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1、胎膜组织中胎膜组织中 IL2IL2 水平变水平变 化与胎膜早破关系的探讨化与胎膜早破关系的探讨作者：葛会敏,郭海英单位：0543000 河北省邢台市，邢台医学高等专科学校附属医院临床系妇产科【摘要】目的 探讨胎膜中 Th1 因子 IL2 水平的变化与胎膜早破的关系。方法 免疫组化法检测 20 例胎膜早破（PROM）孕妇与 20 例正常孕妇的胎膜组织中 Th1 因子 IL2 表达水平。结果 PROM 组孕妇胎膜组织中 IL2 含量高于正常孕妇组（P0.05） ，其中，有炎症胎膜早破组 IL2 水平高于无炎症胎膜早破组（P0.05） 。结论 PROM 孕妇胎膜组织中IL2 水平显著升高，有炎症时
2、IL2 升高水平更加明显。 【关键词】 胎膜早破 IL2 Th1 因子 胎膜 细胞免疫胎膜早破（PROM）是指临产前胎膜破裂。胎膜早破的发病因素至今仍未完全明确，一般认为是基因、环境等多因素造成的。本实验利用原位杂交法观察 Th1 型细胞因子 IL2 在胎膜早破孕妇与正常妊娠孕妇的胎膜组织中的表达情况，通过比较胎膜早破组与正常妊娠组胎膜组织中的 Th1 型因子 IL2 是否存在差异，从免疫角度分析胎膜组织中 Th1 型因子 IL2 与胎膜早破的关系。1 资料与方法1.1 一般资料 随机选择我院 2006 年 12 月至 2007 年 6 月住院胎膜早破孕妇 20 例（PROM 组） 、正常足月
3、妊娠孕妇 20 例分娩的单胎初产妇，所有受试对象孕期顺利，无产科及内外科合并症，胎膜早破者均在破膜 12 h 内剖宫产终止妊娠。2 组年龄、孕龄差异无统计学意义（P0.05） 。见表 1。 表 1 胎膜早破、正常组临床资料对照（略）1.2 方法1.2.1 标本采集：术后留取剖宫产近胎儿娩出口处胎膜二块 1.5 cm1.5 cm 大小，用 4%多聚甲醛固定、石蜡包埋备用。1.2.2 试剂：兔抗人的 IL2 单克隆抗体 SP 免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公司。1.2.3 实验步骤：将胎膜蜡块连续切片二张，分别做 HE染色、IL2 检测。HE 染色、观察：切片脱蜡至水，HE 染色脱水透
4、明封片，光学显微镜观察炎细胞浸润情况。结果判定：根据高倍镜下（200）白细胞是否浸润羊膜、绒毛膜，将 40 例胎膜分为 2 组：羊膜绒毛膜炎组即白细胞浸润5 个/HP，无羊膜绒毛膜炎组即白细胞浸润5 个/HP 或无浸润。IL2 免疫组化法检测 免疫组化 SP 法染色，采用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照，用已知 IL2 的组织切片作阳性对照（染色步骤按试剂盒说明操作） 。1.3 免疫组化结果判定 所有标本均先在光镜下观察切片阳性染色的分布及强度，胞浆中出现黄色和棕黄色颗粒为阳性信号，在计算机 Motic Med 6.0 数码医学图像分析系统内测定阳性染色部位的平均光密度值（OD） ，
5、随机选取 5 个视野，分别计算每个视野的阳性强度，取其平均值。IL2 以阳性细胞染色的积分光密度值（OD）值来表示抗原表达量。1.4 统计学分析 应用 SPSS 14.0 统计软件，计量资料以s 表示，先进行方差齐性检验，方差齐用 t 检验和方差分析，不齐则用t 检验，单因素两组间比较用 t 检验，P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 胎膜组织中 Th1 细胞因子 IL2 水平比较IL2 阳性反应物均为黄色颗粒，可分布于细胞浆，主要位于羊膜上皮细胞、成纤维细胞、绒毛膜滋养细胞。见图 1。2.2 PROM 组与正常组的 Th1 型细胞因子 IL2 水平比较 PROM 组胎膜组织中 Th
6、1 型细胞因子 IL2 表达为（0.29580.0103）均高于正常组（0.19870.421） ，差异有统计学意义（P0.05） 。数据显示：胎膜组织中 Th1 型细胞因子 IL2 表达水平升高与胎膜早破的发生可能有关。2.3 羊膜绒毛膜炎组与无羊膜绒毛膜炎组胎膜组织中 Th1型细胞因子 IL2 表达水平比较 羊膜绒毛膜炎组胎膜组织中 Th1 型细胞因子 IL2 表达水平为（0.30150.0225）高于无羊膜绒毛膜炎组（0.23070.0307） ，差异有统计学意义（P0.05） 。数据显示：羊膜绒毛膜炎时胎膜组织中 Th1 型细胞因子 IL2表达水平升高。2.4 胎膜无羊膜绒毛膜炎组再分
7、为 PROM、正常组，并对其胎膜组织中 Th1 型细胞因子 IL2 水平进行比较 PROM 组胎膜组织中 Th1 型细胞因子 IL2 水平为（0.25050.0304）高于正常组（0.20090.1001） ，差异有统计学意义（P0.05） 。数据显示：无羊膜绒毛膜炎时胎膜早破的胎膜 Th1 型因子IL2 胎膜早破表现更明显。可以推测胎膜早破的发生与胎膜细胞免疫亢进有关。3 讨论3.1 Th1 型细胞因子 IL2 与胎膜早破 Th1 型细胞因子 IL2 是由活化的 T 细胞、NK 细胞、巨噬细胞分泌1 ，它可以促进炎细胞的渗出与趋化并且激活单核吞噬细胞、中性粒细胞等，此外对母胎界面滋养细胞的生
