食用菌菌种制备技术

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1、食用菌菌种制备技术食用菌菌种制备技术菌种：原意是指孢子(相当于植物的种子) ，但在实际生产中，常将经过人工培养的纯菌丝体连同培养基质一同叫做菌种。菌种分为母种（一级种） 、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。母种（一级）：将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁殖而成。可以繁殖原种，也适宜菌种保藏。原种（二级）：母种菌丝在固体培养基上繁殖而成。这一过程增强菌丝对培养环境的适应性，又起到扩繁的作用。原种可以直接出菇。栽培种（三级）：由原种扩繁而成。主要是为了扩繁，为生产提供足够的菌种。菌种制备：也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量 和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵

2、罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。 种子制备包括孢子制备和菌丝体制备（见图）。其中(1)(4)为孢子制备过程。保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，无菌操作挑取少 许，接入琼脂斜面培养基上，在 25（或较高温度）下培养 57 天(或较长时间)。所得 孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子，对于霉菌类孢子制备，多数 采用大米、小米之类的天然培养基。将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体 培养基上，于 2528培养 14 天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至 10%以 下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢 子的培养基大多是采用麸

3、皮或豌豆浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接 入扩大的扁瓶孢子培养基中，于 2837培养 514 天。所获得的大量孢子可直接作为 种子罐 (6)的种子。 如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶（则可采用摇瓶（5）液）液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发 芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖） 和氮源（如玉米浆等），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应是生命力旺盛、 染色深

4、、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在 10%20%。一、母种的制备 用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种（保留种），并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。 1培养基配方 配方一 马铃薯培养基：马铃薯 200 克、葡萄糖 20 克、琼脂 20 克、水 1000 毫升、PH 值自然 ；配方二 综合马铃薯培养基：马铃薯 200 克、葡萄糖 20 克、磷酸氢二钾 2 克、硫酸镁 0.5克、维生素 B1 10 毫克、琼脂 20 克、水 1000 毫升、PH 值自然 ；配方三 合成培养基：马铃薯 20 克、葡萄糖 20 克、磷酸二氢钾 2 克、蛋白胨 10 克、牛肉膏 5 克、酵母膏 5

5、克、硫酸镁 0.8 克、水 1000 毫升、PH 值自然；2培养基制作方法 先将马铃薯洗净去皮切成薄片，称取 200 克，加水 1000 毫升，煮沸 15-20 分钟，用4 层纱布过滤，取其滤液并补足水至 1000 毫升，加入琼脂 20 克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。 培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基 40凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一小段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，应注意不使培养基黏附在试管口上，以免杂菌感染，每支试管装入量为试管长度 1/4。装好后塞上棉塞，每 10 支试管扎一捆，棉

6、塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。 3灭菌 将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在 1.1kg/cm2压力下(锅入温度达121)灭菌 30 分钟，使微生物包括芽孢全部杀死。待压力降到 0 度时，慢慢放出锅内气体，试管取出后趁热将试管口一端垫高，斜靠在桌上的小木棒上，使管内培养液斜面上长度达 2/33/5，试管上面覆盖毛巾，冷却后即成斜面固体培养基。4接种、培养 斜面冷却后通过无菌操作方法将菌种接入，置 28、3 天后将温度降至 24继续培养，7-15 天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。为检验培养基灭菌是否彻底，可在常温下放置 48 小时，未发现有杂菌产生，即可接种、培养，

7、长满菌丝后即可转管或转接原种。二、原种、制备 母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。 1培养基配方 配方一 木屑麸皮培养基：阔树木 78%、麸皮 20%、糖 1%、石膏粉 1%、水 65%； 配方二 棉籽壳木屑培养基：棉籽壳 80%、木屑 15%、 糖 1%、麸皮 5%、过磷酸钙3%、石膏粉 1%； 2拌料与装袋 选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水后，按上述干料量加入水，比例为 1：1.3 拌匀，培养料含水量 60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷 30 分钟后，装

8、瓶(袋)。用机械或人工装袋稍加压实，在袋口外套入塑料环，形成象瓶子一样，然后在袋口内塞松紧适宜棉塞、或用牛皮纸包扎好。 3灭菌 原种灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌原理：在高温(121以上)、高压(1.1kg/cm2)条件下灭菌 23 小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在90103之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下维持足够时间达到灭菌目的，通常在100下维持 1012 小时。 4接种与培养 不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用 0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶(袋)放在箱内，用烟雾剂密闭薰蒸消毒。接种室消毒，一间房需点燃 3 盒 50 克规格烟雾剂；接种箱消毒每次仅用重量为 4 克，一支母种试管可接 4-6 瓶(袋)原种。将接种后的菌种瓶(袋)放入发菌室培养。培养室温度 2226，相对湿度 70%以下，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶(袋)需 30-40 天。 三、栽培种制备 原种进一步扩繁，即为栽培种。栽培种一般采用塑料袋制备，用无棉盖体封口。一瓶原种可接 50-60 瓶(袋)栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种相同。