《益坤精胶囊对去势雌鼠骨密度和骨组织中IL6含量的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《益坤精胶囊对去势雌鼠骨密度和骨组织中IL6含量的影响（44页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山西医科大学硕士学位论文益坤精胶囊对去势雌鼠骨密度和骨组织中IL-6含量的影响姓名：段水竹申请学位级别：硕士专业：中西医结合妇科指导教师：张永洛2003.6.6益坤精胶囊对去势雌鼠骨密度和骨组织中I L 一6 含量的影响摘要目的：观察中药益坤精胶囊对去势雌鼠骨密度的影响并通过其对骨组织微环境中I L 一6 含量的影响以探讨其作用机制。方法：通过切除大鼠双侧卵巢以建立绝经后骨质疏松症模型。将4 0 只3 月龄s D 雌性大鼠随机分为5 组，即假手术组、去卵巢组、尼尔雌醇组、中药高剂量组、中药低剂量组。造模成功后，尼尔雌醇组、中药高、低剂量组分别以尼尔雌醇和益坤精胶囊高、低剂量灌胃。用药1 0 周
2、后，检测各组火鼠全身的骨密度，观察股骨干骺端骨形态学改变，并通过骨组织培养以检测骨组织中I L 6 含量的变化。结果：( I ) 实验结束时，与假手术组相比，去卵巢组l 由i 青【_ i _ IE ：水平明显降低( P O 0 5 )B u tt h e r ew e r eo b v i o u sr a i s eo fE 2l e v e li nY i k u n j i n gg r o u p si nl a r g ea n ds m a l ld o s a g e ( P O 0 5 ) ，t h o u g ht h el e v e l so fE 2w e r es t
3、 i l lm u c hl o w e rt h a nt h es h a mO V Xg r o u p T h er e s u l to fb o n ec u l t u r er e v e a l e d ：t h el e v e l so fI L 6i nb o n ed e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l yi nY i k u n j i n gh i g hd o s a g eg r o u p s ，t h el o wd o s a g eg o u pa n dn i l e s t r i o lg o u pa
4、sc o m p a r e dw i t ht h eO V Xg o u p俾 0 - O1 ) T h el e v e lo fI L 一6 i nb o n ei nY i k u n j i n gl o wd o s a g eg r o u p sw a so b v i o u s l yh i g h e rt h a nt h es h a mO V Xg r o u pf P O 0 5 )w h i l ei tw a sl o w e rt h a nt h eO V Xg o u pf P 0 O1 )C o n c l u s i o n s ：Y i k u
5、n ji n gc a p s u l ec a ne f f e c t l yp r e v e n to s t e o p o r o s i si nf e m a l er a t si n d u c e db yo v a r i e c t o m y ，i ti sa b l et oe v a l u a t et h a to n eo ft h e r a p e u t i cm e c h a n i s mo f些塑坠盟苎兰塑! 堂垡堡苎Y i k u n j i n gc a p s u l ew a si tc a nd e c r e a s et h e
