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1、行计算。关于 D - m t D N A，用我们使用的制片 方法难于观察到，它需用甲酞胺法的才能确切 观察到。据文献报道，在正常情况下，鸟类 m t D N A中的 D - m t D NA也少于2 肠3 1 。关于这些构象的功能意义有待进一步研究。JlJ一J JI一，3rrtr参考文献图3 鸽肝 二 t D N A结构电镜照片 A . 鸽肝线拉体，指针示一个完整的线粒休； B .鸽肝 mt D N A 的展环结构；C .鸽肝 m t D N A 的招螺旋结 构；D .鸽肝 m t D N A的蝴裸形结构。 41【 5 1赵邦佛等：1 9 8 5 。生物化学杂志，1 ; 4 9 , 赵邦佛等：
2、1 9 8 3 。中国科学 ( B辑） ，( 3 ) ; 2 1 3 , 赵邦佛等：1 9 8 3 。北京大学学 报 （ 自 然 科学版） ( 1 ) :7 2 , 张龙翔等：1 9 8 1 ,生化实脸方法和技术， 人民教育出版 社， 2 1 9 页。 吴 鹤龄等 ：1 9 8 3 ) 遗传学实验方法和技末， 高等教育出 版社， 1 1 5 页。 A g s t e r i b b e , E . e t a l . : 1 9 7 2 . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a ,2 69 : 2 9 9 A tt a r d i , G . e t
3、a l . : 1 9 7 6 . G e n e t i c s a n d B i o g e n e s i s o f C h l o r o p l a s t s a n d Mi t o c h o n d r i a ( B u c h e r , T . e t a l . e d s ) N o r t h H o l l a n d I n c ，p . 5 7 3 B r o w n , W. M. e t a l： 1 9 7 4 . P r o c . Na t . A c a d . S c i .U S A. , 7 1 ：4 6 1 7 . Da v i s
4、, R. W. e t a l . : 1 9 7 1 . Me t h o d s i n E n z y mo l o g y , V o l . 2 1 D , A c a d e m i c P r e s s , p . 4 1 3 . K o i k e , K . e t a l . : 1 9 7 6 . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a , 4 2 5 :1 8 Mo r i m o t o ,胶 e t a l . : 1 9 7 5 . P r o c . N a t . A c a d . S c i .U S A, 7 2
5、 : 3 8 6 8 . S a n d e r s , J . P . M. e t a l . : 1 9 7 5 . B i o c h i m . B i o p h y s . R e s . C o m m u n s , 6 5 : 6 9 9 Wh i t e , M. T. e t a l . : 1 9 7 5 . C a n c e r R e s , 3 5 : 8 7 3 .J工J户0，1rr8910nLfr为1 . 8 6 , A260./A2” 二 的比值为2 . 0 9 。由此可 见， m t D N A纯化得比较纯净， 可以用于电镜检 测。 （ 二）m t D
6、 N A 的电 镜观案结果 图3 , B为鸽肝 m t D N A的展环结构的电 镜照片 ，图 3 , C 为它的超螺旋结构的电镜照 片， 图3 , D亦为超螺旋结构， 但呈蝴蝶形。我们认为这些结构可能都是鸽肝 m t D NA 构象的 拓扑异构型。至于它们出现的比例数 ，没有进 1 2 1 1 3 1细 胞共养和B r d U对人和小鼠N O R 。 活 性的 影响颜 永 衫（ 中国科学院遗传研究所， 北京）不同种类细胞的共养可引起不同种细胞间 的代谢协同现象，即在细胞相互接触的地方进 行细胞间分子交换。它可降低姐妹染色单体互 换频率11 21 促进细胞 DN A合成E7 3 、 细胞代谢缺
7、 陷互补12 5 ,26 1 和提高细胞对药物的敏感性19 ,2 8 1 0 核仁组织者 （ N O R s )是细胞 r D NA进行 转录的地方， 细胞银染 N O R s ( A g - N O R s ）数可用来估计细胞 1 8 S + 2 8 S r D NA的转录活 性ti ll 0对于每个物种来说， 细胞 A g - NO R s数 和它们在染色体上的位置都是相当稳定的t ts l 细胞 A g - N O R s 数或它们在染色体上位置的改Y a n Y o n g s h a n : I n f l u e n c e o f b o t h C o c u l t u r
8、e a n d B r d U o n N O R s A c t i v i t y o f H u m a n a n d M o u s e C e l l s 本文于 1 9 8 5 年 7月 1 7 日收到。 2 1 变意味着细胞代谢过程或遗传性状已发生了较 大的改变。因此， 探讨各种因素对 N O R s活性 的影响很有必要， 但至今有关的报道仍少。 已 见体细胞杂种2 ,6 7精子发生过程山， 和细胞周 期1 37 A g - NO R ：的变化；R NA合成抑制剂2 41 和某些疾病 10 引起的A g - NO R s 改变等。我们 曾首次报道 B r d U可抑制中国仓鼠细
