《瘢痕中cyclin D1、p16、AR、ER的表达及相互关系研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《瘢痕中cyclin D1、p16、AR、ER的表达及相互关系研究（56页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、缩 略 词 表A n d r o g e n R e c e p t o r雄激素受体E s t r o g e n R e c e p t o r雌激素受体Re t i n o b l a s t o ma P r o t e i n视网膜母细胞瘤蛋白C y c l i n D e p e n d e n t K i n a s e周期蛋白依赖性激酶C D K A c t i v a t i n g K i n a s e周期蛋白依赖性激酶活化酶C y c l i n - k i n a s e I n h i b i t o r s周期蛋白激酶抑制剂S t e r o i d R e c
2、e p t o r C o a c t i v a t o r s类固醇受体辅活化因子P r o l i f e r a t i n g C e l l N u c l e a r A n t i g e n增殖细胞核抗原Ce l l S t i mu l a t e F a c t o r细胞刺激因子E s t r o g e n R e s p o n s e E l e m e n t雌激素反应元件尸LSAARERPRb妙呼CKI朴朴csFERE华中科技人学I , il 济医学院硕_ 1 A J f 究生毕业论文瘫痕中c y c l i n D l 、p 1 6 , E R , A R的
3、表达及其相互关系研究华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科研究生:刘嘉锋导师:张一鸣教授摘要目 的 了 解 细 胞 周 期蛋自D l , p 1 6 , A R , E R 在 瘫痕中 的 表 达 及它们之间的相互关系， 探讨它们在瘫痕形成过程中的作用。 方法:对8 例普通瘫痕、1 1 例增生性瘫痕、1 1 例瘫痕疙瘩及8 例正常皮肤组织进行免疫组化( S P法) 染色， 观察 c y c l i n D 1 , p 1 6 , A R , E R 在 不 同 组 织 中 的 表 达 。 份 果 :正 常 皮 肤 及 普 通 痕 成 纤 维 细 胞 中 c y c l i n D 1 ,
4、p 1 6 , A R , E R 均为阴 性: 增生性液痕、 瘫痕疙瘩成纤维细胞中 c y c l i n D 1 , p 1 6 , A R与正常皮肤相比均有显著性差异( P 6 0 % 为 “ +， 。按照染色强度将阳性反应分为弱阳性 ( 淡黄色) 、阳性 ( 黄色)和强阳性 ( 棕黄色) 。四、统计学处理采用x zX检验( p 0 . 0 5 ) 。具体结果见表2 0华中科技人 学同 济疾学院硕_ 卜 研究生毕业论文表2 . p 1 6 在正常皮肤、 成熟瘫痕、 增生性瘫痕及瘫痕疙瘩中的表达组织类别瘾1 良 疙瘩增生瘩痕成熟橄痕正常皮肤总p 1 6表 达 的 例 数x P例数 一千+
5、干1 1 6 2 2阳性率4 5 . 5 % 1 ,5 5 . 5 % 04 .935 16.37790 . 0 2 6 30 . 0 1 1 61 . 08 8 0 0 0 0 与正常皮肤对照组相比* P 需要在量上超过。 y c l i n D 1 ， 如果c y c l i n D 1 过量，p 1 6 则无法与之竞争C D K ， 使得c y c l i n D l - C D K复合物的量大大增加， p R b 磷酸化更为加剧， 细胞获得更大的生长 优 势 t，幻 。本实验结果提示:虽然 p 1 6在增生性瘫痕和瘫痕疙瘩中无明显差异，但是因为 c y c l i n D l 在瘫痕疙