6、l e v e lo fI L 。6i nb o n ea n di n h i b tb o n ea b s o r b t i o nK e y ：o s t e o p o r o s i s ；p o s t m e n o p a u s a l ；C a s t r a t i o n ；B o n ed e n s i t y ；I n t e r l e u k i n 一65坝 j 学位论文前言绝经后骨质疏松症( P M O P ) 是危及中老年妇女健康的一种常见病和多发病，是骨质疏松的一种常见类型。P M O P是以绝经早期高骨转换为特征，表现为骨吸收大于骨形成，小梁骨大
7、量丢失。其结果是骨密度减低，脆性增加，易发生骨折。P M O P 的发病机制目前尚未完全明了。有研究显示，与雌激素不足相关的骨丢失主要是由于骨髓微环境中的些溶骨性细胞因子所介导的l l j 。研究表明，在雌激素缺少的情况F ，骨髓基质细胞或成骨细胞可大量产生5 种细胞因子：白细胞介素1 ( I L 一1 ) 、白细胞介素6 ( I L 一6 ) 、肿瘤坏死因子a ( T N F a ) 、巨嗜细胞克隆刺激因子( M C S F ) 、和颗粒一巨嗜细胞克隆刺激因子( G M ，c s F ) 。这些细胞因子相互作用形成网络，使骨吸收大大增强，已公认其介导P M O P 的发生1 2 1 川。而其
8、中I L 一6 被认为是机体内复杂的细胞因子网络中的关键成员，其在骨代谢中的调节作用不仅直接刺激骨吸收，还能加强其它因子的作用，使骨吸收大大增强f 4 6 。所以研究大鼠去卵巢后骨组织微环境中I L 一6 含量的变化，对进一步探讨P M O P 的发病机制和药物的作用机理具有重要意义。近年来研究表明，一些补肾中药对P M O P 有肯定疗效，为进一步探讨其作用机制，本实验以去卵巢所致的骨质疏松大鼠为模型，观察了去卵巢后模型鼠骨组织微环境中I L 一6 含量的变化及补肾中药对其的影响。材料与方法l实验材料1 1 实验动物三月龄s D 雌鼠4 0 只，体重2 0 0 - 2 2 0 9 ，中国辐射
9、防护研究院动物中心提供。1 2 实验药物益坤精胶囊主要由菟丝子、巴戟天、肉苁蓉、构杞予、当归等药组成，由山西医科大学第二临床医学院制剂室提供，每粒剂量O 3 9尼尔雌醇由北京四环制药厂生产，每片l m g ，批号2 0 0 1 0 8 0 1 。1 3 实验试剂血清E ：放射免疫分析测定盒由中国原子能科学研究院同位素研究所提供。I L 一6 放射免疫分析测定盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供。H a n k ，s 液、1 6 4 0 液、S c h c i d d e 液均根据文献配制。1 4 实验仪器双能x 线吸收测量仪：美国L u n a r 公司生产C 0 2 培养箱R C 0 3
10、0 0 0 T V B ：美国A s h e v i l l e 公司生产离心机L D 一2 4 。0 8 型：北京医用离心机厂生产v 一计数器G A M M A 。C 1 2 型：美国D P C 公司生产2实验方法2 t 动物分组及造模3 月龄S D 雌性大鼠4 0 只，随机分为5 组，每组8 只，即假手术组、去卵巢组、尼尔雌醇组、中药高剂量组、中药低剂量组。分组后，假手术组在无菌条件下，以4 0 m g k g 1 体重的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，俯位固定，经腰椎旁切口进入大鼠腹腔背侧，将卵巢提出腹腔，再送回关腹。其余各组均在相同条件下切除双侧卵巢，然后止血缝合。术后一周行阴道涂片，确定无动
11、情周期变化者为造模成功。2 2 动物给药及喂养造模成功后，中药高剂量组以益坤精胶囊1 4 4 9 k g 一体重灌胃，中药低剂量组以益坤精胶囊0 7 2 9 “ k g J 体重灌胃，每【1 一次；尼尔雌醇组0 2 5 r a g k g 。体重灌胃，每两周一次，用药间歇期每天灌以等体积的生理盐水；假手术组、去卵巢组每天灌以等体积的生理盐水。给药时间为1 0 周。各组大鼠于室温下分笼饲养，自由摄取标准饲料，自由饮用蒸馏水。2 3 检测项目2 3 1称重体重及子宫重量分别于实验前和大鼠处死前，用电子称逐一称量体重。处死后，解剖并完整分离子宫组织，剔净周围非子宫组织，于电子天平( 精确到0 0 0
