自身抗体荧光片模板片阅读

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1、 刘道文刘道文 应用支持（华东区）应用支持（华东区） 18657150903 自身抗体荧光片模板片判读自身抗体荧光片模板片判读 ANA 检测基质 Hep-2 细胞 猴肝 Hep-2 细胞 Hep-2 细胞 细胞周期 肝脏组织结构 肝脏组织结构 读片要点 HEp-2细胞: 选取多个视野判断 HEp-2细胞:分裂间期与分裂期细胞综合看 HEp-2与肝片综合看 Hep-2 细胞 肝片 ANA 核均质型：DNA、组蛋白和核小体等 核膜型：板层素、gp210等 核颗粒型 核仁型：Scl-70、RNA多聚酶、PM-Scl和原纤维蛋白等 核浆点型：着丝点、核点等 胞浆颗粒型：线粒体、Jo-1、核糖体等 胞浆

2、纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等 分裂期细胞阳性：纺锤体纤维、中间体、中心粒等 核糖核蛋白：Sm、nRNP、SS-A、SS-B、Ku 细胞核 细胞浆 细胞周期蛋白：I型（PCNA）和II型 抗核抗体谱分类 模板片示例 抗核抗体（ANA） 核均质型 HEp-2：间期细胞核呈均匀荧光，分裂期细胞浓缩染色体荧光 增强 肝片：肝细胞核阳性，呈 均匀荧光。荧光强度与HEp- 2基本一致 靶抗原：dsDNA、核小体、 组蛋白 核粗颗粒型 肝片：肝细胞核呈颗粒样 荧光。核仁阴性；荧光强 度与HEp-2基本一致 HEp-2：间期细胞核呈 颗粒样荧光，核仁阴性； 分裂期细胞浓缩染色体阴 性，染色体周围呈

3、颗粒样 荧光 靶抗原：nRNP、Sm 核细颗粒型 肝片：肝细胞核呈颗粒样荧 光。部分核仁阴性；荧光强度 明显弱于HEp-2 HEp-2：间期细胞核呈细 颗粒样荧光，部分核仁阴性； 分裂期细胞浓缩染色体阴性， 染色体周围呈颗粒样荧光 靶抗原：SS-A、SS-B 抗Ku抗体 肝片： （灵长类）肝细胞 核呈现网状荧光 HEp-2：间期细胞核呈 现细颗粒样荧光；分裂期细 胞浓缩染色体阴性 靶抗原：Ku蛋白 细胞周期蛋白1型（PCNA） 肝片：荧光模型不典型 HEp-2：半数间期细胞核 呈现亮的、细颗粒样荧光， 核仁阴性；另半数间期细胞 荧光模型相同，但强度弱10 倍以上；分裂期细胞浓缩染 色体阴性，周

4、围有较弱的颗 粒荧光 靶抗原：DNA聚合酶的 辅助蛋白 细胞周期蛋白II型 肝片：荧光模型不典型 HEp-2：部分间期细胞核 阳性，部分间期细胞核阴性； 分裂期细胞核均阳性，呈颗 粒样荧光，浓缩染色体为阴 性 靶抗原：cyclin蛋白 着丝点型 肝片：肝细胞核内可观察 到10-20个荧光点；荧光强 度明显弱于与HEp-2细胞 HEp-2：间期细胞核内 出现大小数目相同、均匀分 布的点状荧光；分裂期细胞 浓缩染色体处出现浓缩点状 荧光 靶抗原：着丝点蛋白 核点型 肝片：肝细胞核内出现大 小、数目不均一的点状荧光； 荧光强度与HEp-2基本一致 HEp-2：间期细胞核内 出现大小、数目、强度不 均

5、的点状荧光；分裂期细 胞浓缩染色体阴性。周围 可见点状荧光 靶抗原：Sp100 核膜型 肝片：肝细胞核呈现特征 性环状荧光 HEp-2：间期细胞核呈 现均匀荧光，核周增强；分 裂期细胞浓缩染色体阴性 靶 抗 原 ：板 层 素 、 gp210 核仁型 肝片：肝细胞核仁阳性； 荧光强度与HEp-2基本一致 HEp-2：间期细胞核仁 阳性；分裂期细胞浓缩染色 体阴性。 靶抗原：Scl-70、PM- Scl、RNA多聚酶、原纤维 蛋白 核 仁 型 的 多 种 模 型 原纤维蛋白 PM-Scl RNA多聚酶 Scl-70 胞浆颗粒型：抗核糖体P蛋白抗体 肝片： 灵长类肝组织中可 呈现特异的由几个肝细胞浆

