《HPLC测定甲双胍有关物质的含量》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HPLC测定甲双胍有关物质的含量（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、参 考 文 献1 中华人民共和国卫生部药典委员会 . 中华人民共和国药典: 一部 M . 2000. 351-352.2 于淑华, 李景清, 吴志英等 . 薄层扫描法测定三子散中栀子苷的含量J . 药物分析杂志 . 1996, 16( 4) : 267-268.3 黄新生 . 高效液相色谱法测定龙胆泻肝丸中栀子苷的含量 J .中国中药杂志, 1994, 19( 11) : 674-676.4 童玉懿, 章观德, 相乐和彦等 . 栀子及其制剂中栀子苷的高效液相色谱分析 J. 中国中药杂志, 1989, 14( 4) : 228230.5 王钢力, 赵淑杰, 陈德昌 . RP-?LC 测定大黄栀子
2、中环烯醚萜苷类的含量 J . 中国中药杂志, 1999, 24( 10) : 616-618.( 收稿日期: 2002- 07-09)HPLC 测定二甲双胍有关物质的含量陆 宇 崔 颖安徽省药物研究所 ( 合肥 230022)摘 要 目的: 建立一种新的测定二甲双胍有关物质的HPLC法。 方法: 采用色谱柱Polaris C18柱(250mm4. 6mm) ; 检测波长 218 nm; 流量 1 ml/min, 比较流动相中各有关因素对色谱行为的影响。结果: 优选出适宜流动相为含 0. 05mml/L 十二烷基磺酸钠、 1% 三乙胺、 0. 0667mol/L 磷酸二氢钾、 5% 乙腈、 以
3、6mol/L 氢氧化钾和磷酸调 pH3. 0 的水。结论: 采用本流动相系统, 改善了二甲双胍与主要有关物质双氰胺的分离, 提高了色谱分析适应性。关键词 二甲双胍; 双氰胺;HPLC; 含量测定HPLC Methods to Analyse Related Substances for Metformin HydrochlorideLu Yu, Cui YingA nhui Institute of Drug Research( A nhui 230022)Abstract AIM: Some improvements have been made in analyzing relative
4、substances of metformin hydrochloride byHPLC. METHODS: U sing Polaris C18column(250 mm4. 6 mm) and a detection wavelength of 218 nm with a flow rate of 1ml/min.RESULTS:Fixed mobile phase is water with0. 05mml/L sodium dodecylsulphonate、 1%triethylamine、 0. 0667mol/L monopotassium phosphate、 5%aceton
5、itrile and pH3. 0.CONCLUSION:This mobile phase improves the resolution of met-formin hydrochloride and relative substances dicyandiamide.Key words M etformin hydrochloride; Dicyandiamide; HPLC; Determination of content盐酸二甲双胍系中国药典二部收载品种, 临床 上广泛用于糖尿病的治疗, 其主要有关物质双氰胺检测使用 T LC 法, 此法存在检测员依赖性强, 结果误差大, 灵敏度不
