《山羊痘病毒orf31、orf117、orf72基因的原核表达及磷酸酶活力分析课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《山羊痘病毒orf31、orf117、orf72基因的原核表达及磷酸酶活力分析课件（49页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 A b s t r a c tF o rt h ep u r p o s eo fr e s e a r c h i n gt h ef u n c t i o na n di t sg e n e i c i t yo fg o a t p o xv i r u s ，t h r e eg e n e sf o rp r o t e i np h o s p h a t a s e ( O R F 7 2 ) w e r ec l o n e di n t op E T - 3 0 a ( + ) v e c t o ra n de x p r e s s e di nE c o l ii
2、 n d u c e dw i t hI P T GS D S - P A G Ea n a l y s i sr e s u l t ss h o w e dt h a tt h r e er e c o m b i n a n tp r o t e i n sw e r ee f f e c t i v e l ye x p r e s s e da n dm a i n l ye x i s t e di nf o r mo fi n c l u s i o nb o d y O R F 7 2p r o t e i ns l i g h t l ye x i s t e di nf o
3、 r mo fs o l u b l ep r o t e i n I tw a sd e m o n s t r a t e dt h a tO R F 7 2p r o t e i nc o u l db er e c o g n i z e db yC a P V - s p e c i f i ca t t e n u a t e dv a c c i n ei m m u n es e r u mi nW e s t e r nb l o t t i n gt e s t T h eO R F 7 2p r o t e i ns h o w e di t so p t i m u m
4、p Ho f6 0w i t hp - n i t m p h e n y l p h o s p h a t e ( p N e e ) a ss u b s t r a t er e s p e c t i v e l y I t ss h o w e dt h eo p t i m a lc a t a l y t i cr e a c t i o nt e m p e r a t u r eo f 4 0 C T h ea c t i v i t i e so f t h eO R F 7 2p r o t e i nw e r ei n h i b i t e db ym e t a
5、 li o n sA r 、H 9 2 、p b 2 +m e t a li o n s ，u n i n h i b i t e db yC d 2 + 、c r 3 + h e a v ym e t a li o n s ，l o wi n h i b i t e db yM 9 2 + a n dz n 2 + m e t a li o n s T h i ss t u d yp r o v i d e st h e o r yb a s i sf o rg o a t p o xv i r u sp r o t e i nf u r i c t i o ni d e n t i f i
6、 c a t i o n ，d i a g n o s i sa n t i g e ns c r e e n i n g M e a n w h i l ed e t e r m i n eO R F 7 2f o rp r o t e i np h o s p h a t a s eW a st h ef i r s tt i m eb o t ha th o m ea n da b r o a d ，a n a l y s i so fe n z y m ea c t i v i t y , p r o v i d et h eb a s i sf o rs u b s e q u e
7、n tp r o t e i nf u n c t i o nr e s e a r c h K e yw o r d s ：G o a tp o x v i r u s ，O R F 3I O R F l1 7 1 0 R F 7 2p r o t e i n ，p r o k a r y o t i ce x p r e s s i o n , e n z y m a t i ca n a l y s i sI l目录第一章文献综述11 1 病原学 1 2 1 病毒的形态 1 2 2 理化性质 1 2 羊痘病毒基因组学 1 3 病毒的致病机理 1 4 流行病学 1 4 1 传染源与易感动物
8、 1 4 2 传播途径 1 4 3 地理分布 1 4 4 分子流行病学 1 5 临床症状 1 6 诊断方法 1 6 1 临床诊断 1 6 2 实验室诊断 1 7 免疫与疫苗 1 8 山羊痘病毒蛋白研究意义第二章山羊痘病毒O R F 3 I O R F l l 7 0 R F 7 2 基因的克隆与分析7 2 1 材料7 2 1 1 细胞系、菌株和载体7 2 1 2 主要试剂7 2 1 3 培养基与溶液7 2 2 实验方法7 2 2 1 病毒的分离培养7 2 2 2 病毒D N A 的提取8 2 2 3 目的基因的克隆8 2 2 4 目的基因的序列分析1 l 2 3 结果1 1 2 3 1 目的基
9、因的P C R 扩增1 l 2 3 2 重组质粒的鉴定l l 2 3 3 基因的生物信息学分析1 2 2 3 4 理化性质参数1 2 2 3 5 跨膜结构的预测分析1 4 2 3 6 信号肽序列的预测分析_ 1 4 2 3 7 二级结构的预测分析1 4 2 4 讨j 沧。1 5第三章山羊痘病毒O R F 3 I O R F l1 7 0 R F 7 2 蛋白的表达及纯化3 1 材料 3 1 2 载体与菌种n Illl23333344555666661 L1 ，3 1 3 主要试剂1 6 3 1 4 培养基与溶液1 6 3 2 方法1 7 3 2 1 目的基因的扩增和回收1 7 3 2 2 目的
10、基因原核表达质粒的构建1 8 3 2 3 目的基因的诱导表达及条件优化2 0 3 2 4 重组蛋白表达产物的纯化2 0 3 2 5 纯化的p E 3 0 T 一3 1 o E T 3 0 一i 1 7 p E T 3 0 7 2 重组蛋白分析2 l 3 3 结果2 l3 3 1 目的基因的P C R 扩增2 1 3 3 2 重组原核表达载体的构建及鉴定一2 2 3 3 3 目的蛋白的诱导表达及其表达条件优化2 2 3 3 3 目的蛋白的纯化和定量2 7 3 3 4 目的蛋白的w e s t e r n b l o t t i n g 检测2 9 3 4 寸 仑2 9第四章山羊痘病毒O R F
11、7 2 蛋白的酶活力分析一3 1 4 1 材料3 1 4 1 1 材料和试剂3 l 4 1 2 仪器3 1 4 1 3 溶液3 l 4 2 方：法3 24 2 1O R E 7 2 蛋白的磷酸酶活力鉴定3 2 4 2 2 酶的最适p H 值3 2 4 2 3 酶的最适温度3 2 4 2 4 金属离子对酶活力的影响3 2 4 2 5 化学修饰剂对酶活力的影响3 2 4 2 6 磷酸酶抑制剂对酶活力的影响3 2 4 3 结果分析3 34 3 1O R F 7 2 蛋白的最适p H 值3 34 3 2O R F 7 2 蛋白的最适温度3 3 4 3 3 不同金属离子对O R F 7 2 蛋白酶活性的影响3 5 4 3 4 化学修饰剂对酶活力的影响3 8 4 3 5 磷酸酶抑制剂对酶活力的影响3 9 4 4 讨论3 9第五章全文结论。4 0参考文献4 1 致谢4 6作者简介4 7宁夏大学硕士学位论文第一章文献综述第一章文献综述羊痘包括山羊痘和绵羊痘，是山羊和绵羊的一种急性、热性、高度传染性疾