8、长和代谢活性有较强的抑制和促调亡作用。IL2 受体属于型细胞因子受体家族，分布在除成熟红细胞外的几乎所有细胞表面，IL2 可以与细胞外基质相连的形式存在故通过旁邻的方式控制细胞生长。胎膜内层是羊膜，外层由绒毛膜和已明显萎缩的包蜕膜及壁蜕膜组成。羊膜源于外胚层的无血管透明膜，主要靠羊水供应营养；绒毛膜是由滋养叶细胞而来的中胚层组织，绒毛膜内有血管，可通过弥散作用为羊膜提供营养，它与羊膜一样起保护作用，提供免疫耐受，防止早产发生；蜕膜组织是由母体子宫内膜在孕激素作用下衍变来。这三层组织共同维持胎膜完整，当胎膜细胞数量减少、胶原纤维含量减少及结构改变，均可以导致胎膜张力降低2 ，导致胎膜早破的发生。
9、本研究发现：PROM 孕妇胎膜组织中 IL2 水平显著升高，可能参与了胎膜早破的发生机制。推测有以下几方面原因：（1）PROM 胎膜中 IL2 升高表明了胎膜局部 Th1 细胞及 Th1 细胞因子占优势。细胞毒 T 细胞可以通过自身分泌颗粒酶溶解细胞坏死，还可以通过 FasFasL 途径诱导细胞调亡；IL2 可以通过刺激炎细胞分泌细胞因子如 TNF、IL6 等发挥其细胞毒作用。 （2）IL2 因子自身不仅促使胎膜细胞调亡增加，而且可诱导 MMP 表达，增强，MMPs 的活性，使胎膜降解3 。 （3）体外实验证明 IL2 具有抑制成纤维细胞合成、胶原纤维和纤连蛋白作用，使胶原合成减少，胎膜张力降
10、低而破裂4 。3.2 胎膜早破与羊膜绒毛膜炎的关系 本研究比较了有羊膜绒毛膜炎组与无羊膜绒毛膜炎症组胎膜中 Th1 型细胞因子 IL2 水平，结果表明羊膜绒毛膜炎组胎膜组织中 Th1 型细胞因子 IL2 水平高于无羊膜绒毛膜炎组（P0.05） 。提示羊膜绒毛膜炎时胎膜局部存在 Th1 型因子IL2 增高，存在感染 Th1 炎症极化现象。Th1 型因子 IL2 参与了胎膜局部炎症发生，也可能与 PROM发生有关。首先 IL2 有明显的促炎作用5可以促进炎细胞的渗出与趋化并且激活单核吞噬细胞、中性粒细胞等，活化的炎细胞分泌大量酶分解胶原纤维，胎膜破裂；再者 IL2 可诱导其它 Thl 细胞因子（如
11、 IL6、7、8、17、TNF等产生） 6 ，共同组成炎性细胞因子正反馈网络，可促使MMP9mRNA 的表达，破坏胎膜组织细胞结构和功能。3.3 无炎症组的 PROM 与正常组的比较 本研究显示无炎症的 PROM 组与正常妊娠组的比较结果与不分炎症时比较结果是一致的。即 PROM 组 IL2 表达水平显著高于正常妊娠组，说明细胞免疫在 PROM 的重要作用。目前公认胎膜滋养细胞不受 NK 细胞的攻击主要依赖于 HLAG的存在，而据刘伯宁7报道起免疫保护作用的 HLAG 仅在人类的底蜕膜和平滑绒毛膜中的绒毛外滋养细胞（EVT）表达，那么当 HLAG 表达量减少时，胎膜滋养细胞就要受 NK 细胞的
12、攻击，导致 PROM 的发生发展。Thl/Th2 型细胞因子与滋养细胞的 HLAG 表达存在以下关系：Th2 型因子 IL10 上调胎膜滋养细胞 HLAG，当母体免疫微环境中过量表达 Thl 型细胞因子如 IL2 等抑制了 Th2 型因子IL10 的表达，间接导致胎膜滋养细胞 HLAG 下调， HLAG表达量减少，一方面促使 Th0 向 Th1 分化，诱导了 Thl 型细胞因子 IL2 等偏移，同时对 NK 细胞抑制作用减弱，激发母体对胎儿的免疫排斥，如淋巴细胞毒性反应。如此往复，形成恶性循环，导致 PROM 的发生发展。综上所述本研究提示了胎膜组织中 IL2 水平升高与胎膜早破之间存在密切关
13、系，进一步揭示了细胞免疫可能参与了胎膜早破发生。【参考文献】1 龚非力主编.医学免疫学.第 2 版.北京：科学出版社，2003.7275. 2 Vishal Pandey，Kellie Jaremko，Robert M，et al.The force required to rupture fetal membranes paradoxically increases with acute in vitro repteated stretching.Am J Obstet Gynecol，2007，196：165167. 3 EISS，Makhseed M，Aizieh F，et al.Inc
14、reased expression of proinflammatory cytoxines in placentas of women undergoing spontaneous preterm delivery or premature rupture of membranes.Am J Report Immunol，2004，52：4552. 4 The Essential Involvement of CrossTalk between IL2and TNFin the skin WouldHealing Process.Yuko，Ishida Toshikazu Konda etal The Journal of immunology，2004，172：18481855. 5 丰有吉主编.妇产科学.第 2 版.北京：人民卫生出版社，2005.101104. 6 龚非力主编.医学免疫学.第 2 版.北京：科学出版社，2003.64. 7 刘伯宁.妊娠期高血压疾病的胎盘病理学研究进展.中国实用妇科与产科杂志，2004，20：597.申明：本论文版权归原刊发杂志社所有，我们转载的目的是用于学术交流与讨论，仅供参考不构成任何学术建议。
