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1、PriCells:PriCells: 收集大鼠骨髓用于生产收集大鼠骨髓用于生产 MSCsMSCs试剂和材料： 1. 完全培养基（CCM） ：-MEM：-低限量基础培养基，含谷氨酰胺，无 核苷酸或脱氧核苷酸；添加：20%附加 L-谷氨酰胺 2mmol/L、经 FBS 杂 交瘤纯化，非热灭活、青霉素 100U/ml、链霉素 100g/ml。过滤除菌。 储存于 4，不超过 2 周； 2. 纱布； 3. 含 100U/ml 青霉素， 100g/ml 链霉素和 0.2g/ml 两性霉素 B 的 PBSA； 4. 无镁和钙的 Hanks 平衡盐溶液（HBSS） ； 5. 塑料 Petri 培养皿，15cm
2、 直径； 6. 装有#10 和#15 刀片的解剖刀； 7. 1 和 2 英尺刀刃的手术剪； 8. 镊子； 9. 止血钳； 10. 15cm 刀刃的咬骨钳； 11. 带 Luer 接头的注射器，20ml； 12. 皮下注射针，23 号和 18 号； 13. 微量离心管，1.5ml 和 0.5ml； 14. 聚丙烯离心管，15ml 和 50ml； 15. 成年 Lewis 大鼠； 16. CO2啮齿动物安乐死小室； 17. Eppendorf 5417C 微量离心器或同等设备；实验方法： 1. CO2窒息处死动物，切勿使用药物； 2. 用酒精擦拭后肢，在不破坏股骨的情况下解剖后肢。将股骨从肢体中分
3、离 出来； 3. 切除股骨上的肌肉和肌腱。用无菌纱布擦拭除去骨上的剩余组织； 4. 用酒精擦拭已清理干净的骨，将其放入 50ml 塑料管中； 5. 用含抗真菌药物的冰浴 CCM 浸没骨，直到骨髓提取准备完毕。从分离骨 到骨髓提取的时间尽量缩短； 6. 装有股骨的离心管移至微生物安全橱中，将骨放入 15cm petri 培养皿中； 7. 按如下步骤提取骨髓； （1） 用咬骨钳剪掉骨的两端，暴露内部骨髓； （2） 装有 23G 针头的注射器中吸入 5ml 含抗真菌药物的 CCM，向 50ml 离心管中冲洗每根股骨； （3） 吸取冲洗后的 CCM， 反复冲洗股骨 3 次， 将其转移至 15ml 离心
4、管中； （4） 1000g 离心，用 1ml 含抗真菌药物的 CCM 重悬骨髓沉淀； （5） 在15ml离心管中将1ml骨髓细胞悬液加入到4ml含抗生素和抗真菌 药物的新鲜 PBSA 中。 每根股骨所得的 5ml 细胞悬液可混合于同一个离心管中； 8. 在 10 1000g 离心骨髓细胞 10min，用 10ml 含抗生素和抗真菌药物的 PBSA 洗涤细胞 3 次； 9. 最后，用 5ml CMM 重悬骨髓细胞，置于冰上备用；PriCells 提供： 1. 各种原代细胞特制基础培养基； 2. 各种原代细胞培养特制添加剂； 3. 原代细胞分离试剂盒； 4. 原代细胞鉴定试剂盒； 5. 原代细胞总蛋白质抽提物； 6. 原代细胞总 RNA； 7. 原代细胞总 DNA；
