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1、 专题十四专题十四 生物技术实践生物技术实践非选择题(本题共 8 小题，每小题 15 分，共 120 分) 1(2016 辽宁辽南协作体二模，39)为了调查某城市自来水的水质状况，某研究小组测定 了自来水水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题： (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。涂布平板所用的培养基是 _(填“固体”或“液体”)培养基；该培养基的制备过程是 _。对培养基灭菌的方法是_法。在涂布接种前， 随机取若干灭菌后的空白培养基培养了一段时间，若空白培养基出现了菌落，请分析说明 原因(写出二个)_； _。 (2)培养基灭菌后，将 1 mL 水样稀释 1 00
2、0 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL 稀 释液；经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为 51、50 和 49。据此可得出每升水样中的 活菌数为_。 (3)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，每次划线之前都要灼烧接种环，目 的是_的菌种，使下次划线的菌种直接来源于_ 。 【答案】(1)固体 计算称量溶化灭菌倒平板 高压蒸汽灭菌 培养基灭菌不合格 倒平板过程被污染(或培养皿灭菌不合格等正确答案均给分) (2)5.0108 (3)杀死上次 划线后接种环上残留(或杀死接种环上) 上一次划线末端 【解析】(1)涂布平板所用的培养基是固体培养基。固体培养基的制作过程是：计算称
3、量 溶化灭菌倒平板。常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在涂布接种前，随机 取若干灭菌后的空白培养基进行培养，若一段时间后出现了菌落，则可能的原因有：培养 基灭菌不合格、倒平板过程被污染或培养皿灭菌不合格等。 (2)由题意可知：平板上生长 的平均菌落数(515049)350 个，则 1mL 水样中的菌落数(CV)M(500.1) 10005.0105个，每升水样中的活菌数为 5.01051035.0108个。(3)采用平板 划线法分离水样中的细菌，在操作时，每次划线之前都要灼烧接种环的目的是：杀死上次 划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上一次划线末端。 2(2016 四川成
4、都七中 3 月模拟，18)为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、 筛选、鉴定工作。 (1)为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分 是_。制备的培养基常用_法进行灭菌。K2HPO4MgSO4NaNO3FeSO4琼脂0.1 g0.5 g3 g0.01 g2 g15 g加至 1 L(2)科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，振荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的 单菌落，还需要将悬液进行_，用_法接种于固体培养基上。接种后的培 养基_状态放入培养箱。 (3)选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液(果胶与刚果红结合后显红 色)，一段时间后洗去
5、培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和_直径的比值， 筛选果胶酶高产菌株。 (4)将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的_(填“上清液”或“沉淀物”) 获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值 来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将_与等量果胶溶液混合，作为实验的对照。 【答案】(1)果胶和蒸馏水 高压蒸汽灭菌 (2)梯度稀释(或系列稀释) (稀释)涂布平板 倒置 (3)水解圈(或透明) (4)上清液 等量失活的粗提果胶酶 【解析】(1)依题意可知：该实验的目的是分离果胶酶产生菌，因此培养基中需要加入果胶， 在配制过程中需用蒸馏水定容，所以该表空白处的两种
6、成分是果胶和蒸馏水。制备的培养 基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(2)为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度 稀释，并用稀释涂布平板法接种于固体培养基上。接种后的培养基倒置状态放入培养箱， 以防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染。(3)已知果胶与刚果红结合后显红色。 果胶酶产生菌分泌的果胶酶能够将培养基中的果胶水解，当单菌落数目适宜的培养基中加 入一定浓度的刚果红溶液一段时间后，洗去培养基表面的刚果红溶液，因菌落周围的果胶 被分解，无法形成红色的复合物而出现水解透明圈，所以观察并比较菌落和水解(或透明圈)直 径的比值，可筛选出果胶酶高产菌株。(4)将获得的菌株进行液体培养后，从培养
7、液的上清 液获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光 值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合， 作为实验的对照。 3(2016 贵州高校招生适应考试，39)尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸 收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，对土壤中分解尿素 的微生物进行分离和鉴定具有重要意义。 回答下列问题： (1)对土壤中分解尿素的微生物的分离过程如下： 第一步：土壤取样。取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要_(填 “消毒”或“灭菌”)。 第二步：样品稀释。通常分离不同种类的微生物要采用
