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1、 2 0 0 9年 5月 第 l 9卷第 5期 中国比较医学杂志 CHI NE S E J OU R NAL OF C OMP AR AT I VE ME DI CI NE Ma y，2 O O 9 Vo 1 1 9 No 5 ) 研 究报告 $ ! ； 寄 、 # 、 f 五味子乙素对二氧化硅致大鼠肺损伤的保护作用 李曙芳 ， 刘 田福 ， 郭 民， 王志平 ， 薛亮亮 ( 山西医科大学实验动物 中心 ， 太原0 3 0 0 0 1 ) 【 摘 要】 目的探讨 五味子乙素( s c h i s a n d r i n B， S c h B ) 对二氧化硅致大 鼠肺损伤 的保护作 用。方法将
2、6 4只 大鼠随机分为对 照 组、 染 矽尘 组 、 S c h B干 预组 。非暴 露 气管 法 建立 大 鼠二 氧 化硅 矽 肺模 型 ， 灌 胃给 予 S c h B 8 0 m g k g d 。 药后 3 、 7 、 1 4和 2 1 d ， 对照组、 染矽尘组 和 S c h B干预组分别 随机安乐死 4 、 6 和 6只大 鼠， 取其肺组织 ， 测 定肺 系数 ； 光镜观测其病理 8 切片 ； 紫外分光光度计检 测大 鼠肺组织匀浆 中羟脯氨酸( h y d r o x y p r o l i n e ， H Y P ) 、 丙二醛 ( m a l o n d i a l d e
3、h y d e ， M D A ) 、 谷胱甘肽( g l u t a t h i o n e ， G S H ) 的含量 变化。结果 S c h B对矽肺病理形 态学有 明显的改善作 用 ， 可以降低染矽大鼠的肺系数 ， 降低肺组织匀浆 中 H Y P和 M D A含量 ， 提高 G S H含量 ， 与染矽尘组 比较 ， 具有统计 学差异( P9 8 ， 批号 ： 1 1 0 7 6 5 2 0 0 6 0 9 ； 橄 榄油购 于 北 京华 联 超 市 。五 味 子 乙 素 2 0 g L溶 于橄 榄 油 常温 保存 。试 剂： S i O ，购 于美 国 S i g m a 公 司 ， 纯
4、度 9 9 ， 粒 子 大小 范 围在 0 51 0 m 之 间 ， 8 0 的 粒 子 直 径 在 15 m 之 间 ， 批 号 ： 7 6 K 0 0 2 0 。用生 理盐 水 配成 5 0 g L混 悬 液 经 高压 蒸 汽灭 菌 后 ， 用 前 加 青 霉 素 2 0 0 0 0 U L ； 羟 脯 氨 酸 ( h y d r o x y p r o l i n e ，H Y P) 、丙 二 醛( m a l o n d i a l d e h y d e ， MD A ) 、 谷胱 甘 肽 ( g l u t a t h i o n e ， G S H) 测 试 盒 购 于 南 京
5、建成 生物 有限公 司 。 1 1 3 仪器： 电子天平( S a r t o r i u s ) ； 高速冷冻离心机 ( S i g m a ) ； 切片机 ( L a i c a ) ； 显 微镜 ( O l y m p u s ) ； 北京 普析 通用 紫外 分光光 度计 。 1 2实验方 法 1 2 1 动物分组及矽肺模型 的制备 ： 将 6 4只大 鼠 按雌 雄 随机 分 为 对 照 组 ( C o n t r o 1 ) 1 6只 、 染 矽 尘 组 ( S i l i c a ) 2 4只 、 S c h B干 预组 ( S c h B) 2 4只 。大 鼠乙醚 组 大 鼠气 管
