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1、兰州医学院硕士学位论文肝细胞生长因子与妊娠高血压综合征发病的关系姓名：吴海霞申请学位级别：硕士专业：妇产科指导教师：王秀华2002.5.1肝细胞生长因子与妊娠高血压综合征发病的关系研究生吴海霞导师王秀华兰州医学院第一附属医院妇产科甘肃兰州7 3 0 0 0 0摘要【目的】观察肝细胞生长因子( H G F ) m R N A 在妊娠高血压综合征胎盘组织中的表达，探讨妊高征的发病机制。【方法】本试验采用逆转录一聚合酶链式反应( R T - P C R ) ，选择2 0 例重度妊高征患者及2 0 例正常足月妊娠妇女为对照，胎盘娩出后，立即于胎盘母体面中央避开缺血、坏死及钙化区，取大小约1 0X 1
2、0 0 5c m 3 的胎盘组织。抽提细胞总R N A ，利用H G F 的一对特异性引物对总R N A 进行逆转录和扩增。采用凝胶成像系统分析 l G F I R N A 的扩增条带，检测H G F m R N A 的表达水平。【结果】1 P C R 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，在2 4 8 b D 处可见一1条H G F 的扩增带。2 妊高征患者胎盘组织中H G F m R N A 的表达峰度为0 1 9 0 0 7 ( ；s ) ，正常妊娠组胎盘组织中H G F r a R N A 的表达峰度值为0 3 3 + 0 0 5 ( ；s ) ，妊高征组胎盘组织中H G F m R N A 的
3、表达水平显著降低( P P C R 产物定量分析：取P C R 产物5 “l ，采用含1pg “l 溴化乙锭的1 5 琼脂糖凝胶电泳分析P C R 产物，特异性条带经紫外图像分析扫描仪分析，分别计算特异性条带峰度值，H G F 和B - a c t i n 条带的峰度比代表胎盘组织中H G Fm R N A 的含量。三、统计学方法；采用S P S S8 0 统计软件进行统计分析，两组比较采用t 检验。结果l 、H G F m R M A 的R T - P C R 扩增条带分析：采用H G F 一对特异性引物，对人胎盘组织中H G F 基因进行R T P C R 扩增，P C R 产物电泳结果，
4、可见一条扩增带位于2 4 8 b p处，作为内参照的B a c t i n 条带位于5 7 2 b p 处，阴性对照未见任何条带。2 、两组胎盘组织中H G F m R N A 表达水平的比较：妊高征患者胎盘组织H G F 表达水平为0 1 9 + 0 。0 7 平均灰度( ；s ) ，显著低于正常妊娠组的0 3 3 0 0 5 ( ；s ) 平均灰度。表1 人胎盘组织的H G F 基因9 - a c t i n 相对水平( ；s )组别例数H G F B a c t i n妊高征2 00 1 9 0 0 71 阴性对照 3 妊商征B - a c t i n5 m a r k e r 7 正常
5、妊娠H G F2 阳性对照 4 正常妊娠量a c t i n 6 妊商征H G F图1 胎盘组织R T - P C R 检测结果讨论一、H G F 的生理功能及在胎盘组织中的局部调节作用：H G F 是由间质细胞衍生的一种多功能生长因子。它能调节细胞的生长和运动，促进多种细胞组织形态发生，是上皮细胞和间质细胞相互作用的体液介质 5 。H G F 最初发现于大鼠部分肝切除的血液中，此后分别从大鼠的斑小板、肝脏和入的血清中分离出来。研究发现，其主要由成纤维细胞及其它基质细胞产生 1 0 1 。而且，还研究发现，在人的胎盘组织中也有H G F 及其受体的表达。H G F不仅是一种特异性内皮细胞生长因
6、子，而且还可以在胎盘局部通过旁分泌的方式调节滋养细胞的增殖 6 。可推测H G F 异常表达可能参与妊高征的发病。二、H G F 与妊高征发病的关系：目前关于妊高征发病机制的学说很多，其中子宫一胎盘缺血、缺氧学说已被普遍公认。研究发现妊高征患者胎盘“血管重铸”过程受阻，其关键在于滋养细胞功能异常。妊高征患者滋养细胞增殖和浸润能力由于免疫遗传因素或相关基因改变而降低，对螺旋小动脉的浸润仅达蜕膜段 1 1 ，或伴有免疫损伤造成螺旋小动脉内皮受损和血管内小血栓形成，导致子宫一胎盘局部缺血、缺氧，引发妊高征。本研究发现，H G F 与这病理生理过程有关。本研究中采用R T - P C R 显示胎盘组织
7、中H G F m R N A 表达显著降低，说明胎盘组织中H G F m R N A 转录减少，最终导致H G F 蛋白合成减少，影响其生物学作用的发挥。这说明，妊高征患者H G F 合成分泌减少是发生于转录水平。研究发现H G F 主要由绒毛核基质细胞产生，而其受体是c - m e t 原癌基因的产物，具有酪氨酸激酶活，性，主要由细胞滋养细胞产生，H G F 通过旁分泌与M e t 蛋白相互作用，促进细胞滋养细胞对子宫螺旋动脉的浸润。H G F 还引起表皮细胞表型向浸润表型转换，H G F m R N A 表达减少，可能影响细胞滋养细胞向浸润表型转换 1 2 ，导致滋养细胞增殖和浸润能力降低
8、，致使胎盘缺血、缺氧，从而引起妊高征的发生。研究发现 1 3 ，、妊高征患者血清可诱发血管内皮细胞产生大量张力纤维，并且破坏内皮细胞单层结构的完整性，从而引起内皮细胞损伤。而H G F是一种内皮细胞特彝倥韵生长因子，可保护和修复受损的内皮细 、 胞。因此推测，H G F 可能是妊高征发病的毒种搐抗因子。，我们的研究提供了胎盘浅着床的一种可能的分子学机制。而且还指出H G F 与妊高征发病相关。结论l 、H G Fm R N A 在胎盘组织中有所表达。通过旁分泌的方式刺激细胞滋养细胞的增殖。2 、妊高征患者H G F 表达异常发生于转录水平。3 、H G F 参与妊高征发病的机制可能为：妊高征患
