i n 阳性反应，表明培养的细胞为成肌细胞；成肌细胞生长曲线显示原 代成肌细胞生长培养4 8
4、 h后开始增生，早期增殖较快，倍增时间为5 d ，6 7 d进入平稳期 。2 与空 白对照组和阳 性对照组相比， MOO小、大剂量组单核成肌细胞及多核初生肌管内的胞浆中免疫细胞化学反应T G F 13 1 呈阳性反应， 中剂量组呈强阳性反应。3 与空白对照组和阳性对照组比较，MO O 小、中剂量组多数单核成肌细胞核免疫细胞化学 反应呈P C NA阳性：大剂量组呈强阳性反应。4 MT T 法检 J MOO以剂量方式促进成肌细胞增殖，且各组与对照组相 比均有显著差异， 在5 0 0 g ， m剂量达到最大效应( 尸 O 0 5 ) 。 结论：1 MOO 具有明显促进成肌细胞增殖及分化的作用。 2
5、MOO 可在一定剂量范围内增加成肌细胞的T G F 13 1 表达，但是剂量过高反而抑制其表达，其原因还需进一步深入探 讨。3 P C N A可作为成肌细胞增殖的一种标志物 。 巴戟天寡糖促治疗性血管新生机制的探讨 孟祥光冯国清胡香杰 郑 州大 学基础 医学院药理 教研 室郑州 4 5 0 0 0 1 目的：通过观察巴戟天寡糖 ( Mo r i n d a o f fi c i n al i s H o w o fi g o s a e c h a r id e s ， MOO )对 A MI 后大鼠心室重构 ( V e n t r i c u l a r R e mo d e l i n g
6、 )的干预及缺血 肌组织局部血小板源性生长因- B ( P l a t e l e t D e r i v e d E n d o t h e l i a l G r o w t h F a c t o r - B P D G F B ) 及血 管内皮细胞生长因子受俸 1 ( F m s - l i k e T y r o s i n e Ki 2 n a s e - 1 ,F l t - 1 ) 的蛋白表达变化，进一步探讨MOO 促进治疗性血管新生作 用的机制，为心脏组织工程学的临床应用提供实验依据。方法：6 0 只雄性Wi s t a r 大鼠，除假结扎组 1 0只开胸分离冠脉后 只穿线不
7、结扎外，其余5 0只均结扎冠状动脉左前降支，制成AMI 模型，随机分为模型组，麝香 3 0 m g k d - ) 阳性 药对照组，MOO 小、中、大( O 7 g d 、1 4 g k 。 d - 、2 8 g k ) 剂量组，每组 l 0只。各组均于手术后24 h内开始给 药，模型组及假结扎组每d用与药物组等容积的蒸馏水灌胃，给药6 w后处死。心肌取材进行心脏大体及一般组织形态学 观察， 测定大鼠 左心室质量指数 ( L e ft V e n t r i c u l a r M a s s I n d e x ， L V MI ) ， 观察药物干预后各组大鼠心率变化 C h a n g i
8、 n g R a t e o f H e a r t R a t e ，C R OH R ) ， 应用免疫组织化学S P法检测各组大鼠缺血心肌细胞 P D GF - B、 F it - 1 蛋白表达的情况， 用病理图像 分析系统测定生长因子蛋白表达光密度值( 0 p c a l D e n s i t y V a l u e ，O DV ) ，并进行半定量分析。结果：1 心脏形态观察：与假 43 中国药理通讯 2 0 0 9 年第二十六卷第二期 结扎组比较模型组心脏体积变大，左心室腔明显扩大，并可见坏死 ( 灰A色) 变薄的心室壁；阳性药对照组及MO O各组 与模型组相比随着剂量的增加左室腔明
9、显减小，左室坏死面积明显缩小。 心肌一般组织形态学观察： 各组光镜下均可看到 新生的毛细血管； 其中假结扎组毛细血管增生不明显、模型组可见少量毛细血管增生、 MO O 小、中剂量组可见较多增生 的毛细血管、麝香保心丸组和 MO O大剂量组可见多数增生的毛细血管。2 处死前用药各组 C R OH R均较模型组显著降 低 ( P 0 o 5 ) ，其中MOO大剂量组的差异最为明显。MOO 三个剂量效应呈显著负相关 ( r -0 8 2 8 ) 。 3 MOO 及麝香宝心 丸干预6 w后其 L V MI 值除MO O小剂量组外其它各组均较模型组为小，统计上均有显著差异 0 o 5 ) ； MOO 三