9、胞 N O R s 活性2 l , d C可解除B r d U对NO R s 活动的抑制作 用3 ,2 8 1 。我们还报道了B r d U抗性细胞的N O R s 活性也被B r d U所抑制4 , 30 7 。那么，是否 B r d U 也能抑制其他物种细胞的 N O R s 活性？由于 在体细胞杂种中，某一亲本2 7 1或 2 个亲本幻的 NO R s活性会受到抑制，是否细胞共养也能对 细胞 r D NA 转录活性产生某些较大的影响呢？ 本文报道细胞共养和 B r d U 对人及小鼠N O R s活性的抑制作用。到恢复， 当P G 1 9 在含B r d U ( 3 0 p g / m
10、l ） 的ME M 中生长4 8 小时后， 洗去细胞表面的 B r d U，并 让细胞在无B r d U的ME M中生长 5 0 小时。加 人 B r d U后， 各组细胞都在黑暗的条件下进行 培养。 3 染色体制片见以前的报道E l l o （ 二）A g - N O R 。显色和分析 取片龄3 -6 天染色体制片， 按已报道的方 法3 ， 进行 A g - N O R s显色。每组观察5 3 -2 2 8 个银染清晰、 染色体形态良好的细胞， 记录每个 细胞 A g - NO R s数和携带 A g - NO R s的染色 体数。 由于 P G 1 9细胞有的染 色体携带 4 个A g -
11、 N O R s ，为了便于比较， 我们仍称为人染色 体2 70材 料 与 方 法（ 一）细胞的处理和染色体制片 1 细胞的选择及其特征P G 1 9细胞为 小鼠细胞株， 除了有1 条中着丝粒( R b 1 2 . 1 2 ） 和 1 条近中着丝粒染色体（ R b 5 . 1 5 ） 外， 其余的染 色体（ 约3 7 条） 为端着丝粒染色体（ 图版1 , 6 ) “ . MG c 是人胃癌细胞株 ，细胞染色体众数为 6 5 条，绝大多数染色体是中着丝粒或近中着丝粒 染色体（ 图版1 , 1 ) o He L a为人宫颈癌细胞株。 上述细胞在含1 5 小牛血清的ME M培养基中生长良好。 2 细
12、胞的分组处理（ 1 ) B r d U组和对照组：把上述细胞各分成 2 组，1 组加人 B r d U, 最终浓度为 3 -3 0 Fz g / m l ，另 1 组为对照组（ 即 不加 B r d U) o ( 2 ） 细胞共养组：先将 P G 1 9和 MG C细胞等量混合培养， 保证细胞之间能充分 接触， 再按上述方法处理细胞。( 3 ) d C 加B r d U 组：为了探讨d C能否消除 B r d U对小鼠细胞和人细胞 N O R 。活性的抑制作用 ， 我们把 d C 和 B r d U同时加人到细胞共养组， 最终浓度都 是3 0 Fz g / m l o ( 4 ） 洗去B r
13、d U组：为了探讨在洗 去 B r d U后， 被抑制的小鼠NO R s 活性能否得结果（ ）B r d U对P G 1 9 , M G C和H e L a 细 胞的 N OR 。活性的抑制如表 1 所示 ， 若培养基中 B r d U 的浓度为 3 u g / m l , B r d U并没有使MG C细胞的A g - N O R s 数和携带 A g - NO R s的染色 体 数 减 少 归 0 . 0 5 ) 。当B r d U浓度提高到3 0 u g / m l 时， 与对 照组相比，B r d U 已分别使 P G 1 9 , MG C和 H e L 。 细胞的A g - NO R
14、 s 数减少了6 6 . 1 务, 1 7 . 6 肠 和3 0 . 1 %， 细胞携带 A g - N O R s的染色体数也 分别减少了3 2 . 6 外、 1 8 . 1 外和 2 4 . 6 务。B r d U还使细胞A 。染色体数由原来的 2 . 8 0条减少到 0 . 1 8 条， 即减少了9 3 . 6 沁。各实验组与它们相 应的对照组的差异均极显著 （ P0 . 0 0 1 ) . P G 1 9 细胞先在含 B r d U 培养基中生长4 8小时后 ， 再在无 B r d U 的培养基中继续生长 5 0 小时， 此时细胞 A g - NO R s 数和携带A g - NO R
15、 s 的染色体数成倍地增加 （ 表 1 ) ， 细胞 A 。 染色体数也明显提高 （ 即由 0 . 1 7条增加到 0 .9 3 条） 。 显然， 洗去 B r d U组与B r d U处理组之间的差异 极显著 （ P 0 . 0 0 1 ) . 总之，B r d U可使上述3种细胞的 A g - N O R s 数 明显地减少 ， 在洗去 B r d U后 ， 细胞的A g - NO R s 数以及携带A g - NO R s 的染色休数会 得到恢复。 这表明B r d U对人和小鼠N O R 、 活 2 2 表1 B r d U对P G 1 9 , MG C和H e 1 . a 细胞的N
16、O R 。 活性的抑 制（ 平均值土 标准误）细胞类型B r d U d C 观察细 A g - NO R s / 细胞 带 A g - NO R s A ,染色体数 细胞胞数染色体数 细胞浓度时间浓度时间 ( R g / m l ) （ 小时）( f i g / m l )（ 小时）P G 1 9 0 0 0 0 6 8 2 0. 7 8 士 0. 7 8 6. 69 土 0. 1 7 2 . 80 3 0 4 8 0 0 1 1 4 7. 0 5 土 0. 4 6 4. 51 土 0. 2 6 0 . 1 7 3 0 4 8 0 0 5 3 1 4. 5 1 土 0. 3 9 7. 7 7 士 0. 3 5 0 . 9 3 3 0 4 8 3 0 4 8 60 1 4 1 0 士 0. 4 96 . 85 士 0 . 2 0 0. 9 8 M G C 0 0 0 0 1 0 0 8. 9 7 0. 2 1 4. 69 土 0 . 1
