《鸟苷酸交换因子C3G对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响与机制探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《鸟苷酸交换因子C3G对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响与机制探讨（62页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：垦2 呈2 ：三!U D C ：密级：重庆医科大学硕士学位。! 又鸟苷酸交换因子C 3 G 对卵巢癌S K O V 3 细胞恶性生物学论文题目行为的影响与机制探讨作者姓名罗淑娟指导教师姓名( 职称、单位名称)令狐华教授重庆医科大学附属第一医院妇科申请学位级别硕士学科、专业名称妇产科学论文答辩年月2 0 1 3 年0 5 月2 0 1 3 年0 5 月重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构
2、的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：、可| 墩端日期：知f 一千，f7学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，并编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其
3、他手段保存论文。保密论文在解密后适用本授权书。论文作者签名：指导教师签名：日期：加fj 目录英汉缩略语名词对照1中文摘要2英文摘要4论文正文鸟苷酸交换因子C 3 G 对卵巢癌S K O V 3 细胞恶性生物学行为的影响与机制探讨7前言。7月U吾”。7第一部分C 3 G 对卵巢癌S K O V 3 细胞p 3 8 M A P K 表达、凋亡及侵袭的影响91 材料和方法92 结果。1 63 讨论。2 04 结论。2 2第二部分C 3 G 对S K O V 3 细胞裸鼠皮下移植瘤生长及腹腔内种植转移的影响2 31 材料和方法2 32 结果。2 63 讨论。2 94 结论。3 0第三部分C 3 G 在
4、人类卵巢癌原发灶、大网膜和肠壁转移灶中的表达差异3 11 材料和方法3l2 结果。3 2二皇日7 陌川J 二3 讨论。3 44 结论。3 5全文总结3 6参考文献。3 7文献综述鸟苷酸交换因子C 3 G 的作用研究进展4 1致谢5 8在校期间发表的论文和参与的科研项目5 9重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写英文全称A PB C AD A BD M S OF B SG D PG E F sG T PM M P sM T Tm R N AG S TM A P KP B SP M S FP IP V D FP A G ES D Ss i R N AT B S TT E M E DT r i sr
5、 p m英汉缩略语名词对照A m m o n i u mP e r s u l f a t eb i c i n c h o n i n i ca c i dD i a m i n o b e n z i d i n eD i m e t h y lS u l f o x i d ef e t a lb o v i n es e r u mG u a n o s i n ed i p h o s p h a t e中文全称过硫酸胺2 , 2 联喹啉4 ，4 二甲酸二钠二氨基联苯胺二甲基亚砜胎牛血清二磷酸鸟菅G u a n i n e n u c l e o t i d ee x c h a n
6、 g ef a c t o r s鸟核苷酸因子交换因子g u a n o s i n et r i p h o s p h a t em a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e sM e t h y lt h i a z o l y lt e t r a z o l i u mm e s s a g eR i b o n u c l e i cA c i d三磷酸鸟苷基质金属蛋白酶四甲基偶氮唑盐信使核糖核酸G l u t a t h i o n eS - t r a n s f e r a s e谷胱甘肽巯基转移酶m i t o g e n - a
7、 c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s ep h o s p h a t eb u f e r e ds a l i np h e n y l m e t h y ls u l f o n y l f l u o r i dP r o p i d i u mI o d i d e促分裂素原活化蛋白激酶磷酸盐缓冲液苯甲基磺酰氟碘化丙啶P o l y v i n y l i d e n eF l u o r i d em e m b r a n e二氟化树脂p o l y a c r y l m i d eg e l e l e c t r o p h o r