6、佳的缺点。英国药典 1998 年版规 定使用 HPLC 法检测, 其色谱柱采用阳离子交换柱( SCX) , 提供 的参考 柱牌号 为 Waterman Parti-sphere 5?SCX 柱, 使用的填料与常见 SCX 所用填料类型不同, 不同品牌的 SCX 柱二甲双胍和其主要 有关物质双氰胺之间的分离度差异较大, 二甲双胍的保留时间过长, 色谱条件的适应性差。 本文建立了一个新的色谱条件, 选用常用的反相色谱柱, 并探讨了此条件下流动相中有关因素对色谱行为的影响, 结果改善了二甲双胍和双氰胺的分离度, 加快了分析时间, 提高了柱效, 具有较高的适应性和较好的实用性。1 实验部分1. 1 仪
7、器与试剂美国惠普高效液相色谱仪, 包括 G1311A 高效 液相色谱泵、 G1315A DAD 检测器、Chemstation工作站。二甲双胍对照品与双氰胺对照品均由中国药品26江苏药学与临床研究 2002 年第 10卷第 4期生物制品检定所提供。乙腈、 三乙胺、 磷酸为色谱纯, 其余试剂均为分析纯, 水为重蒸水。1. 2 色谱条件 色谱条件 A色谱柱为Polaris C18柱( 250 mm4. 6 mm) ; 检测波长为 218 nm; 柱温为室温。流动相为含 0. 05mml/ L 十二烷基磺酸钠、 1% 三乙胺、 0. 0667 mol/ L磷酸二氢钾、 5% 乙腈、 以 6 mol/
8、 L 氢氧化钾和磷酸 调 pH3. 0 的水; 流量为 1 ml/ min; 进样 20 ? l。色谱条件 B按英国药典 1998 年版规定, 色谱柱为 Water-man Partisphere 5?SCX 柱; 检测波长为 218 nm; 流动相为 1. 7% w/ v 磷酸二氢铵、 以磷酸调 pH3. 0的水; 流量为 1 ml/ min; 进样 20 ?l。2 方法与结果2. 1 测试液的配制取二甲双胍对照品和双氰胺对照品适量, 加水配制各含 0. 1 mg/ ml 的混合溶液。2. 2 流动相中各因素对色谱峰行为的影响 2. 2. 1 乙腈的浓度保持流动相中三乙胺、 磷酸二氢钾、 十
9、二烷基磺酸钠和 pH 不变, 改变乙腈的浓度, 考察色谱峰保留时间和分离度随乙腈浓度的情况, 得图 1。 由图 1 可 见, 二甲双胍和双氰胺的保留时间随乙腈浓度的增大而减小, 并使分离度也减小。 为避免与溶剂峰或制剂中辅料峰发生重叠, 双氰胺应具有一定的保留时 间, 同时普通反相柱在 100%水相条件下保留时间易漂移, 为保证条件的重复性, 将乙腈浓度定为5% 。图 1 乙腈含量对分离度的影响2. 2. 2 磷酸二氢钾的浓度 保持其他条件不变, 仅改变磷酸二氢钾的浓度,得图 2, 由图 2 可见, 当磷酸二氢钾的浓度增大时,二甲双胍的保留时间减小, 双氰胺的保留时间基本无明显减小。 二甲双胍
10、的保留时间减小在浓度 0. 050. 1 mol/ L 区间变化趋缓, 通常 HPLC 中使用缓冲系统时盐浓度不宜过高, 本文选取盐浓度 0. 0667mol/ L。图 2 磷酸二氢钾浓度对分离度的影响2. 2. 3 pH 值保持其他条件不变, 仅改变pH 值, 得图 3, 由图3可见, 当pH 值增大时, 双氰胺保留时间基本不变,二甲双胍的保留时间减小, 二甲双胍作为有机碱, 在 低 pH 值时离解, 有利于离子对的形成和峰型的对称, 对照图 3 和色谱条件 B, 采用 pH 3. 0 较为合适。图 3 pH 对分离度的影响2. 2. 4 十二烷基磺酸钠的浓度保持其他条件不变, 仅改变十二烷
11、基磺酸钠的浓度, 得图 4, 由图 4 可见, 当十二烷基磺酸钠的浓度增大时, 双氰胺保留时间不变, 二甲双胍的保留时 间迅速趋于无穷大。2. 2. 5 三乙胺的浓度保持其他条件不变, 仅改变三乙胺的浓度, 得图5, 由图 5 可见, 当三乙胺的浓度增大时, 双氰胺保留时间不变, 二甲双胍的保留时间快速减小。经过对 照, 十二烷基磺酸钠的浓度 0. 05 mml/ L、 三乙胺的27江苏药学与临床研究 2002 年第 10卷第 4期浓度 1. 0% 时可得到理想保留时间。图 4 十二烷基磺酸钠浓度对分离度的影响图 5 三乙胺浓度对分离度的影响为二甲双胍保留时间 为双氢胺保留时间2. 3 流动相