6、 内一次性 注入 1 m L S i O 矽尘混 悬液 ( 以 肺 系数 、 肺 泡炎 、 胶 原性 结节 和纤维 化改变 为观察 指 标) ， 对照组用同样方法气管内注入等容灭菌生理盐 水 。次 13 晨 起 ， S c h B组 8 0 m g ( k g d )i g ， 对 照组 、 染矽尘组给予等容生理盐水 ， 连续 2 1 d 。 1 2 2 肺 组 织标 本 的 处理 ： 分 别 在 给 药 3 、 7 、 1 4和 2 1 d后 ， 随机取对 照组 大 鼠 4只 ， 染矽 尘组 、 S c h B干 预组 大 鼠各 6只 ， 称重 后 ， 经 腹腔 注射 0 4 戊 巴 比 妥
7、 1 0 m L k g麻醉后 ， 腹主动 脉流血休克致死 ， 取其 全肺组织 ， 吸干表面血液， 称重， 测定肺系数 肺系数 =肺质量 ( g ) 体质量 ( g ) 1 0 0 。取右肺中叶组 织 ， 1 0 中性 甲醛 固定 ， 常规 石蜡包埋 ， 切 片 ( 5 p m) ， H E染 色 ， 光 镜下观 察肺组 织形 态学变 化 。 1 2 3 H Y P 、 MD A及 G S H含 量 的测 定 ： 称 取 肺 脏 ， 加入 0 9 生理盐水制成 1 0 匀浆 ， 于 4 c I： ， 1 5 0 0 r m i n离心 1 0 m i n ， 取 上 清 检 测 H Y P 、
8、 M D A和 G S H含 量 。操 作步 骤均按 试剂盒 说 明书进行 。同时按考 马 斯亮蓝 G 2 5 0法测定匀浆液蛋 白质浓度。 1 3 统计 学方 法 采 用 S P S S 1 4 0 统 计分 析软 件进 行统 计 学分 析 ， 计量 资料均 数用 s 表示 ， 在不 同时 间点 3 组 间 的 比较用单因素方差分析的 L S D法， 以 P0 0 5为差 异 有显著 性 。 2结 果 2 1 S c h B对 染 矽 尘 大 鼠 不 同 时 间点 肺 系数 的影 响 染矽尘组大鼠各时间点肺系数均高于对照组 ， 各 时 间点差异 均有 统计学 意 义 ( P0 O 1 ) ；
9、 S c h B干 预组 大 鼠与对 照组 相 比， 仅第 3天 差异 有 统计 学 意 义( P0 0 5 ) 。与染 矽 尘组 相 比 ， S c h B干预 组 大 鼠 各 时 间点肺 系数均 低 于染 矽 尘 组 ， 且差 异 有 统计 学 麻醉 后 ， 采 用 非 暴 露 气 管 法 ， 染 矽 尘 组 、 S c h B治 疗 意义 ( P 0 0 5或 P 0 0 1 )( 表 1 ) 。 表 1 S c h B对染矽 尘大 鼠不 同时间点肺 系数 的影响 Ta b 1 Eff e c t o f S c h B o n l u n g b o d y we i g h t r
10、a t i o o f r a t s e x p o s e d t o s i l i c a a t d i ff e r e nt t i me p o i n t s 注 ： 与对照组相 比， P 0 0 5 ，”P0 0 1 ； 与染矽尘组相 比， P0 0 5 ， P0 0 1 。 No t e ： P 0 0 5 ， P O 0 1 V S C o n t r o l g r o u p；P O 0 5 P 0O1 V S S i l i c a g r o u p 3 2 中国比较医学杂志 2 O O 9年 5月第 l 9卷第 5 期C h i n J C o m pMe d
