《机械瓣膜置换术患者的相关基因多态性与华法林剂量关系的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《机械瓣膜置换术患者的相关基因多态性与华法林剂量关系的研究（90页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中山大学硕士学位论文机械瓣膜置换术患者的相关基因多态性与华法林剂量关系的研 究姓名：岑菡婧申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：黄民;黄芝瑛20090526机械瓣膜胃换术患者的相关基冈多态性与华法林剂晕关系的研究机械瓣膜置换术患者的相关基因多态性 与华法林剂量关系的研究硕士研究生：岑菡婧专业：药理学导师：黄民教授，黄芝瑛教授中山大学临床药理研究所摘要华法林( W a f a r i n ) 是一种常用的香豆素类抗凝剂，主要用于预防及治疗深静脉血栓、肺栓塞、心肌梗塞后血栓栓塞并发症以及房颤、心瓣膜疾病或人工瓣膜置换术后引起的血栓栓塞并发症等。人工机械瓣膜置换术患者必须进行终身抗凝治疗，以防止血
2、栓栓塞发生，但是常用的抗凝药华法林治疗窗窄，容易导致出血等不良反应。目前主要靠监测患者的国际标准化比值( I N R ) 来调整用药剂量。随着遗传药理学的发展，人们发现编码华法林代谢和药效的酶的基因存在遗传多态性，而且在很大程度上解释了华法林的个体差异和种族差异。以遗传药理为基础的药物剂量调整得到各方面的重视，美国F D A 近期修改说明书建议华法林在用药前应做相关基因型检测。华法林有两种构象：R 和S 。其中S 一华法林的作用占6 0 7 0 ，而R 华法林只有3 0 - 4 0 。S 一华法林主要由C Y P 2 C 9 代谢生成无活性的代谢产物。C Y P 2 C 9的基因多态性与华法林
3、剂量问的关系早已被证实。亚洲人C Y P 2 C 9 的突变频率较低，常见的突变型为C Y P 2 C 9 幸3 。C Y P 2 C 9 3 突变导致C Y P 2 C 9 酶活性降低，其活性仅为野生型的5 ，而另一在高加索人群中较常见的突变型C Y P 2 C 9 幸2 的活性为野生型的1 2 。这两种突变均降低了酶活性使其底物的清除率降低，血药浓度升高，因此，需降低用药剂量，防止不良反应的发生。维生素K 环氧化物还原酶( v i t a m i nKe p o x i d er e d u c t a s e ，V K O R ) 是华法林一I 一机械瓣膜置换术患者的相关基冈多态性与华法
4、林剂带| 关系的研究作用的靶点，也是维生素K 依赖性凝血因子生成的限速酶，编码该酶的基凶位于人类染色体1 6 p 1 2 q 2 1 。目前已有一系列V K O R C l 的单核苷酸多态性( S i n g l eN u c l e o t i d eP o l y m o r p h i s m s ，S N P s ) 与华法林剂量的相关性报道。例如位于启动子E B o x ( C A N N T G ) 中第二个核苷酸的单核苷酸多态性V K O R C l3 6 7 3 G A 会改变E B o x 共义序列，从而改变启动子活性，最终影响华法林剂量。其中，V K O R C13 6 7
5、 3 G G 剂量较高，而G A ，A A 剂量依次降低。V K O R C l 基因多态性是影响华法林用药剂量个体差异和种族差异的主要因素。C Y P 4 F 2 是新发现的与华法林剂量相关的遗传因素。C Y P 4 F 2 与华法林剂量的相关性首先由C a l d w e l l 等人报道，C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 可以解释2 的华法林剂量，C Y P 4 F 2r S 2 1 0 8 6 2 2 T T 基因型患者的剂量比C C 基因型患者高lm e d a y 。M c D o n a l d 等应用重组细胞色素P 4 5 0 酶，及人肝微粒体研究证实C
6、 Y P 4 F 2 为维生素K 的单氧酶，可氧化底物生成( o 羟基衍生物。而且不同基因型的人肝微粒显示出不同的维生素K 代谢活性：C C 基因型肝微粒体代谢活性最高，T T 基因型肝微粒体代谢活性最低，为C C 基因型的7 5 ，C T 基因型介于两者之间。也就是说C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 突变减少了维生素K 的代谢，使维生素K 浓度升高。为了抑制维生素K 的还原，达到相同的抗凝效果，C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 突变型患者需要提高华法林剂量。这些研究的人群主要为高加索人，目前尚无中国人群的报、U 追。本文首先用P C R R F
7、 L P 技术研究C Y P 2 C 9 ，V K O R C I 和C Y P 4 F 2 基因多态性在中国汉族人工机械瓣膜置换术患者中的分布情况。并与文献报道的中国汉族健康人及不同种族的相关基因型频率进行对比。在此基础上，我们采用回顾性研究的方法，对人工机械瓣膜置换术患者的C Y P 2 C 9 、V K O R C l 和C Y P 4 F 2 基因多态性与其华法林稳定剂量进行相关性研究，并运用多重回归方法建立华法林剂量方程，以期探讨人工机械瓣膜置换术患者的C Y P 2 C 9 、V K O R C I 和C Y P 4 F 2基因多态性对华法林稳定剂量的影响，并为制定合理的华法林用药
8、方案提供依据。第一部分C Y P 2 C 9 、V K O R C l 和C Y P 4 F 2 基因型研究基因多态性是造成华法林用药剂量和疾病易感性个体差异和种族差异的重机械瓣膜l 芮：换术患者的相关基冈多态性o j 华法林剂带关系的研究 i - - - = = mm_m_ _ i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i要因素。分析健康人与患者的基因突变频率差异情况，可以初步推断基因突变与疾病的相关性，有助于疾病的预防与控制。研究不同人群的基因多
