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1、2012全国肿瘤分子标志学术大会与国际肿瘤转化医学论坛暨第七届中国中青年肿瘤专家论坛一种早期诊断癌症新方法的应用基础研究徐汉友主治医师,河南省南阳纺织集团有限公司职工医院内科。联系地址:河南省南阳市长江路20 0号,南阳纺织集团职工医院内科。电话:155 18962531.邮编:473 12 5.电子邮件em ail:abC13579一yo u126.C om;丫z74.iqaol.C o m摘要1 目的:总结一种早期诊断癌症新方法的方案,以利于进一步研究和临床应用及预防。方法:根据 当今肿瘤研究成果,设计一种新的癌症早期诊断方法的方案。结果:分别用两种不同的抗一种正常抑癌基因所产生的蛋白质抗
2、体,如:R b蛋白质和p5 3蛋 白质,通过亲和层析,分别和放射性同位素元素标记的病变标本的 R b蛋白质和p5 3蛋白质发生抗原抗体反应,分别测定4次抗原抗体反应的R b蛋白质和p5 3蛋白质的放射性强度,而不发生抗原抗体反应的R b蛋白质和p5 3蛋 白质则不能被测定,从而判断 R b蛋白质及其基因和p5 3蛋白质及其基因的结构及功能异常,由此来早期诊断癌症。结论:目前,肿瘤学研究的成果认为,R b和p5 3蛋白质及其基因发生异常改变是引起癌症的起始原因,因此,本文作者设想通过放射性同位素、免疫学等方法来测定病人病变组织R b和p5 3蛋白质发生异常的改变,从而确诊病人此处病变己经发生极早
3、期癌变或早期癌变,达到早期手术治愈治疗和预防的目的。这种临床应用方法理论上来说非常有意义,值得进一步研究及应用于临床和推广及预防。但在临床应用之前,需要通过大量精确的实验室研究,从而确定各实验阶段的剂量标准,同时,应同数字化电脑化等高科技相结合,制成一个高精密的仪器,来实行此种科学快速早期癌症的诊断。R b基因和p5 3基因及其所表达的蛋白质是否发生异常改变检测后,就可以根据检测结果来指导临床进行早期治愈治疗或作观察及预防治疗,其判断方法如下:若 R b基因和p5 3 基因及其所表达的蛋 白质全部发生异常改变,就可以进行早期手术治愈治疗。若仅R b基因或p5 3基因及其所表达的蛋白质发生异常改
4、变,就可 以作临床重点观察及重点预防治疗,同时定期复查。若R b基因和p5 3基因及其所表达的蛋白质全部未发生异常改变,只作临床观察及一般预防治疗。本研究方法适用于对食管癌、胃癌、乳腺癌、小细胞肺癌、直肠癌、结肠癌、骨肉瘤等癌症的早期诊断的研究及临床应用及预防。依照上述实验方案,其它抑癌基因及其所产生的蛋 白质,当必要时,也可以测定。另外,本方案的研究方法也值得重视和进一步研究,她用抗原抗体免疫反应的方法,来探测蛋 白质的结构和功能是否发生异常改变,从而探测相应基因的结构和功能是否发生异常改变,她是一种新的、简单的和特殊的分子 生物学研究方法。ANo v elMole eularMethodf
5、orEarliestD iagno singCan e ersRunningtitle:Earlie stD iagn osingCaneersXuH an一You,MS.Doeto rineha rgeofw e ster ninter nalm ed iein eDe a nofDepartm entofinter n alandemergeneymed iein e,Wo rker sho sPitalofNa nyangte xti lee o rporation,Nanya ngeit yCha ngjiangRD No.200,He n a npro vin e e,Ch ina.
