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1、KT-809 Osteocalcin（1-43/49）人稳定型骨钙素（人稳定型骨钙素（1-43/491-43/491-43/491-43/49）特异性酶免试剂盒）特异性酶免试剂盒OsOsOsOsteocalcinteocalcinteocalcinteocalcin (1-43/49)(1-43/49)(1-43/49)(1-43/49) SpecificSpecificSpecificSpecific E E E ELISALISALISALISA KitKitKitKit EnzymeEnzymeEnzymeEnzyme LinkedLinkedLinkedLinked ImmunoSor
2、bentImmunoSorbentImmunoSorbentImmunoSorbent AssayAssayAssayAssay (ELISA)(ELISA)(ELISA)(ELISA) forforforfor thethethethe MeasurementMeasurementMeasurementMeasurement thethethethe LevelLevelLevelLevel ofofofof stabilestabilestabilestabile formformformform ofofofof HumanHumanHumanHuman OsteocalcinOsteo
3、calcinOsteocalcinOsteocalcin (1-43)(1-43)(1-43)(1-43) andandandand OsteocalcinOsteocalcinOsteocalcinOsteocalcin (1-49)(1-49)(1-49)(1-49)ForForForFor InInInIn VitroVitroVitroVitro DiagnosticDiagnosticDiagnosticDiagnostic UseUseUseUseKTKTKTKT 809809809809KT-809 Osteocalcin2人稳定型骨钙素（人稳定型骨钙素（1-43/491-43/
4、491-43/491-43/49）特异性酶免试剂盒）特异性酶免试剂盒【预期用途】预期用途】 这个 ELISA 试剂盒是用来对人体骨钙素（1-43） 和骨钙素（1-49） （也被称为 N 端和中部骨钙素或稳定 型骨钙素）的浓度进行定量检测。该检测项目可以用 来检测人的骨形成活性或者成骨细胞活性，他们与代 谢性骨疾病中骨更新率的变化相关，例如骨质疏松， 原发性甲状旁腺功能亢进症，甲状腺功能亢进，畸形 性骨炎以及肾病性骨营养不良。【简介】简介】 骨钙素也叫做骨钙蛋白质（BGP）是骨骼和牙本 质中的一种主要的非胶原蛋白质。骨钙素的合成物包 括维生素 K 和维生素 D3。 新合成的骨钙素部分释放到 血流
5、中，部分渗入到骨基质中。骨钙素（1-49）及其 片段以及骨钙素（1-43）都会释放到血流中去。在血 液循环、肝、肾中，骨钙素（1-49）降解生成稳定型 血清骨钙素 （1-43） 。 当抽取人体样本进行体外降解时， 同样能生成稳定型血清骨钙素（1-43） ，因为骨钙素 （1-49) C 端的六个氨基酸不稳定，在体外时，这六个 氨基酸极易在室温下脱落。一些研究证明，临床上对 稳定型骨钙素骨钙素(1-43/49) 进行测定，其效果更 好，它能对骨更新率提供更加精确的评估。 骨钙素由成骨细胞产生，在骨骼形成过程中，它 通常作为一个生物化学指标或者生物指标。在用骨形 成药物 (如 Forteo) 治疗骨