12、 1 9 ) 上称子宫湿重，并记录。2 3 _ 2 骨密度测定将大鼠以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，四肢展开平置于美国L U N A R 公司生产的双能x 线吸收测量仪平台上，测定大鼠伞身的骨密度。2 3 3 雌激素测定处死前内眦静脉采血，离心后提取血清，2 0 。c 保存待测。采用放射免疫法( R j A ) 检测血清雌二醇水平。2 3 4 组织形态学观察取大鼠股骨干骺端，以1 0 的甲醛液常规固定，S c h c i d d e液脱钙处理后石蜡制片。H E 染色，光镜下观察。2 3 5 骨组织培养及I L 一6 测定无菌条件下取大鼠右侧股骨及胫骨，H a n k ，S 液反复冲洗，用骨钳将其分
13、离为1 m m 3 碎块，称量2 9 ，置于3 m l 含5 胎牛血清的R P M I1 6 4 0 培养液中，常规条件下( 3 7 。C 、1 0 0 温度、由2 5 C 0 2 培养箱中) 培养4 8 小时，吸取培养液，离，山后取上清液，R I A 法检测其I L 一6 的含量。3 统计学方法所有指标均以均数标准差( j s ) 表示，统计分析采用S P S S l 0 0 软件进行多均值单因方差分析，用L S D 法进行两两比较。结果1各组大鼠实验前、后体重及实验后子宫重量的变化实验前，各组大鼠体重差异无显著性。处死前，与假手术组相比，去卵巢组体重显著增加( P 0 0 1 ) ，而子宫
14、重量明显降低( P o 0 1 ) ；中药高、低剂量组体重明显低于去卵巢组( P 0 0 1 ) ，而子宫重量则明显高于去卵巢组( P 0 0 5 ) 。中药高、低剂量组之间及中药组和尼尔雌醇组之间差异无娩著山两I 兵利人学坝I ：学位论卫纽别动物数体重( g )实验前实验J 一了宫重量( g )假下术组l去卵巢组f2 1 23 8 1 86 22 9 88 9 2 37 5 + 0 6 6 01 2 +2 1 13 5 1 5 3 83 7 I2 5 2 29301 8 01 0 A_ 己尔蛐咐绁82 1 07 4 1 65 l2 9 65 3 2 00 2 +中药- 备剂量组8中药低剌量组
15、82 1 34 8 1 43 62 0 99 4 1 7 3 23 1 58 7 1 35 7 +3 1 81 7 95 7 +04 7 01 4 + A 04 0 0 1 6 + A0 3 4 O1 2 + + 钉：再红【i 去卯巢组比较，+ P 00 1 ，P 00 5再士u 。j 假手术组比较，P 00 l P 00 5大鼠实验前、后体重的变化图2大鼠子宫重量的变化2 各组大鼠骨密度比较实验完成后，与假手术组相比，去卵巢后各组大鼠骨密度均明显降低( 去卵巢组P 0 0 1 ，尼尔雌醇组和中药组P 0 0 5 ) 。而与去卵巢组相比，尼尔雌醇组和中药高、低剂量组骨密度均显著增高( P 0
16、0 5 ) ，中药组之间以及中药和尼尔雌醇组之间相比则差异无显著性。见表23m 清雌二醇含量的变化与假手术组比较，去卵巢后各组血清雌二醇含量均显著降低。与去卵巢组相比，尼尔雌醇组雌二醇含量无明显变化，中药高、低剂量组雌二醇含量均显著增加( P 0 0 5 ) ，与尼尔雌醇组相比差异有显著性。见表2表2 各组大鼠骨密度及血清雌二醇含量比较( 2 - s )纠I 别动物数假r 术n L8去| _ l | 1 粱组8尼尔雌睇组8中药- 曲剂量组【8中药低剂量纰8，L ：IJ 点卵巢组比较，+ P 00 1J 尼尔州1 酹组比较P 00 5骨密度( g c m 2 )螂二时( p m 1 )04 l 01 3 +6 66 3 7 7 8 *02 7 00 8 1 58 8 3 7 0 O3 4 土01 8 1 8