6、Po stCodes:473125.TelePho n e:008 6一037 7一66 725729.山西医科大学第二 医院2012全国肿瘤分子标志学术大会与国际肿瘤转化医学论坛暨第七届中国中青年肿瘤专家论坛Email:abel3 579一you126.e o mThea utho rofa rtieleinv e ntedam ole e ula rm ethodfo rdiagn o singe a n e er sine arlie ststageofea r ein oge n e sistotr eatthee a n e e rw ell.Refer en eedthes eie
7、 ntifieaehie vem e ntsofe a neerr e s e a r ehuPtono w,theauthordesignedthen ovelinve ntio n.Upton o w,them o rtalit ya ndm o rb idit yofm ajo rit ye a n e e r sha v en otbe e ne o ntrolled.So mekindsofe a n e e r sm o rtalityandmorb iditye v ena r egoingup.Asthee ane e reontr olha snotr e a ehedsat
8、isf iedaehiev em e nts.Theearlydiagno singe a n e e rha sbe e nbeingm u ehto oimportanta ndimpe rative.Ifon ee a rlie std iagn o singmethode o ulddiagno s etheean eersinsituorbeforethestageofe a n eersinsitu.Thee a n e e r str e atmentmightalmostbee u r ed.Thea utho rofthispape rha sbe e nstudyinga
9、ndle a r ningtheo neolog夕fr olnhisgr adu atestudytim eandhiswo rkingtimewhenhee r eatedan e win v e ntionfo rd 1agnosinge a n e e r sinsituo rbeforethestageofe a n e e r sinsitu.Usingtwod if fe rentnor m alRbProteina ntibod ie sa ndtwodi ffere ntn o r m alp53antibodie s,developsa ntige nsa ndantibod
10、iesin u nuner e a etio n sr esPe etiv ely,withsPeeim e nof RbPr otein sandp53 bysPeeialanalysism ethod.Aftere omParingthetw or e aetion sof RbPr otein sa ndthetwore aetio n sofp535byap plie atio nof Affinit yChr o m atographyandFlowSeintillationCo u nte r,thestr uetur e sa ndfu n etio nsofRbge n e s
11、a ndProteins,P53ge n e sa ndProtein se a nbejudged.50thee a n e e r se a nbediagno s ede a rliest.Thisin v e ntio nfo rdiagn()singea neer sine a rl ie ststageofearein oge n e sise ould beu s edfo rmanykindsofe a n e erstobediagn os edinthesa mem ethod.Then e wres e a r ehm ethodofm ole e ularbiolog
12、yus edbya utho rinthisPaPe r15w o rthtobede veloPedfu rthe r.It15firstr ePo rtedbythea utho rinthisartiele.Whieh15ide ntifiedthr o ughaMEDLINEs e a rehoftheEnglish-la ngu agelite r atureo nthetitleoronthekeyw o rds.(通讯作者,课题第一负责人)的姓名:徐汉友。职称:主治 医师。主要研究方向:普内;全科医学;管理科学。Email:abel35 79一yo u126.e o m:yz74
13、jqaol.e o m.靶 向GPC一 基因转录对肝癌H即G 2细胞增殖与凋亡 的影响严美娟,蔚丹丹,姚敏,严晓娣,陈洁,姚登福(22600 1江苏南通,南通大学附属医院临床医学研究中心) 摘要目的:构建人磷脂酞肌醇蛋 白多糖一3(GPC一3 )基因序列特异性短发夹型RN A(sho rtha irpi nRNAShR NA)真核表达载体,筛选有效序列,探究沉默GPC一3表达对肝癌HepG Z细胞的影响。方法:根据GPc一3序列设计4条GPc一3一s hR NA,合成短发夹R NA寡核昔酸(。1190)序列,插入pGPU6/GFP/Ne o质粒,连接、转化,筛选并测序,转染肝癌HepGZ细胞,
14、应用we ste r nBlotting法分析GPC一3表达,应用RT一PCR检测GPC一3mRNA表达,MT T法分析沉默GPC一 对肝癌HepGZ细胞增殖的影响,并索拉非尼(S o r afe nib )共作用于细胞时对细胞增殖影响,流式细胞仪检测细胞周期,An nex in一V-PE/7一AAD及细胞凋亡一D NA ladde r检测细胞凋亡。结果:构建的GPc一3序列特异性ShR NA真核表达质粒载体经酶切及测序鉴定正确,将其转染肝癌H epG Z细胞,倒置荧光显微镜下显示转染效率为70 %以上,经we ste r nBlo tin g法分析,显示转染G PC一3一shR NA I的蛋白表达水平较空白及阴性对照组明显下调,经荧光定量RT一PCR扩增分析,GPC一3一ShRNA I的沉默效率为89.3 1%,GPC一3一ShRNAZ的沉默效率为77.62%,GPC一3一ShRNA3的沉默效率为4 5.69%,GPC-3一ShRNA4的沉默效率为巧.2 3%,与We 、ter nBlo ttin g结果一致,GPC一3一shRNA I为有效干扰序列。将有效序列转染细胞4 8h后于不同时间点用MT T法对细胞增殖进行检测,显 示72 h时细胞增殖下调最为1 08山西医科大学第二 医院