6、质疏松时， 通常能观察到稳 定型血清骨钙素水平的增高与骨质密度的增加呈现出 很强的正相关。在许多药物治疗研究中，骨钙素是骨 形成的特定疗效跟踪和评定的首选生化指标。【检验原理】检验原理】 这个 ELISA 的设计，研发和生产的目的是对血清 或者血浆样品中稳定型人骨钙素（1-43）和骨钙素 （1-49）进行定量检测。该试剂盒是基于运用两种特 异性抗体与人骨钙素的不同抗原表位结合的“双抗体 夹心”技术。 将标准品、质控品、和待测样品加入链霉亲和素 包被的微孔板中。随后，加入生物素偶联的人骨钙素 N 端特异性多克隆抗体和过氧化物酶标记的人骨钙素 20-43 区域特异性单克隆抗体混合物。 经过第一个保
7、温 孵育期后，形成了“生物素抗体-人骨钙素-HRP 单克 隆抗体”的“双抗体夹心”结构，该免疫复合体在特 异性“链霉亲和素-生物素”亲和结合的作用下被吸附到微孔板的内壁。游离的单抗和缓冲基质则在洗涤过 程中冲走。微孔板加入过氧化物酶基质（3,3,5,5-四 甲基联苯胺，TMB）并经过一段时间的反应后，测量 吸光度。微孔板内壁的免疫复合体的酶活性与样本中 人骨钙素的浓度成正比。根据标准品中不同的人骨钙 素浓度的吸光度，按照“点到点”或者“4 - 参数法” 绘制标准曲线，待测样品中骨钙素浓度可以直接从标 准曲线按测量到的吸光度得到。【试剂：准备和储存】【试剂：准备和储存】 收到试剂盒后应在 2-8
8、保存。 试剂盒的有效期标 于包装盒上。试剂在此条件下稳定至包装标签上的有 效日期。 试剂使用前置于室温下复温。不同批号的试剂不 能混合使用。 1. 1. 1. 1.链霉亲和素包被的微孔板链霉亲和素包被的微孔板(Cat.(Cat.(Cat.(Cat. No.No.No.No. 10040)10040)10040)10040) 一块链霉亲和素包被的微孔板有128条 （96个）。 微孔板置于铝箔特制袋中，加入干燥剂，密封。储存 于 2-8中， 微孔板在此条件下稳定至包装标签上的有 效日期。 2. 2. 2. 2.HRPHRPHRPHRP 标记骨钙素抗体标记骨钙素抗体(Cat.(Cat.(Cat.(C
9、at. No.No.No.No. 30288)30288)30288)30288) 1 瓶 1.2mL 含酶蛋白质稳定剂的 HRP 标记单克 隆抗人骨钙素（20-43）抗体试剂。本试剂在使用前必 须先用生物素标记抗体稀释。本试剂应当储存于 2-8 ，试剂在此条件下稳定至包装标签上的有效日期。 3. 3. 3. 3.生物素标记骨钙素抗体生物素标记骨钙素抗体(Cat.(Cat.(Cat.(Cat. No.No.No.No. 30289302893028930289） 2 瓶 12 mL 含蛋白质稳定剂的生物素标记抗人骨 钙素 N 端特异性抗体试剂。本试剂在使用前必须先用 来稀释 HRP 标记的单克
10、隆抗人骨钙素（20-43）抗体 试剂，成为生物素偶联的人骨钙素 N 端特异性多克隆 抗体和过氧化物酶标记的人骨钙素 20-43 区域特异性 单克隆抗体混合物， 该抗体混合物才可以直接用于测 试骨钙素。本试剂应当储存于 2-8，试剂在此条件下 稳定至包装标签上的有效日期。 4. 4. 4. 4.ELISAELISAELISAELISA 浓缩洗涤液，浓缩洗涤液，30X30X30X30X (Cat.(Cat.(Cat.(Cat. No.No.No.No. 10010)10010)10010)10010) 1 瓶 30 mL 的 30 倍浓缩液。用前以 870 mL 的蒸 馏水稀释，混合均匀。稀释后，
11、洗涤液含表面活化剂 磷酸盐缓冲液，其中不含叠氮化合物和无任何水银防 护层剂。 稀释液能在室温下储存，试剂在此条件下稳 定至包装标签上的有效日期。 5. 5. 5. 5.ELISAELISAELISAELISAHRPHRPHRPHRP 基质基质(Cat.(Cat.(Cat.(Cat. No.No.No.No. 10020)10020)10020)10020) 1 瓶含 22mL 3,3,5,5-四甲基联苯胺（TMB）和过KT-809 Osteocalcin3氧化氢的溶液。本试剂应当储存于 2-8，试剂在此条 件下稳定至包装标签上的有效日期。 6. 6. 6. 6.ELISAELISAELISAE
