法医物证检验2005

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1、 题 目 法 医 物 证 检 验主讲人 黄 艳 梅 职 称 讲 师 野外发现一名无名尸体1 1. . 死者是谁？死者是谁？怎么会在这里？怎么会在这里？ 2 2. . 受害人死亡性质：自杀、他杀、意外？受害人死亡性质：自杀、他杀、意外？ 3 3. . 什么原因致死？是否暴力？致伤工具？什么原因致死？是否暴力？致伤工具？ 4 4. . 死了多长时间？死了多长时间？ 案件发生在什么时间？案件发生在什么时间？是否第一是否第一 现场？现场？ 5 5. . 凶手有什么特征？与死者的关系？如何判定？凶手有什么特征？与死者的关系？如何判定？ 6 6. . 案件的重建。案件的重建。刑事案工作思路：法 医 物 证

2、 检 验 （Test of forensic biology evidence） 内容： 第一节 概述 第二节 人类遗传标记 第三节 亲权鉴定 第四节 生物性检材的一般检验与个人识别教学要求：1.掌握：法医物证（检验）的概念、任务及意义 ；亲权鉴定的概念、鉴定原理和鉴定要点；血 痕的检验程序和个人识别。2.熟悉：生物性检材的发现、提取、包装和送检 的基本原则；精斑、唾液斑等生物性检材的检 验程序和个人识别。ABO血型和STR基因座遗传 标记及其检测方法；亲子鉴定的类型、标准。 第一节 概述 一、物证的概念、分类 1.物证：凡对案件的真实情况具有证明作用的物品和痕迹。 2.分类： （1）生物性检

3、材：人体或动物的组织器官、各种体液、分泌液、 排泄物及其斑痕等。 （2）人体指纹、掌纹、唇纹、足印、鞋印以及轮胎印痕等。 （3）作案工具和致伤物。 （4）各种染料、油墨、纸张、油漆、墨水以及化学物质。 （5）文书 如案卷、病例、医师证明、遗书及信件。二、法医物证的概念、种类1. 法医物证：指凡是能证明案件真实情况，并且可为侦 察提供线索、为审判提供证据、揭露案件性质的生物 物品。法医物证检验：凡对与案件有关的生物性检材进行专 门检验，判断它在该案件能否作为证据的过程。包括 案件的委托、受理与检验。 2. 种类：血液（斑）、唾液（斑）、精液（斑）、毛发 、骨骼、阴道分泌物（斑）、尿液（斑）、汗斑

4、、粪 便、羊水、恶露、乳汁（斑）、鼻涕（斑）、痰液（ 斑）、人体组织、呕吐物。Sources of Biological Evidence Blood(stain) Semen(stain) Saliva Urine Hair Teeth Bone Tissue三、法医学物证检验的任务、意义任务：主要是个体识别及亲权鉴定意义： 1. 为刑事案件的侦破提供线索。2. 为民事案件的审判调解提供科学依据。四、法医物证的寻找、提取、包装 及送检的原则 1. 寻找：血痕、精斑、毛发、唾液、其他组织； 2. 提取：足量、空白对照、结合案情； 3. 包装：晾干、标记、分门别类； 4. 送检：及时（低温保存）

5、、委托书； 检验程序： 委托书、制定检验方案、提交鉴定报告。 种类鉴定-种属鉴定-遗传标记检测及分析-其他检查第二节 人类遗传标记 (human genetic marker) 遗传标记（genetic marker）：个体的单位遗 传性状作为标志用以法医物证分析时，这种遗 传性状称为遗传标记。 由遗传决定，并能够以一定的规律从亲代传给 下一代的形态学、生理学及分子生物学特征。 如：(1). ABO血型是一种遗传性状，将人类简单 地分为A、B、AB、O等4种类型。(2).TH01基因座是一种DNA片段长度遗传性 状，可将人类分为28种基因型。一、几个基本概念：2. 遗传多态性（genetic

6、polymorphism） ：在 随机交配无血缘关系的群体中，个体的一种遗传 性状存在两种以上具有相对差异类型的现象。 DNA多态性（DNA polymorphism） ：碱基在 生物进化过程中，由于碱基突变、缺失、插入或 置换，导致DNA分子在人群间存在差异。3. 基因(gene)：染色体上一段特定的DNA片段。 基因座/位点(locus)：基因在染色体上的特定位 置。 等位基因(allele): 一个基因座上的基因存有 DNA一级结构差异并导致产生具有相对差异的 遗传性状，这种有差异的基因互称等位基因。 基因型(genetype)：基因座上成对等位基因的组成 。 表型（phenotype）

7、：通过一定手段观察到的个 体性状。 ABO血型基因座定位在9q34。由3个等位基因 A、B、O组成，基因型组成6种：AA 、AB、 BB、AO、BO和OO，表型则有A、B、AB和O 共4种。 TH01基因座定位于11号染色体。有5、6、7 、8、9、10等6个等位基因。基因型应为上述 等位基因任意2个的组合。二、遗传标记的分类1. 产物水平：红细胞血型（ABO）、白细胞血 型（HLA）、红细胞酶型、血清型等。 ABO血型分类O型血人的红细胞含有大量的H抗原，但H抗原并不是 O基因而是H基因的表达产物， 因为O基因为无效基因。 1. 抗原（ABH）为糖酯，稳定性好，对外界物理、化学因 素抵抗力强