9、者胎盘组织中的H G F 表达降低，对细胞滋养细胞的刺激作用减弱，导致细胞滋养细胞增殖和浸润能力降低，致使胎盘缺血、缺氧，从而引发妊高征的发生。再加之胎盘产生的H G F 过少，对内皮细胞的保护和修复作用降低，进一步加重妊高征的病理生理变化。参考文献1 、G e n b a c e vO 、J o s l i nR 、D a m s k yC H 、P o l l i o t t iB M 、F i s h e rS J 、H y p o n i aa l t e r se a r l yg e s t a t i o nh u m a ne y t o t r o p n o b l a s
10、 td i f f e r e n t i a t i o ni n v a s i o ni nV i t r oa n dm o d e l st h ep l a c e n t a ld e f e c t st h a tO C C U Ti np r e e c l a m p s i a1 9 9 6 ，Jc l mI n v e s t ，9 7 ：5 4 0 5 5 02 、G r a h a mC H 、L a l aP K 、M e c h a n i s mo f c o n t r o lo f t r o p h o b l a s ti n v a s i o n
11、i ns i t u1 9 9 1 ，JC e l lP h y s i o l1 4 8 ：2 2 8 2 3 43 ，B a s sK E ，M o m s hD ，R o t hI ，B h a r d w a jD 、T a y l o rR ，Z h o uY 、F i s h e rS J 、H u m a nc y t o t r o p h o b l a s ti n v a s i o ni su p - r e g u l a t e db ye p i d e r m a lg r o w t hf a c t o r ：e v i d e n c et h a tp
12、a r 疵ef a c t o rm o d i f yt h i sp r o c e s s1 9 9 4 ，D e vD i o l1 6 4 ：5 5 0 5 6 14 、L i b r a c he L 、F e i g e n b a u mS L 、B a s sK E 、e ta l 。I n t e d e u k i n - 11 3r e g u l a t e sh u m a nc y t o t r o p h o b l a s tm e t a l l o p r o t e i n a s ea c t i v i t ya n di n v a s i o
13、ni n 劬1 9 9 4JB i o lC h e m2 6 9 ：1 7 1 2 5 1 7 1 3 15 、M o r d s h i t aR 、N a k m m u r aAc ta 1 C o n t r i b u t i o no fav a s c u l a rm o d u l a r , h e p a t o c y t eg r o w t hf a c t o r ( H G F ) ，t ot h ep a t h o g e n e s i so f1 7c a r d i o v a s c u l a rd i s e a s e 19 9 8J - A
14、 t h e r o s c l e r - T h r o m b4 ( 3 ) ：12 8 - 13 46 、N a s uK ：z h o uY ；M c M a s t e rM T , Ie ta 1 U p r e g u l a t i o no fh u m a nc y t o t r o p h o b l a s ti n v a s i o nb yh e p a t o c y t eg r o w t hf a c t o r 2 0 0 0 ，JR e p o r dF e r t i lS u p p l5 5 7 3 5 5 8 07 、K a z u n o
15、 r iF u r u g o r i c ，e ta 1 1 e v e r l so fH G Fa n di t sm e s s e n g e rr i b o n u c l e i ca c i di nu n c o m p l i c a t e dp r i g n a n c i e sa n dt h o s ec o m p t i c a t d dp r e e c l a m p s i a 19 9 7Jo l i nE n d o c r iM e t a b8 2 ( 8 ) ：2 7 2 6 2 7 3 08 、乐杰主编妇产科学第5 版北京人民卫生出版社
16、2 0 0 11 1 6 - 1 1 79 、D EC l a r k 、S KS m i t he ta l 、H G W S c a t t e rf a c t o ra n di t sr e c e p t o rc - m e t ：l o c a l i z a t i o na n de x p r e s s i o nmt h eh u m a n p l a c e n t at h r o u g h o u tp r e g n a n c y 19 9 6 ，JE n d oM e t a b151 ：4 5 9 4 6 710 ，R u b i nJ S ，D o n a l dP 、A a r o n s o nS A ，H G F s c a t t e rf a c t o ra n di t sr e c e p t o rt h ec - m e tp r o t o - o n o