11、， M a y 2 0 0 9 ， V o 1 1 9 N o 5 2 2 各 组大 鼠肺 组织病理 变化的观 察结果 H E染 色结 果显 示 ， 对照 组大 鼠， 各 时 间点肺 组 织结构未见明显异常。第 3天 ， 染矽尘组大鼠病变 主要波及肺间质 ， 表现为多少不一的巨噬细胞、 淋巴 细胞浸 润和成纤维 细胞 增 生 ， 部分 形成 圆形或 不 规 则小结节 ； 干预组 ， 肺 泡结 构 未见 明显 改 变 ， 未 见 小 结节 ， 也有 巨噬细胞浸润 ， 杂有成纤维细胞。第 7 天 ， 染矽尘组大鼠肺间质有较多巨噬细胞浸润， 伴有 较多成纤维细胞增生 ， 局部有胶原纤维增生 ， 形成
12、结 节 ； 干预组 ， 间质 巨噬细 胞有 浸 润 、 成 纤 维细 胞增 生 较少 ， 间质受 累范 围少， 偶见 巨噬细胞 小结节。第 l 4 天 ， 染 矽尘 组 大 鼠肺 间 质成 纤维 细 胞 增 生严 重 ， 胶 原纤维大量 生成 ， 结节 形 成 ； 干预 组 ， 间质 巨噬细 胞浸润 ， 与成纤维细胞相 间存在 ， 少量胶原纤维生 成 。第 2 l 天 ， 染 矽尘组 大 鼠肺 间质 可见较多 的胶原 纤维占据肺泡腔 ， 肺组织广泛纤维化 ； 干预组 ， 巨噬 细胞较多， 杂有成纤维细胞 ， 仅见 较少 的胶原纤维 ( 图 1 见 彩插 X) 。 2 3 S c h B对 染矽
13、 尘大 鼠不 同 时 间点肺 组 织匀 浆 中 HY P含 量的影 响 染矽尘 组和 S c h B干预组 大 鼠各 时 间点肺组 织 匀浆中 H Y P含量均高于对照组， 差异有统计学意义 ( P0 0 1 ) 。与染矽尘组相 比， S c h B干预组各时间 点肺组织匀浆中 H Y P含量均低于染矽尘组， 在第 7 、 1 4和 2 1天 时差 异 有统 计 学 意 义 ( P0 0 5或 P 0 0 1 ) ( 表 2 ) 。 表 2 五味子乙素对染矽尘大鼠不 同时间点肺组织匀浆 H Y P 含量 的影响( g m g 湿重) T a b 2 E ff e c t o f S c h B
14、 o n H Y P c o n t e n t i n h o m o g e n a t e o f l u n g f r o m r a t s e x p o s e d t o s i l i c a a t d i ff e r e n t t i m e poi n t s ( g g m g w e t w e i g h t ) 注 ： 与对照组相 比， PO O 5 ； 与染矽尘组相 比， PO 0 5 ， P 0 0 1 。 N o t e ： P O 0 5 V S C o n t r o l g r o u p ；P 0 0 5 ，P O0 1 v s S i l
15、i c a g r o u p 2 4 S c h B对 染 矽 尘大 鼠不 同时 间点 肺 组 织匀 浆 中 MD A含量 的影响 染矽 尘组 大 鼠各 时间点 肺 组织 匀浆 中 M D A含 量均 高于对 照组 ， 且差 异有统计学 意义 ( PO 0 5或 P 0 0 1 ) ； 随着 时间的延长， 该组大 鼠肺组织匀浆 天时肺组织 匀浆 中 M D A含量亦 高于对照组 ， 差异有 统计学意义( P0 0 5或 PO 0 1 ) ； 随着时间的延 长， 该组大鼠肺组织匀浆含量呈下降趋势。与染矽 尘组大 鼠相 比 ， S c h B干 预 组 大 鼠各 时 间点 肺 组织 匀浆 中 M D A含量均 低 于染矽 尘 组 ， 在第 7 、 l 4和 2 l 含量 呈上 升趋 势 。S c h B干预组 大 鼠在 第 3 、 7和 1 4 天时 差异有统计 学意义 ( P 0 0 1 ) ( 表 3 ) 。 表 3 五味子乙素对染矽尘大 鼠不 同时间点肺组织匀浆 中 M D A含量