6、 融合形成的岛状荧光 HEp-2：间期细胞浆中 出现致密的细颗粒样荧光， 并有空泡现象，部分核仁 阳性；分裂期细胞浓缩染 色体阴性 靶抗原：核糖体P蛋白 胞浆颗粒型：抗线粒体抗体 肝片： 肝细胞呈颗粒样荧 光，整个视野呈细沙状荧光 HEp-2：细胞浆内粗颗 粒样荧光 靶抗原：线粒体 胞浆颗粒型：抗Jo-1抗体 肝片： 荧光模式不典型 HEp-2：间期细胞浆中 出现颗粒到细块状荧光， 细胞核有时也出现细颗粒 荧光；分裂期细胞浓缩染 色体阴性，染色体周围区 域呈致密的细颗粒荧光 靶抗原：Jo-1 胞浆颗粒型：抗溶酶体抗体 肝片： 荧光模式不典型 HEp-2：细胞浆中出现 细小的、中等大小的、以及

7、粗的滴状荧光颗粒 靶抗原：溶酶体 胞浆颗粒型：抗高尔基体抗体 肝片： 荧光模式不典型 HEp-2：间期细胞核一 侧的高尔基体所在部位呈现 网状的颗粒样荧光；分裂期 细胞无荧光。 靶抗原：高尔基体 胞浆纤维型：抗肌动蛋白抗体 肝片： 出现 “T” 字或 “丁”或“Y” 字样荧光 HEp-2：细胞浆中出现 无数束状纤维样结构，有时 可伸展到细胞核 靶抗原：肌动蛋白 胞浆纤维型：抗波形蛋白抗体 肝片：荧光模式不典型 HEp-2：细胞浆中出现 细的纤维网状荧光；分裂期 细胞浓缩染色体阴性，染色 体周围可出现无数圆形的荧 光点 靶抗原：波形蛋白 抗中心粒抗体 肝片：荧光模式不典型 HEp-2：细胞核内可

8、见 一或两个荧光点，分裂期细 胞中荧光点位于细胞纵向对 称的两极 抗纺锤体纤维抗体 肝片：荧光模式不典型 HEp-2：仅见于分裂期 细胞，纺锤体纤维部位出现 特征性荧光。 抗中间体抗体 肝片：荧光模式不典型 HEp-2：分裂中期细胞 中间水平方向产生带状细颗 粒荧光，半数间期细胞含有 大量粗荧光点，其余细胞为 阴性。 模板片示例 抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫） 抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫） 阳性阳性 细胞核 动基体 鞭毛基体 抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫） 抗dsDNA抗体在动基体表 现为均匀的、有时边缘增 强的荧光。 细胞核与鞭毛基体的反应 没有任何意义，可不做结 果判断。 阳性阳性 抗d

9、sDNA抗体（绿蝇短膜虫） 阴性阴性 仅有细胞核出现荧光 反应 抗dsDNA抗体（绿蝇短膜虫） 仅有鞭毛基体出现 荧光反应 阴性阴性 ANCA判读 建议 读片顺序： GRANULOC.EOH GRANULOC.HCHO HEP-2 HEPAR PRIM 判读 基质基质 提示提示 注意注意 GRANULOC.EOH 1）ANCA阴阳性 2）cANCA 或 pANCA ANA阳性 GRANULOC.HCHO 1）cANCA：进一步提示是否 2）pANCA：甲醛敏感型或抗性 ANA阳性 HEP-2 ANA阴阳性 辅助判读 HEPAR PRIM 1）ANA阴阳性 2）ANCA：粒细胞是否荧光增强 辅助

10、判读 cANCA pANCA 胞浆型ANA对cANCA荧光模型的干扰 ANA homogen Nuclear dots Centromere ANA nucleolar Scl-70 Sm/RNP SS-A/SS-B Nuclear memb. Ribosomes Mitochondria Golgi apparat. Lysosomes Actin Vimentin 细胞核ANA对pANCA荧光模型的干扰 ANA homogen Nuclear dots Centromere ANA nucleolar Scl-70 Sm/RNP SS-A/SS-B Nuclear memb. Riboso