12、配制方法的确定经“ 2. 2” 项下各试验, 流动相配制确定为按色谱条件A。2. 4 色谱柱耐用性考核 以同一厂家色谱柱分时进样, 比较保留时间的变化, 结果如表 1。表 1 分时进样保留时间变化对照表进样时间(h)02448双氰胺( tR, min)3. 413. 393. 42二甲双胍( tR, min)5. 725. 675. 69以三种不同厂家色谱柱测定双氰胺和二甲双胍的保留时间, 结果如表 2。表 2 不同色谱柱测定双氰胺和二甲双胍保留时间对照表色谱柱PhenomenexLUNA C18Meta ChemPolaris C18-AZORBAXXDB-C18双氰胺( tR, min)3
13、. 643. 393. 21二甲双胍( tR, min)7. 435. 664. 872. 5 分离结果色谱图上述测试液采用色谱条件 A 的分离结果见图6, 采用色谱条件 B 的分离结果见图 7。图 6 分离结果色谱图(A)双氰胺 盐酸二甲双胍图 7 分离结果色谱图(B)双氰胺 盐酸二甲双胍3 方法学研究3. 1 方法考察取上述混合溶液, 按色谱条件进样, 记录色谱图, 二甲双胍理论板数为 5671; 拖尾因子为 1. 07。 双氰胺和二甲双胍之间的分离达到基线分离。说明该条件能有效检测杂质。 3. 2 重复性取混合溶液连续进样 6 次, 二甲双胍的 RSD=0. 76%。3. 3 稳定性将混
14、合溶液放置 24 h, 于 1, 4, 8, 24 h 测定二甲双胍峰面积, 结果无明显变化。3. 4 灵敏度本品经流动相稀释, 当信噪比( S/ N) 3 时, 其 最低检出浓度 0. 1 ?g/ ml, 最低检出量为 2 ng。28江苏药学与临床研究 2002 年第 10卷第 4期4 讨 论由以上试验表明, 双氰胺的保留时间受乙腈浓度变化最显著, 其他条件的影响较小甚至没有影响。 二甲双胍的保留时间主要由三乙胺和十二烷基磺酸钠的浓度决定, 加入十二烷基磺酸钠可与二甲双胍生成离子对, 改变其色谱分配性质, 从而使保留时间增加; 三乙胺在此条件下可能和十二烷基磺酸根作 用, 与二甲双胍离子对竞
15、争保留, 使保留时间减小,类似于季胺盐的作用机理, 提示可将流动相中钾盐替换成铵盐, 其作用应与三乙胺相似。参 考 文 献1 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典: 二部M . 北京: 化学工业出版社, 2000. 5392 BP. 1998( 收稿日期: 2002- 05-10)逐瘀扶正胶囊中蒽醌类成分的含量测定周菊萍 陈 军 方 芸 刁雨辉南京大学医学院附属鼓楼医院 ( 南京 210008)摘 要 目的: 建立测定逐瘀扶正胶囊中蒽醌类成分含量的方法。方法: 利用蒽醌类成分与醋酸镁反应显红色的特性, 利用比色法测定其含量。结果: 醋酸镁比色法操作简便, 结果准确, 平均加样回收率为(100
16、. 781. 98)% , 重复性好(RSD=2. 78% , n= 5) , 可有效控制逐瘀扶正胶囊的质量。结论: 醋酸镁比色法可作为逐瘀扶正胶囊中蒽醌类成分的定量方法。关键词 蒽醌; 比色法; 含量测定; 逐瘀扶正胶囊Determination of Anthraquinones in Zhuyufuzheng CapsulesZhou Juping, Chen Jun, Fang Yun, Diao YuhuiDep artment of Pharmacy, Af f iliated Drum T ower H osp ital of Nanjing University, ( Nanjing 210008)Abstract Objective:To establish a method to determine the content of anthraquinones in Zhuyufuzheng capsules.Meth-ods:Anthraquinones in Zhuyufuzheng