6、瘩中的表达要明显高于增生性瘫痕，所以在瘫痕疙瘩里可能存在 c y c l i n D 1的过量， p 1 6相对不足，造成细胞生长的持续状态， 类似于肿瘤细胞的生长情况:而在增生性瘫痕中，因为 c y c l i n D l的量要明显少于瘫痕疙瘩， 而p 1 6 的量与在瘫痕疙瘩中相近， C y c l i n D 1 和p 1 6 可能处于一种相对的平衡或者p 1 6 相对过量的状态， 所以虽然早期c y c l i nD 1 的增加促进细胞的生长， 但是随 着细胞周期的进展， p 1 6的作用逐渐明显，当二者处于平衡状态时，细胞的生长相对稳定，随后如果p 1 6 量超过c y c l i
7、n D 1 ， 则细胞的生长可能出 现退化现象.这可解释临床上瘫痕疙瘩具有持续而强大增生力，且可向周边正常皮肤扩张性生长:而增生性瘫痕的生长则相对稳定，甚至有自限性倾向的现象。华中科技大学同济F学院硕_ 1 刃下 究生毕业论文但这两种病理性瘫痕之间为何存在明显的差异目前尚未明了，可能与其中的成纤维细胞对调节c y c l i n D 1 和p 1 6 基因表达的生长因子的敏感性不同有关，如:细胞膜上的T G F - 0 受体及A R等的含量及性质差异有关，尚有待进一步的研究。二、 A R , E R 在病理性疲痕中的表达及其意义性激素为性腺、肾上腺皮质等分泌的激素，包括:雄激素， 雌激素和孕激
8、素等，基木结构是Ri体核，所以都属于川体类激素。性激素与病理性瘫痕之间的关系的研究目前主要侧重于性激素在瘫痕形成的机制方面，而且主要集中在雄激素和雌激素上。对于孕激素在瘫痕形成机制方面的研究较少。(-)、雄激素受体在病理性瘫痕中的表达及其意义雄激素大部分是由辜丸间质细胞产生的，主要是辜酮 ( T )及其代谢产物双氢辜酮 ( D T H )， 后者具有更高的代谢活性，两者在胞浆内均与其相应的受体结合而成复合物后，跨膜转运达细胞核内， 激活受其诱导的基因，从而促进相关蛋白 的 产生. F o r d” 发现瘫痕疙瘩中雄激素处于高水平，而正常瘫痕中的雄激素水平是瘫痕疙瘩中的 1 / 1 0 ，邻近皮
9、肤亦表现为雄激素低水平，所以他提出雄激素在瘫痕疙瘩形成过程中起着主要的或至少是辅助性的作用。 H a n n e s p M 对比了 瘫痕 疙瘩活动部 位与非活动 部位 及邻近正常皮肤中雄激素受体( A R ) D N A 含量后得出: 活性部位与非活性部位、活性部位和正常组织之间均有显著性差异，所以他认为抗雄激治疗可能也是治疗瘫痕疙瘩的有效方法之一雄激素在瘫痕疙瘩发生中的机制尚缺乏有效的证据。H a n n e s p l“ ) 认为抗雄激素物质可以 竞争性地抑制雄激素受体， 从而导致瘫痕疙瘩中I 型前胶原m R N A 水平的下降， 这种作用和糖皮质华中科技人学同济医学院硕上研究生毕业论文
10、激素对瘫痕疙瘩的作用机制类似。 K a r e n . E 0 “ 通过体外对前列腺癌细胞的生长周期的研究， 认为雄激素缺乏可导致在细胞在G 1 前期的阻滞， 这种作用卞要是由于细胞周期依赖激酶 ( C D K )的活性下降及p R b 的去磷酸化过度引起的，而C D K 活性部位是受G , 期特异性细胞周期蛋白 ( 如:c y c l i n D 1 ) 及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 ( C D K I s ) 的控制的， 故我们推测雄激素在对疲痕疙瘩的作用中可能也是通过与细胞周期蛋白相互作用用的。本实验结果证实了我们的推测， A R 在病理性瘫痕中明显升高，这与以 往的研究结果相符(7
11、) 。 此外A R 与。 y c l i n D 1 之间具有明显的正相关，说明在病理性瘫痕的发生中可能也同样存在着 A R对C y c l i n D l的调节， A R 通过与其相应的 配体相结合， 促进c y c l i n D I的过度表达，后者可加速细胞周期的进程，促进病理性疲痕的形成。推测雄激素在瘫痕的发生过程中起一定的作用，抗雄激素治疗可能是治疗病理性瘫痕的有效方法之一。口、雌激素受体在病理性疲痕中的表达及其意义雌激素是由卵巢分泌的，主要成分是雌二醇及其代谢产物.它们均为脂溶性激素，可以透过细胞膜，经细胞质，再通过核膜而进入核内，以核蛋白作为受体，直接在染色质上改变受体的构像而发