11、mes Mitochondria Golgi apparat. Lysosomes Actin Vimentin 关于肝片： 从纯天然的肝组织的肝血窦中找增强的中性粒细胞从纯天然的肝组织的肝血窦中找增强的中性粒细胞 在肝组织上撒布中性粒细胞在肝组织上撒布中性粒细胞 关于乙醇固定的中性粒细胞： OK Maybe . 模板片示例 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） cANCA 猴肝猴肝 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) HEp-2 细胞细胞 pANCA （甲醛抗性） 猴肝猴肝 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) HEp-2 细

12、胞细胞 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) pANCA （甲醛敏感） 猴肝猴肝 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) HEp-2 细胞细胞 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 核膜型ANA阳性 HEp-2细胞细胞 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 猴肝猴肝 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 均质型ANA阳性 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 猴肝猴肝 HEp-2 细胞细胞 pANCA（甲醛抗性） + ANA 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 猴肝猴肝 HEp-2 细胞细胞 pANCA （甲醛敏感） + ANA 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 粒细胞

13、粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) 猴肝猴肝 HEp-2 细胞细胞 Lysosomes ! cANCA ? HEp-2 细胞细胞 猴肝猴肝 粒细胞粒细胞 (乙醇固定乙醇固定) 粒细胞粒细胞 (甲醛固定甲醛固定) ANCA荧光片判读注意 ANA可在乙醇固定粒细胞的基质上产生阳性反应。可在乙醇固定粒细胞的基质上产生阳性反应。 甲醛敏感的甲醛敏感的pANCA最易因最易因ANA阳性而产生误判。阳性而产生误判。 使用多基质组合（使用多基质组合（HEp-2/猴肝猴肝/乙醇固定乙醇固定/甲醛固定）进行综合判甲醛固定）进行综合判 断，可最大限度降低断，可最大限度降低ANA阳性产生的误判。阳性产生的误判。 ALD 中

14、的自身抗体 PBC: - AMA - 核点型 - 核膜型 AIH： - ANA, ASMA, Anti-F-Actin - Anti-LKM-1, Anti-LC-1 - Anti-SLA/LP PSC: - pANCA 肝脏马赛克技术 肝的结构 肝小叶的结构 抗肝溶质抗原（LC-1）抗体 鼠肝鼠肝 鼠肝： 肝细胞胞浆荧光阳性，肝小叶中心区域荧光减弱 相关疾病： 为 II - AIH 的血清学标志 肾的结构 肾单位肾单位 肾小管肾小管 肾小体肾小体 肾小囊肾小囊 肾小球肾小球 抗线粒体抗体（AMA） 鼠肾鼠肾 鼠肾： 肾小球上皮细胞胞浆颗粒样 荧光 相关疾病： PBC的血清学标志 抗肝肾微粒体

15、（LKM-1）抗体 鼠肾： 半阴半阳 近端肾小管细胞胞浆颗粒 样荧光 远端肾小管没有反应， 鼠肝： 肝细胞胞浆呈现细颗粒到均质 状荧光，模型不特异 相关疾病：为相关疾病：为 II-AIH 的血清学标志的血清学标志 鼠肾鼠肾 鼠肝鼠肝 胃壁的结构 浆膜层浆膜层 肌层肌层 粘膜下层粘膜下层 粘膜层粘膜层 由外而内由外而内 上皮上皮 固有层固有层 粘膜肌层粘膜肌层 抗平滑肌抗体（ASMA） 鼠胃： 鼠胃鼠胃 鼠肾：鼠肾： 鼠肾鼠肾 黏膜肌层黏膜肌层 肌层肌层 黏膜腺体间收缩蛋白黏膜腺体间收缩蛋白 肾小管周围纤维肾小管周围纤维 肾小球膜细胞肾小球膜细胞 血管肌层血管肌层 心肌的结构 纵切图纵切图 横切图横切图 抗横纹肌抗体 猴心猴心 抗闰盘抗体 猴心猴心 如何综合判读各基质？ Hep-2 鼠肾鼠肾 鼠胃鼠胃 猴肝猴肝 鼠肝鼠肝 猴心猴心 注意：注意： 一种抗体不仅限于一种基质表现一种抗体不仅限于一种基质表现 一种基质也不仅提示一种抗体一种基质也不仅提示一种抗体 如何综合判读各基质？ Hep-2 鼠肾鼠肾 鼠胃鼠胃 猴肝猴肝 鼠肝鼠肝 猴心猴心 猴肝：猴肝：LSP、LMA 鼠肝：鼠肝：LKM/LC-1 鼠肾：鼠肾：AMA/LKM 鼠胃：鼠胃：ASMA（F-actin）+猴肝猴肝 Hep-2 + 猴肝猴肝: