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1、DC-CIK细胞的制备及在肿瘤 治疗中的应用 恶性肿瘤的治疗现状恶性肿瘤治愈45难于治愈55未缓解缓解后复发恶性肿瘤的多学科综合治疗恶性肿瘤各种治疗手段各具优势与不足n肿瘤外科学n肿瘤放射治疗学n肿瘤化学治疗学n肿瘤生物学治疗n侧重点不同n局部与全身n早、中、晚期肿瘤免疫学治疗的优点n可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞，达到治疗肿瘤、预防复发与转移和最终根治肿瘤的目的。n具有特异性强、适用性广、副作用轻等优点。肿瘤免疫学治疗n非特异免疫刺激剂及细胞因子治疗： IL2、IL6、 IL12、GM-CSF、TNFa、IFNa、IFNr等体内应用，装 载有细胞因子基因的细胞治疗。n治疗
2、性疫苗：肿瘤抗原或多肽抗原疫苗、装载肿瘤 抗原基因的病毒疫苗、基因修饰的肿瘤细胞疫苗、 APC细胞疫苗、抗独特性疫苗。nMab导向治疗： Mab、Mab-毒素、Mab-同位素、鼠- 人单抗、人源单抗、双特异性抗体。n过继性免疫细胞治疗：供者淋巴细胞输注、LAK、 TIL、CIK、多种方法诱导的CTL、DC-CIK等。过继免疫疗法n通过把在体外扩增的大量特异性效应细胞回输给患者后，产生直接杀伤肿瘤细胞的作用。DC-CIK培养及其应用nCIK细胞：Cytokine Induced Killer CellnDC：Dendritic CellCIK细胞特性n分布：肝脏和外周血n来源：CD3+CD56+
3、T细胞和CD4-CD8+T细胞n n一群以一群以CD3+CD56+TCD3+CD56+T为主的异质细胞包括为主的异质细胞包括/ /T T细胞细胞 , ,/ /T T细胞细胞n n与与LAKLAK、CD3AKCD3AK细胞相比高效、广谱杀伤、非细胞相比高效、广谱杀伤、非MHCMHC限限 制制DC与T细胞nDC高表达MHC-类、类分子，MHC分子 与其捕获加工的肿瘤抗原结合，形成肽- MHC分子复合物，递呈给T细胞，从而启动 MHC-I类限制性CTL反应和MHC-类限制性 的CD4+ Thl反应 ；nDC还通过其高表达的共刺激分子(B7-1、 B7-2等)提供T细胞活化所必须的第二信号 ，启动了免
4、疫应答。DC负载肿瘤抗原肿瘤杀伤作用DCDC在在DC-CIKDC-CIK杀伤肿瘤细胞中的作用杀伤肿瘤细胞中的作用n诱导抗原特异性CTL反应n增加CIK细胞的扩增倍数n增强CIK肿瘤杀伤效力MHC：抗原提呈自分泌细胞因子：INF,IL-12等抑制CD4+CD25+调节T细胞生长CIK细胞的制备PBMNC (CS3000 Plus)In a 3000ml Baxter bagSerum free culture medium IFN 第一天 Il-2 第二天 CD3 mAb 第二天 IL 1 第二天14 days lCS-3000采集PBMNClFicoll分离PBMC,洗2次l1-2106/ml
5、接种至含无血清培养基 的培养袋中，1000ml/袋，加入IFN- 1000U/ml，放置37，5%的CO2孵箱 中培养24hl加入IL-1 100U/L，CD3单抗 50ng/ml，重组人IL-2 300U/L，继续 培养，每3天半量换液，并补加IL-2 300U/ml。 l 分别于第5，7，9天取细胞做细胞表 型分析（FCM检测），细胞杀伤实验（ MTT法）l收集细胞，含0.5%白蛋白的生理盐水 洗涤l回输CD3主要促CIK细胞增殖，促IL-2自分泌，也提高CIK杀伤活性IFN-r/IL-1，上调细胞表面IL-2R表达，IFN-r先于IL-2加入，有效激活效应细胞，增强抗肿瘤 活性DC的培养
6、BMDCBMDCSerum free culture mediumSerum free culture medium IL-4, GM-CSFIL-4, GM-CSF TNFTNF成熟成熟DCDC79 days79 daysIL-4 , GM-CSFIL-4 , GM-CSF TNFTNFPBDCPBDC Tumor antigenDC-CIK共培养成熟成熟DCDC CIKCIK细胞细胞+CIK细胞的增殖62.%84.7%89.5%28.2%43.1%52.3%CIKCIK细胞对自体原代白血病细胞的细胞对自体原代白血病细胞的 杀伤作用杀伤作用lCIK细胞对自体原代白血病细胞 有明显杀伤作用，且
7、其细胞毒作用 随着效靶比的增加而进一步增强， 在效靶比为20：1时，其中位杀伤 率分别为51.33%,52.95%肿瘤细胞冻融物肿瘤细胞坏死物正常生长的肿瘤细胞无肿瘤细胞无DCDC-CIK对肿瘤杀伤作用DC-CIK对肝癌细胞的杀伤活性*DC与CIK共培养后，CIK增殖能力和杀伤活性明显增强DC/CIK治疗结肠癌血源性肺转移的实验研究DC-CIKDC-CIK治疗乳腺癌治疗乳腺癌CIK/DC-CIK治疗恶性血液病合并丙肝HCV-RNAHCV-RNA转阴例数转阴例数 14/18 14/18治疗治疗2 2疗程以上疗程以上HCV-RNAHCV-RNA持续阴性持续阴性 6/9 6/9ALT/AST/TBI
8、LALT/AST/TBIL明显下降或正常例数明显下降或正常例数 10/10 10/10CIK治疗1例白血病合并丙肝后肝功的变化新技术nRetroNectin activated killer cell（RAK）nDC相关的技术RetroNectin activated killer cell（RAK）n重组人纤维蛋白片段(RetfoNectin)可参与细胞的附 着、伸展、分化和增殖。该产品已注册美国药典和 国际专利。n当包被在培养皿和培养瓶中时，RetroNectin能显 著提高逆转录病毒转染入哺乳动物细胞内的效率。nRetroNectin还可参与细胞的附着、伸展、分化和 增殖，可增加体外CI
9、K细胞扩增倍数，及肿瘤杀伤 活性。RetroNectin activated killer cell（RAK）zoledronate acid/唑来膦酸 n转染AFP质粒的腺病毒感染DCnDC-CIK共培养n杀伤活性检测健康供着DC和CIK肝癌患者DC和CIKCIK/DC-CIK治疗后的不良反应n n寒战寒战n n发热发热n n疲乏疲乏n n无力无力n n关节肌肉酸痛关节肌肉酸痛 一般一般2424小时内消失小时内消失小 结n体外实验证实DC-CIK肿瘤杀伤活性强，并具有肿瘤特异性；n被认为是新一代免疫治疗的首选方案，已经进入I、II期临床实验；n临床实验时间短，病例数尚不多；n治疗方案和标准尚待进一步规范和统一。