9、态性分布，可以了解不同人群的药物敏感性，并以此选择合适的用药方案。目的：研究中国汉族人工机械瓣膜置换术患者C Y P 2 C 9 、V K O R C I 和C Y P 4 F 2 基因多态性，与中国汉族健康人群及其他种族进行比较，明确这些基因型在中国汉族人工机械瓣膜置换术患者人群中的分布特点。方法：用P C R R F L P 的方法检测中国汉族人工机械瓣膜置换术患者C Y P 2 C 9 3 、V K O R C l3 6 7 3 G A 、V K O R C l9 0 4 1 G A 和C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 的基因型，计算基因型频率，等位基因频率，验证
10、是否符合H a r d y W e i n b e r g 平衡。用f 检验的统计学方法对文献报道的中国汉族健康人群及各种族基因频率进行分析，比较分布差异。结果：( 1 ) 中国汉族人工机械瓣膜置换术患者C Y P 2 C 9 “ 3 、V K O R C I3 6 7 3 G A 、V K O R C l9 0 4 1 G A 和C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 基因频率分布符合H a r d y W e i n b e r g 平衡。C Y P 2 C 9 “ 3 频率4 5 ；V K O R C I3 6 7 3 A 频率为8 6 。V K O R C I9 0
11、4 1 A 频率为1 4 。C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 T 突变频率为2 7 。在本研究人群中，无V K O R C l5 4 1 7 G A 突变出现。( 2 ) 患者中最常见V K O R C I3 6 7 3 9 0 4 1 单倍型为A G ，发生频率为8 5 1 ，预测人群中的频率为8 4 8 。其次常见为G - A 单倍型发生频率为1 3 3 ，预测人群中的频率为1 3 5 。( 3 ) 人工机械瓣膜置换术后患者的C Y P 2 C 9 ，C Y P 4 F 2 基因频率与健康人比无统计学差异。V K O R C l3 6 7 3 G A 基因型与文献报
12、道的汉族健康人的分布情况有统计学差异。( 4 ) 在与不同种族C Y P 2 C 9 ，V K O R C I3 6 7 3 G A ，V K O R C I9 0 4 1 G A 和C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 发生频率比较中，本研究人群的V K O R C l3 6 7 3 G A 发生频率与其他东亚洲人种相似，而与高加索人，非洲人差异显著。C Y P 2 C 9 等位基因频率除与亚洲人相似外，还与非洲人接近。C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 发生频率仅与非洲人有统一l T l 机械瓣膜置换术患者的相关基冈多态性与华法林剂帚关系的研究计学
13、差异。结论：本研究人群C Y P 2 C 9 突变频率较低与东亚人群相似。而V K O R C l 突变频率与属于华法林高剂量人群的高加索人，非洲人差异显著，体现中国人属于低剂量人群的基因型分布特征。除非洲人群外，各种族C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 突变频率无差异。第二部分C Y P 2 C 9 、V K O R C l 和C Y P 4 F 2 基因型及单倍型与机械瓣膜置换术患者华法林稳定剂量的相关性研究人工机械瓣膜置换术患者必须进行抗凝以预防血栓栓塞形成。华法林是人工机械瓣膜置换术后最常使用的抗凝剂。华法林的用药剂量个体差异大并受到饮食、药物相互作用、肝功能等因
14、素等影响。大量的研究表明，遗传因素是华法林用药剂量个体差异的重要因素。C Y P 2 C 9 、V K O R C l 和C Y P 4 F 2 基因多态性从药代和药效各个方面影响着华法林的用药个体差异。目的：旨在研究C Y P 2 C 9 、V K O R C I 和C Y P 4 F 2 等基因多态性及V K O R C l 单倍型以及患者临床特征对华法林剂量的影响，为以后利用基因多态性指导临床合理用药打下理论基础。方法：用P C R R F L P 方法及测序方法检测C Y P 2 C 9 、V K O R C I 和C Y P 4 F 2 等基因的基因型。采用回顾性研究方法，分析基因型
15、及单倍型以及临床特征与华法林稳定剂量的相关性。结果：( 1 ) 临床特征中，只有年龄、体表面积( b o d ys u r f a c ea r e a ，B S A ) 以及使用胺碘酮等因素与华法林有相关性。使用胺碘酮组的剂量比不使用组低4 1 。( 2 ) C Y P 2 C 9 * 3 突变使华法林剂量降低，C Y P 2 C 9 * l * 3 & C Y P 2 C 9 “ 3 “ 3 组的剂量比野生型l l 组低约lm g d a y 。一I V 机械瓣膜簧换术患者的相关基冈多态惟o j 华法林剂带关系的研究 mm( 3 ) V K O R C I3 6 7 3 G A 与9 0
16、4 1 G A 有很强的连锁小半衡。两者均对华法林剂量有影响，V K O R C l3 6 7 3 G G 组与9 0 4 1A A 组剂量相似均为5 7 0m g 。V K O R C I3 6 7 3 A A 组与9 0 4 1 G G 均为低剂量组，剂量分别为2 5 8 和2 5 7m g 。( 4 ) V K O R C I 单倍型各组之间华法林稳定剂量差异有统计学意义( P A 、C Y P 4 F 2r s 2 1 0 8 6 2 2 基因多态性为基础的华法林稳定剂量预测方程。华法林稳定剂量D o s e = a n t i l o g ( 0 5 1 9 8 6 一O 317 6 5 x V K O R C13 6 7 3 A A 0 13 7 8 4 x V K O R Cl3 6 7 3A G + 0 2 0 9 9 4 x 幸1 幸1 一O 0 7 7 2 C Y P 4 F 2 C C 0 0 4 0l
