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1、 分类号: Q78 编号: 00911045 本科生基因工程实验论文本科生基因工程实验论文指指导导教教师师 ： 学学 生：生： 专专 业业： 年年 级级： 2012 年 9 月 5 日绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达大肠杆菌中的表达目目 录录摘要绪论材料与方法.1 材料.1.1 试剂及仪器.1.2 菌种.1.3 质粒.1.4 常用溶液的配制.2 方法.2.1 引物的设计.2.2 绿色荧光蛋白基因的 PCR 扩增.2.3 DH5a 和 BL21(DE3)感受态的制备.2.4 pMD19-T-EGFP 的构建及转化和鉴定.2.5 pGEX-4T1
2、 及 pMD19-T-EGFP 的酶切与回收.2.6 pGEX-4T1-EGFP 的构建及转化和检测.2.7 pGEX-4T1-EGFP 的诱导表达.2.8 GFP 表达的 SDS-PAGE 检测.结果.1. GFP 基因的 PCR 扩增.2. pMD19-T-EGFP 的构建与鉴定.3. pGEX-4T1 及 pMD19-T-EGFP 的酶切和回收.4. pGEX-4T1-EGFP 的构建与检测.5. pGEX-4T1-EGFP 的诱导表达与 SDS-PAGE 检测.讨论.参考文献.致谢.感想.1绿色荧光蛋白基因绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达表达载体的构建及在大肠杆菌中的
3、表达摘要：绿色荧光蛋白（摘要：绿色荧光蛋白（GFPGFP）是一种生物发光蛋白。）是一种生物发光蛋白。GFPGFP 作为基因表达标记作为基因表达标记物或融合蛋白标记在动物、植物、微生物的研究中广泛应用。本实验将物或融合蛋白标记在动物、植物、微生物的研究中广泛应用。本实验将GFPGFP 基因与基因与 pGEX-4T-1pGEX-4T-1 载体连接在大肠杆菌中表达。根据根据载体连接在大肠杆菌中表达。根据根据 GFPGFP 基因与基因与质粒载体质粒载体 pGEX-4T-1pGEX-4T-1 的序列，设计一对引物，以的序列，设计一对引物，以 PCRPCR 扩增扩增 GFPGFP 序列，克隆序列，克隆到表
4、达载体到表达载体 pGEX-4T-1pGEX-4T-1 的的 EcoREcoR和和 BamHBamH酶切位点，与载体连接。重组酶切位点，与载体连接。重组质粒质粒转化大肠杆菌转化大肠杆菌 BL21(DE3)BL21(DE3)，菌落籽，菌落籽 365nm365nm 紫外光下呈现明亮的绿色荧光。紫外光下呈现明亮的绿色荧光。关键词：绿色荧光蛋白，基因表达，载体，大肠杆菌关键词：绿色荧光蛋白，基因表达，载体，大肠杆菌ConstructingConstructing ExpressionExpression VectorVector andand ExpressingExpressing GFPGFP i
5、nin E.coliE.coli ABSTRACTABSTRACT：TheThe greengreen fluorescentfluorescent protein(GFP)protein(GFP) ofof jellyfishjellyfish VictoriaVictoria isis anan unusualunusual proteinprotein withwith strongstrong visiblevisible fluorescencefluorescence bothboth inin vivovivo andand vitro.invitro.in thisthis s
6、tudy,aboutstudy,about GFPGFP genegene waswas amplifiedamplified byby PCRPCR andand waswas insertedinserted intointo pGEX-4T-1pGEX-4T-1 vector.vector. TheThe recombinantrecombinant plasmidplasmid waswas transferredtransferred intointo E.coliE.coli BL(DE3)BL(DE3) andand expressedexpressed inin E.coliE.coli BL(DE3).TheBL(DE3).The fusedfused proteinprotein GFPGFP couldcould bebe obtainedobtained fromfrom thethe supernatants.supernatants.KEY WORDS: GFPGFP, , genegene expression,expression, vectorvector，E.E. colicoli内蒙古大学生命科学学院生物系本科生基因工程实验论文2