8、不同的稀释度，原因是 _。 第三步：微生物的培养与观察。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上， 并在适宜的条件下培养。分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而 _则不能生长繁殖。(注：实验中所用的培养基经检测符合要求， 且均在无菌条件下操作) (2)若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用稀释倍数 为 104的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌 落数_。 (3)对土壤中分解尿素的微生物作进一步的鉴定成分KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O酚红指 示剂尿素蒸馏水培养基 (含量)1.4 g2.1 g0.2 g0
9、.01 g1.0 g1000mL若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在上表培养基配方中添加 的物质是_、_。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中 pH 升高使酚 红指示剂变为红色，pH 升高的原因是_。 (4)分解尿素的微生物在生态系统中的作用是_。 【答案】(1)灭菌 土壤中各种生物的数量不同 不能利用尿素的微生物 (2)偏高(3)葡萄糖 琼脂 尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨(合理叙述即可) (4)将有机物 分解为无机物(将尿素分解为氨) 【解析】(1)为了防止外来杂菌的污染，应对取样前的工具和信封都进行灭菌。在稀释样品 时，分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原
10、因是土壤中各种生物的数量不同，所 以稀释倍数不同，因为是以尿素为唯一氮源，所以在该培养基上不能利用尿素的微生物是 不能生长的。(2)如果没有振荡取上层的菌液进行计数，因为下层是土壤，此时的细菌主要 在上层菌液中，所以应比正常的操作菌落数偏高。(3)该培养基中还没有碳源，所以应加入 葡萄糖，要做鉴别应在固体培养基上培养，所以还应加入琼脂。因为加入的有酚红指示剂， 尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨，pH 升高，酚红指示剂变红。(4)分解尿素的微生 物在生态系统中是分解者，其作用是将有机物分解为无机物。 4(2016 山西高三考前质检，39)下图为苹果醋的制作流程：鲜苹果汁苹果酒苹果原醋加工苹果醋
11、(1)过程常用的发酵菌是_，在苹果酒的基础上制作苹果醋时，需要 _(填“升高”或“降低”)温度，同时还需要适当_。 (2)该发酵菌种可以从食醋中分离获得。若用平板划线法分离该发酵菌，接种结束后，对接 种环还要进行一次 _灭菌，是为了 _。 (3)对该发酵菌进行扩大培养时，将其接种到液体培养基中并混匀，然后分为甲、乙两组。 甲组进行静置培养，乙组进行振荡培养，结果发现_组培养的发酵菌生长速度快， 原因是_、_。 【答案】(1)醋酸(杆)菌 升高 通入无菌空气 (2)灼烧 杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者 (3)乙 醋酸(杆)菌为需氧型细菌，振荡可提高培养液的溶解氧含量 振荡可以使
12、菌体与培 养液成分充分接触，提高营养物质的利用率 【解析】(1)过程要获得苹果原醋，则发酵菌为醋酸菌，在制作苹果醋时，需要升高温度， 同时还需要适当通入无菌空气。(2)若用平板划线法分离该发酵菌，对接种环还要进行一次 灼烧灭菌，为了杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。(3)甲组进行静置 培养，乙组进行振荡培养，结果为乙组培养的发酵菌生长速度快，原因是醋酸菌为需氧型 细菌，振荡可提高培养液的溶解氧含量和对营养物质的利用率。 5(2016 宁夏银川一中一模，39)农村中泡菜的制作方法是：新鲜的蔬菜经过整理、清洁 后，放入彻底清洗并用白酒擦拭过的泡菜坛中，然后向坛中加入盐水、香辛料及一
13、些“陈 泡菜水” 。密封后置于阴凉处，适宜环境温度为 2830 。有时制作的泡菜会“咸而不酸” 或“酸而不咸” ，据此分析，回答下列问题： (1)用白酒擦拭泡菜坛的目的是_。 (2)若制作的泡菜“咸而不酸” ，最可能的原因是_。 (3)制作过程中，需要加入盐水，其中清水与盐的比例应为_，加入“陈泡菜 水”的作用是_。 (4)若要获得优良乳酸菌菌种，应选用培养基培养。培养基中应含有_、_、水和 无机盐，同时需要在培养基中添加_。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接 种方法有_。培养时还需提供_条件。 【答案】(1)消毒 (2)盐过多抑制了乳酸菌发酵 (3)4：1 提供乳酸菌菌种(4)碳源 氮源
14、 维生素 平板划线法或稀释涂布平板法 无氧 【解析】(1)泡菜的制作过程中，用白酒擦拭泡菜坛的目的是消毒。(2)泡菜的制作原理是 利用乳酸菌的无氧呼吸产生乳酸，若制作的泡菜“咸而不酸” ，最可能的原因是加入的盐过 多，抑制了乳酸菌发酵，产生的乳酸过少。(3)制作过程中，需要加入盐水，其中清水与盐 的比例应为 4：1，加入“陈泡菜水”的作用是提供乳酸菌菌种。(4)乳酸菌的代谢类型是 异养厌氧型，用选择培养基获得优良乳酸菌菌种时，培养基中应含有碳源、氮源、水和无 机盐，同时需要在培养基中添加维生素。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用平板划线 法或稀释涂布平板法接种，培养时还需提供无氧条件。 6(2016 山东枣庄 3 月模拟，39)我国粮产区产生大量的作物秸秆，科技工作者研究出利 用秸秆生产燃料酒精的技术，大致流程为(以玉米秸秆为例)：玉米秸秆预处理、水解糖液发酵酒精(1)玉米秸秆预处理后，应该选用特定的酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。从以 下哪些微生物中可以提取到上述的酶？(