10、个剂量 呈显著负相关 ( r - - - 0 8 9 0 ) 。4 与假结扎组相比模型组 P D G F B蛋白表达显著升高 ( P 0 0 5 ) ，用药各组P D G F - B蛋白表达 均高于模型组，以MO O大剂量组蛋白表达量最高； MO O三个剂量呈显著正相关 ( 8 8 8 ) 。5 与假结扎组相 匕 漠型组 F l t 一 1蛋白表达显著增高 ( 尸 O 0 5 ) ；用药各组 F lt - 1蛋白表达均高于模型组，其中以麝香保心丸组与M O O大剂量组表达 量最高， MOO 三个剂量效应呈显著正相关 ( r = 0 9 4 5 ) 。结论： L MOO 能够改善心梗后大鼠的一般
11、状况，延缓和改善大鼠 的心室重构。2 MOO 可显著促进缺血心肌治疗 血管的新生。3 MO O呈剂量相关性诱导缺血心肌局部P D G F - B及F l t - 1 蛋白表达升高，为促进治疗性血管新生的重要机制之一。 巴戟天寡糖促治疗性血管生成作用的实验研究 杨景柯冯 国清胡香杰 郑州大 学医学院药理教研室郑 州4 5 0 0 0 1 目的：观察巴戟天寡糖 ( Mo r i n d a o f fi c i n a l i s H o w o l i g o s a c c h a r i d e s ， MO O)对鸡胚绒毛尿囊膜 ( C A M)模型及大鼠 急性心肌梗死 ( A MI )模
12、型血管生成的作用。方法：1 制备MOO ( O 7 、1 4 k g 、2 8 g k g ) 含药血清，建立C A M模 型 ，随机分为N S 组、空 白血清组、碱性成纤维细胞生长 因子 ( b a s i c fi b r o b l a s t g r o w t h f a c t o r , b F G F )组及MO O d , 、中、 大剂量组，每组l 0 只。体视显微镜下观察血管生成表现，并进行一二级血管计数 。2 5 0 只雄性Wi s t a r 鼠，除假结扎 组开胸分离冠脉后只穿线不结# L k b ，其余4 0 只均制成急性心肌梗死 ( AMI )模型，随机分为模型组，
13、麝香保心丸组( 3 o mg k g d ) ，MOO d , 、中、大剂量组( 0 7 k g d 、1 4 g k g d 、2 8 g k g d ) ，每组8 只。另取l 0 只设为。各组均于造模后 2 4 h 内开始药物( 灌胃) 干预，假结扎组及模型组给予等容积的生理盐水。6 W 后处死，心肌取材，行一般组织形态学观 察， 检测各组大鼠缺血心肌中微血管密度( MV D) ， 以及血管内皮生长因子( V E G F ) 、 碱性成纤维细胞生长因子( b F G F ) 蛋白的表达 ， 用病理图像分析系统测定生长因子蛋白表达光密度值，并进行半定量分析。结果：1 C AM 血管生成： N
14、S 组、空白血清组无特异性血管生成，或特异性放射状程度低，b F G F 组和MOO 含药血清组主干血管向载体物靠拢， 中小 血管明显增生，尤其是小血管以载体为中心呈辐射状生长；与空白血清组相比，MOO 各剂量组)b F GF 组、二级血 管数目显著增加 ( PO 0 5 )。2 与假结扎组、模型组比较，心肌组织切片可见MO O 各剂量组和麝香保心丸组毛细血 管增生及MVD显著增多 ( 户0 0 5 ) 。 3 与假结扎组和模型组相比， 麝香保心丸组、 MOO 各剂量组大 鼠缺血心肌v E G F 、 b F GF 光密度值显著增高 ( P0 0 5 ) 。结论：1 巴戟天寡糖可明显促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成。2 巴戟天寡糖可 明显促J _ A MI 后大鼠缺血心肌的血管生成，改善缺血心肌局部的侧支循环。3 巴戟天寡糖可明显促进 6 v I I 后大鼠缺 血心肌V E G F 、b F G F 蛋白的表达，这可能是其促血管生成机制之一。 原花青素对大 鼠脑缺血再灌注损伤能量代谢的影响 陈香红张 艳冯 国清贾丹辉胡香杰 郑州大学基础医学院药理学教研室郑州4 5 0 0 5 2 目的：研究原花青素 ( p r o c y a n i d i n ，GS P )对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤代谢障碍的影响。方法：S D 大鼠 4 4