8、。 2. 存在分泌型和非分泌型。 3. 天然抗体有规律地存在不同血型个体血清中。 4. 除血液外，其他组织细胞（如毛发等）和分泌液（唾液 、精液等）只含有ABO血型抗原，别的血型抗原尚未发 现，或含量甚微。 5.试剂已标准化，易得，技术容易掌握。 不足：只能给予否定的结论，而不能给予肯定的结论。ABO血型法医学应用意义2. DNA分子水平遗传标记（1）按来源分：染色体DNA（核DNA）、线粒体DNA（ mtDNA）。 （2）按发展历程分：三代DNA遗传标记第一代：限制性片段长度多态性 (restriction fragment length polymorphism, RFLP)。第二代: 扩

9、增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism Amp-FLP)可变数目串联重复序列（variant number tandem repeat, VNTR) :小卫星（minisatellite)和微卫星/短串联重复序列， short tandem repeats, STRs）， 第三代: 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)；DNA指纹(DNA fingerprint)： 某个体基因DNA序列的个人标 志性特征，如同人的指纹。限制性片段长度多 态性(RFLP)小卫星和微卫星DNA的区别：微卫星D

10、NA小卫星DNA存在部位染色体任何部位染色体近端粒和着丝粒区重复单位长度26 bp10100 bp重复次数1060次几次到几百次总序列长度约200bp0.530 kb长度和序列多 态性以长度多态性为主相对来说序列多态性 较明显存在数量很多，整个人基因 组510万有限，有些染色体尚 未见到 长度多态性：核心序列串联重复的数目不同； 序列多态性：串联重复的数目相同，但核心序列的 组成不同。三、选择遗传标记的原则1. 表现为简单的遗传性状，遗传方式明确。常染色体DNA遵循孟德尔遗传定律，Y-DNA（父 系遗传），mtDNA（母系遗传）。 2. 选择多态性高的遗传标记，并已积累了大量的群 体遗传调查资

11、料。 3.不易受疾病、环境因素、年龄及基因的相互作用效 应等影响。 4.在人群中的突变率低。 5.检测方法稳定可靠、快速、简便。常用STR遗传标记。 人类基因组中广泛存在，数目众多，是个体识别的丰人类基因组中广泛存在，数目众多，是个体识别的丰 富资源富资源； 片段长度短(约200 bp)，易于扩增，适用于陈旧、降 解生物检材的DNA分析； 灵敏度高，所需检材量少，适用于微量、超微量检材 的鉴定； 等位基因间片段长度差异小(2-6bp)，优先扩增现象 不明显； STRSTR基因座扩增片段相近，扩增条件类似，能够进行基因座扩增片段相近，扩增条件类似，能够进行 多个位点的复合扩增，一次检验能获得较多

12、的多态性多个位点的复合扩增，一次检验能获得较多的多态性 信息，信息，节省检材和试剂，提高工作效率；更加满足法更加满足法 医物证检验的要求。医物证检验的要求。 分型程序简便、明确、规范，有利于实现分型标准化 、自动化和DNA数据库的建立。STR适用于法医学检验的特点和优点CSF1POD5S818D21S11TH01TPOXD13S317D7S820D16S539D18S51D8S1179D3S1358FGAVWAAMELAMELSex-typingPosition of Forensic STR Markers on Human ChromosomesPenta EPenta DD2S1338D

13、19S433美国联合DNA检索系统 （ CODIS）的13个 STRs四、检测方法和步骤 （以STR-PCR为例）DNA提取 STR-PCR PCR产物检测：电泳 数据分析酚/氯仿法：稳定，纯度高，精斑、骨 骼，双链DNA；繁复，试剂毒性；Chelex-100法：简单快速，检材用量少 ，一管到底，单链DNA；纯度不高， 保存时间短；碱裂解法：简捷快速，灵敏，高效，经 济。注意：理解各种方法原理，根据检材 情况灵活运用各种提取方法。1.DNA提取方法2.聚合酶链式反应扩增DNA Polymerase Chain Reaction (PCR) 反应体系： 模板DNA 引物对 缓冲液 Mg2 DNA

14、聚合酶 dNTPIn 32 cycles at 100% efficiency, 1.07 billion copies of targeted DNA region are created多STR基因座复合扩增复合扩增（multiplex amplification）： 把二个或二个以上的基因座放在同一个反应管 中同时扩增，叫复合扩增。 优点：高效，经济，快速 复合体系基因座数目的确定： 银染系统：各基因座等位基因片段范围不重叠 多色荧光检测系统：不同颜色荧光染料标记可 以有重叠。3.电泳+-DNA-DNA-DNA-DNA-DNA-原理：琼脂糖电泳：EB染色紫外分析法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳：

15、硝酸银染色标准DNA分子量/ 等位基因阶梯分析、 荧光标记ABI377电泳GeneScan 软件分析。 毛细管电泳：荧光标记ABI310/3100/3130/ 3130x - GeneMapper ID软件分析。银染系统复合扩增体系美国应用生物系统公司3130 和 3130xl 基因分析仪ABI 377 测序仪2002 Academic Press 3100/3130毛细管电泳图谱D8S1179D21S11D7S820CSF1POD3S1358TH01 D13S317D16S539D2S1338D19S433D18S51TPOX VWAAMELD5S818FGAGS500 LIZ size s

16、tandard6FAM (blue)VIC (green)NED (yellow)PET (red)LIZ (orange)AmpFlSTR IdentifilerAmpFlSTR Identifiler Allelic ladderGeneMapper ID software 3.0 version 软件分型结果第三节 亲权鉴定（identification in disputed paternity） 一、概述1.概念：狭义的是指利用医学、遗传学、免疫 学、生物化学和分子生物学等技术对有争议的 父母与孩子之间是否存在亲生关系（生物学关 系）进行鉴定的专门技术，又称亲子鉴定。广 义的还包括对被检验者之间是否存在血缘关系 （祖、孙、叔、侄、兄弟姐妹）。（1）在民事纠纷中可以有效的解决：