8、 e s聚丙烯酰胺凝胶电泳s o d i u md o d e c y ls u l f a t e十二烷基硫酸钠s m a l li n t e r f e r i n gR N A小干扰R N A仃i sb u f f e r e ds a l i n ew i t ht w e e n2 0吐温2 0 T r i s 盐缓冲液N N N r N T e t r a m e t h y l e t h y l e n e d i a m i n eN ，N N ”N 一四甲基二乙胺T r i sh y d r o x y m e t h y la m i n om e t h a n e三
9、羟甲基氨基甲烷r o l l sp e rm i n u t e每分钟转数重庆医科大学硕士研究生学位论文鸟苷酸交换因子C 3 G 对卵巢癌S K O V 3 细胞恶性生物学行为的影响与机制探讨摘要目的：在前期研究基础上进一步探讨鸟苷酸交换因子C 3 G 在卵巢癌S K O V 3 细胞生长、凋亡、侵袭及转移等恶性生物学行为中的影响与机制。方法：1 体外实验：应用W e s t e r nb l o t t i n g 检测C 3 G 表达缺失的S K O V 3 细胞( S K O V 3 一C 3 G i ) 及转染阴性对照细胞( S K O V 3 一N T ) 中p 3 8 M A P
10、K 的表达；A n n e x i n V P I 法检测细胞凋亡，单细胞凝胶电泳实验检测单细胞D N A 损伤；血管内渗及外渗实验检测细胞侵袭能力。2 体内实验：构建裸鼠皮下移植瘤模型及腹腔种植转移模型，观察肿瘤细胞异种成瘤及转移情况，免疫组化法检测皮下移植瘤组织中K i 6 7 表达；3 临床标本检测：采用W e s t e r nb l o t t i n g 检测4 例卵巢癌患者原发灶、网膜转移灶及肠表面转移灶中C 3 G 的表达。结果：与S K O V 3 - N T 细胞相比，S K O V 3 一C 3 G i 细胞中p 3 8 M A P K表达无显著变化( O 5 4 - 0
11、 0 9V S 0 4 + 0 0 6 ，P 0 0 5 ) ；早期凋亡细胞比例( 4 0 3 4 - 8 8 V S 5 6 4 - 1 5 ，P 0 0 5 ) 。在腹腔种植模型中，腹腔注射肿瘤细胞5 周后，S K O V 3 一C 3 G i 细胞在腹腔内脏尤其是肠管上形成的种植转移灶数目较S K O V 3 - N T 细胞显著减少( 2 2 。0 + 5 。6V S 5 9 。2 + 2 7 ，P O 0 5 ) ；H o w e v e r ，t h ep r o p o r t i o no fe a r l ya p o p t o t i cc e l l s ( 4 0 。
12、3 士8 8 V S 。5 6 士1 5 ，P 0 0 5 ) I n t e r e s t i n g l y , S K O V 3 一C 3 G ic e l l sf o r m e dl e s si m p l a n t a t i o nm e t a s t a t i cf o c io nt h es u r f a c eo fv i s c e r a lo r g a n st h a nS K O V 3 一N Tc e l l s ，e s p e c i a l l yo nt h ei n t e s t i n ea tt h e5 mw e e ka
13、f t e rt h et u m o rc e l l sw e r ei n j e c t e di n t r a p e r i t o n e a l l y ( 2 2 0 1 5 6V S 5 9 2 1 2 7 ，尸 1 3 。1 3 ) 中和缓冲液( 1 0 0 0 m 1 ) ：T r i s4 8 5 9 + 去离子水1 0 0 0 m l ，用浓H C L 调节P H值为7 5 左右，室温保存。1 2方法1 2 1 细胞培养野生型卵巢癌S K O V 3 细胞、空质粒组、阴性对照组及S K O V 3 一C 3 G i 细胞均用含1 0 胎牛血清的R P M l l 6 4 0 完全培养基并置于3 7 。C 、5 C 0 2 孵箱中培养。1 2 2W e s t e r nb l o t t i n g1 ) 细胞蛋白提取：取融合度约8 0 9 0 的细胞，用冰上预冷的P B S 清洗三遍；用含1 P M S F 的R I P A 裂解液冰上裂解3 0 m i r a 4 。C ，1 2 0 0 0 r p m1 2重庆医科大学硕士研究生学位论文离心5 m i n ；取上清即为蛋白液，用B C A 法测