12、挥作用.有报道称在v a 痕疙瘩中存在大量的雌激素及促性腺物质， 但缺乏文献记载o ,. 另有学者发现瘫痕疙瘩患者在怀孕时出 现瘫痕的 增生，而在分娩后症状很快缓解，所以提出由胎盘产生的雌激素可能 是 瘫痕 疙瘩扩散 性生 长的因 素 之一【“ “ o F o s t e r “ 认为 雌 激素与其受体结合可激活细胞周期蛋白D 1， 后者与C D K 结合可促进p R b的磷酸化，使得E 2 F 释放，从而加快细胞从G ， 期进入S 期，所以华中科技大学同济医学院硕 卜 研究生毕业论文认为如果在瘫痕疙瘩中存在足够的雌激素受体，则雌激素在瘫痕疙瘩的发生中可能起到一定的作用。然而在病理性瘫痕中是否
13、存在E R 一直缺乏直接的证据。 本实验通过免疫组化的方法证实:病理性瘫痕中E R水平与正常皮肤相比并无明显差异， 所以虽然在病理性瘫痕中可能存在大量的雌激素及促性腺物质，但是由于无 E R的存在，它们的作用难以发挥，对瘫痕的发生及进展作用非常有限。三、细胞周期蛋白D 1 与A R . E R 的相互关系H, C y c l i n D l 与A R 的关系人体中的许多细胞都依赖性激素生长的， 尤其是生殖系统的发生和发展均不同程度上受控于激素的调节。众多学者已 经证实在前列腺中存在大量的雄激素及其受体9 T ， 雄激素与其受体结合后，以其D N A结合区与核内的D N A结合， 调节激素反应元
14、件， 激活雄激素受体C 端的A F - 2 反式激活功能区， 调节与c y c l i n D l 有关的基因的表达， c y c l i n D 1的 含量升高D n , a n . “ ,4 0 1 ，后者可以 通过与C D K 4 / 6 结合形成复合物， 加速细胞由G ， 期进入5 期D a ， 以 发挥其促进生长的作用“ .， 。另 有证 据表明c y c l i n D 1 对A R 具有的 转录具 有抑 制效 应圈，它是一种A R 的N 端阴性调节者， 它与A R 的N 端结合且抑制其转录， 这种抑制效应几乎被认为是抑制A F - 1 区的 功能， 在p R b 非活化 ( 磷酸
15、化)后， 雄激素诱导的 c y c l i n D 1的表达主要是反向调节A R 的活性， 从而限 制进一步的有丝分裂活性及细胞周期进程(qn 据此推测在雄激素依赖性的前列腺细胞中可能存在一个负的反馈调节圈，其中: 配体依赖性的雄激素受体的激活刺激c y c l i n D 1 的表达， 其升高的 c y c l i n D l 将促进细胞进程， 但是如果 c y c l i n D 1华中科技大学同济医学院硕 卜 研究生毕业论文过高， 则可以通过负反馈调节而减弱雄激素受体的转录活性， 这样又可进一步的调节细胞周期进程的比例，防止细胞过度增生。 所以c y c l i n D 1 具有促进有丝
16、分裂功能( C D K 4 依赖性) 和一个抗有丝分裂功能( 依赖于对A F - 1 的调节)， 这可最终控制雄激素依赖性细胞增生的比例。在F o r d 0 及H a n n e s p M 己 证 实的 瘫 痕 疙 瘩 里 存 在 大 量的 雄 激素及其受体的基础上， 本实验还证实: 不仅病理性瘫痕中存在大量的。 y c l i n D l ，而且在瘫痕疙瘩中9 例A R 阳性的 标本c y c l i n D l全部呈阳性表达， 其余2 例A R 阴性标本中仅1 例阳性表达; 而在增生性瘫痕中5 例A R 阳性标本中有4 例出现c y c l i n D 1 阳性表达， 6例阴性表达标本中有5 例呈阴性表达，c y c l i n D 1 与A R 之间存在比较明显的正相关。这提示在病理性瘫痕中雄激素与其受体结合后，可促进 c y c l i n D l的表达升高，后者的升高一方面可与 C D K相结合，发挥它的促细胞周期进展，引起瘫痕组织的增生