12、LISA 终止液终止液(Cat.(Cat.(Cat.(Cat. No.No.No.No. 30357)30357)30357)30357) 1 瓶含 12 mL 稀硫酸的溶液。 本试剂可储存在 2-8 或室温下，试剂在此条件下稳定至包装标签上的有 效日期。 7. 7. 7. 7.人骨钙素标准品人骨钙素标准品(Cat.(Cat.(Cat.(Cat. No.No.No.No. 30291302913029130291 30296)30296)30296)30296) 6 瓶含不同人骨钙素浓度的冻干粉剂标准品，其 中不含叠氮化合物和无任何水银防护层剂。每瓶标准 品的精确浓度请参照瓶上标签或该试剂盒的
13、分析证 书。本试剂应储存于 2-8中，试剂在此条件下稳定至 包装标签上的有效日期。 8. 8. 8. 8.人骨钙素质控品人骨钙素质控品(Cat.(Cat.(Cat.(Cat. No.No.No.No. 30297302973029730297 30298)30298)30298)30298) 2 瓶含不同人骨钙素浓度的冻干粉剂质控品，其 中不含叠氮化合物和无任何水银防护层剂。每瓶质控 品的浓度请参照瓶上标签或该试剂盒的分析证书。本 试剂应储存于 2-8中， 试剂在此条件下稳定至包装标 签上的有效日期。【安全事项】安全事项】 试剂必须在专业的检验室使用。牛血清白蛋白等 制作试剂的生物原材料来源于
14、美国内陆的 48 个州。 这 些材料仅从完全健康的动物身上获得，这些动物自始 至终有兽医的监管，没有接触性传染病。进行实验时 需要带上手套，以防处理试剂时可能被感染。避免接 触 TMB，过氧化氢以及硫酸试剂。TMB 对皮肤和黏 膜有刺激性，可能会造成皮肤的过敏性反应。硫酸对 皮肤有严重刺激性，不要将硫酸溅到眼睛、皮肤或者 衣服上。不要吞咽或者吸入烟雾。若碰到硫酸，用大 量的水冲洗 15 分钟以上。 请按照最佳实验室规范进行各项操作。【所需材料（未提供） 】【所需材料（未提供） 】 1.血清或者血浆收集管。 2.准确移取 25 L, 100 L, 200 L, 和 1000 L 等 溶液的单通道
15、移液器。 3.适合分装 100L 和 200 L 的重复移液器。 4.适合上述液体的一次性使用移液枪头。 5.12 x 75 mm 或者 13 x 100mm 一次性塑料试管。 6.1000mL 一次性带盖塑料瓶。 7.铝箔纸。 8.去离子水或者蒸馏水。 9.塑料测试孔膜或者聚乙烯薄膜。10. ELISA 微孔板的洗涤瓶或者自动（半自动）洗涤 系统。 11.酶标仪可读 OD 450 nm。 12. 酶标板振动器。【样本采集】样本采集】 在人骨钙素测定时，需收集人血清或者血浆，总 共仅 50L 血清或者血浆就能完成测定。 样本收集前不 需做特殊准备。收集的样品必须为全血，室温下凝固 30 分钟以
16、上，然后离心 10 分钟（850-1500xg） ，收集 血清。全血必须在 3 小时内分离出血清，然后装入干 净的试管中。血清可在 2-8或者室温下储存 6 天。 血 清在-20以下能长时间保存。冻融不得超过三次。样 本收集时避免出现溶血。【检测方法】检测方法】 1. 1. 1. 1.试剂的准备试剂的准备 （1）使用前，将所有试剂置于室温下复温。不要将 不同批号的试剂混合。 （2）ELISA 浓缩洗涤液在使用前必须稀释到适当 的浓度。详见试剂具体说明。 （3）添加 0.5mL 的蒸馏水或者去矿物质水重新配 制成液态标准品和质控品。 将液态标准品和质 控品静置5分钟， 然后上下倒置或者旋转混匀。 确保所有的固体物均已完全溶解。液态标准品 和质控品在首次使用后需立刻储存于-18以 下。冻融不得超过三次。 2. 2. 2. 2.检测步骤检测步骤 （1） 将适当数量链霉亲和素包被的微孔板置于框架 上， 所需微孔板的总数是两份人骨钙素标准品、 质控品和未知样品数的总和。将未使用的微孔 板装于装有干燥剂的铝箔袋
