《艾塞娜肽抗高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的机制研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《艾塞娜肽抗高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的机制研究（40页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号：U D C ：R 5 4 I 1密级重庆医科大学硕士学位论文论文题目艾塞那肽抗高糖诱导H 9 c 2 心肌细胞凋亡的机制研究作者姓名李礼指导教师姓名( 职称、单位名称)罗素新教授重庆医科大学附属第一医院心血管内科申清学位级别硕士学张专业名称内科学( 心血管病学)论文答辩年月2 0 1 3 年4 月重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所
2、做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：矍五，b日期：加1 与6 - 弓学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，并编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。保密论文在解密后适厨本授权书。论文作者签
3、名：李j ，飞指导教师签名：辫篆1曰期：铀h6 目录英汉缩略语名词对照一1中文摘要2英文摘要3正文：艾塞那肽抗高糖诱导H 9 c 2 心肌细胞凋亡的机制研究5前言5刖鬲51 材料与方法72 结果1 23 讨论1 94 全文总结2l参考文献2 2文献综述2 4致谢3 6攻读学位期间的研究成果3 7英文缩写C a s p a s eC C K 8D M E Me N O SE D T AE XE C LG L P 1英汉缩略语名词对照英文全称中文全称c y s t e i n y la s p a r t a t e - s p e c i f i cp r o t e a s e半胱氨酸天冬氨酸
4、酶c e l lC o u n t i n gK i t - 8细胞计数试剂盒d u l b e c c o Sm o d i f i e d ee a g l e Sm e d i u mD M E M 培养液e n d o t h e l i a ln i t r i co x i d es y n t h a s e内皮源性一氧化氮合酶e t h y 7 l e n ed i a m i n et e t r a a c e t i ca c i d乙二胺四乙酸e x e n a t i d e艾塞那肽e n h a n c e dc h e m i l u m i n e s c e
5、n c e化学发光法g l u c a g o n l i k ep e p t i d e - 1胰高血糖素样肽一lG A P D HG A P D Ha n t i b o d yG A P D H 抗体KM A P KM i nM gN F K Bp - J N KP B SP M S FR O SS D SS P S ST B SW bc - J u nN t e r m i n a Ik i n a s eC J u n 氨基末端激酶m i t o g e n a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e s促分裂素原活化蛋白激酶m i n u
6、t em i l l i g r a mn u c l e a rf a c t o r K Bp h o s p h o J N Kp h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o np h e n y l m e t h a n e s u l f o n y lf l u o r i d er e a c t i v eo x y g e ns p e c i e ss o d i u md o d e c y ls u l f a t es t a t i s t i e a lP a c k a g ef o rs o c i a ls e i e
7、n e et r i e t h a n o l a r n i n e b u f f e r e ds a l i n ew e s t e r n b l o t分钟毫克核因子r d 3磷酸化J N K磷酸盐缓冲溶液苯甲基磺酰氟活性氧十二烷基硫酸钠社会科学统计程序包i 乙醇胺缓冲生理盐水免疫蛋白质印迹重庆医科大学硕士研究生学t 美论文艾塞那肽抗高糖诱导H 9 c 2 心肌细胞凋亡的机制研究摘要目的：探讨胰高血糖素样肽一l ( G l u c a g o n l i k ep e p t i d e 1 ，G L P 1 )类似物艾塞那肽( E x e n a t i d e ，E X )
8、 对高糖环境诱导的H 9 c 2 心肌细胞凋亡及J N K 信号转导通路的影响。方法：传代培养H 9 c 2 心肌细胞，利用高糖诱导建立心肌细胞凋亡模型。采用C C K - 8 法测定细胞存活率，A 1 1 1 1 e x i n V - F r r C P I 双染结合流式细胞仪检测细胞凋亡率，罗丹明1 2 3 ( R h o d a m i n e l 2 3 ，R h l 2 3 ) 荧光探针标记线粒体，检测荧光强度以反映心肌细胞线粒体膜电位( m i t o c h o n d r i a lm e m b r a n ep o t e n t i a l ，A 。P m ) 变化，W
9、 e s t e r n - b l o t 法检测磷酸化J N K 和J N K 总量的蛋白表达水平。结果：与正常糖浓度组相比较，高糖模型组H 9 c 2 心肌细胞存活率、线粒体膜电位降低，细胞凋亡率、磷酸化J N K l 水平明显增高( 尸 0 0 5 ) ；高糖状态下，I n m o l L 的E X 干预2 4 h 、4 8 h ，分别与相应的2 4 h 、4 8 hH G组相比较O D 值无差异( 尸 0 0 5 ) ，而干预7 2 h 后其O D 值较相应的7 2 hH G 组增加( 尸0 0 5 ) 。高糖状态下，1 0 n m o l L 、1 0 0 n m o l L 、
10、0 0 0 n m o l L 三种浓度的E X 干预4 8 h时两两比较其O D 值无明显差异( 尸 0 0 5 ) 。表1 H 9 c 2 心肌细胞不同处理组分别干预2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后O D 值比较( i J )T a b l C o m p a r i s o no ft h eO Dv a l u e sb e t w e e nd i f f e r e n tt r e a t m e n tg r o u p sa f t e rH 9 c 2c a r d i o m y o c y t er e s p e c t i v e l yi n t e r
11、 v e n t i o n s2 4 h , 4 8 h ，7 2 h ( Z S )AP 0 0 5 ) 。表2 各实验组! t 9 e 2 心肌细胞凋亡的定量分析( 万J )T a b ZC o m p a r i s o no ft h e1 1 9 c 2c a r d i o m y o c y t ea p o p t o s i sr a t e sb e t w e e ng 咖喊i j )组别N细胞凋亡率( )N GN ( 升置XH GH ( H - E X33 7 5 0 1 633 3 8 0 1 24 6 8 6 1 0 3 2 1 9 0 1 2 8 S33 7 9
12、 02 7A p 0 0 5 ) 。H G 组与N G 组相比，H 9 c 2 心肌细胞p - J N K l 表达显著增加( 尸 0 0 5 ) 。7扫Is皇3I备ou20葛口表4 各实验组H 9 c 2 心肌细胞p - J N K l J N K I 的定量分析( Z S )1 I b 4 C o m p a r i s o no ft h eH 9 c 2c a r d i o m y o e y t ep - J N K l J N K Ib e t w e e ng r o u p s ( Z S )P 锄0 l ：H G V SN G ；H G + E XV SH GN GN G
13、+ E XH GH G + E XS p J N l 【1 藏辩爨；豢豢豢鞠鳓鼯4 6 k d J N l 【1 一够_ 麟_图4 - 1 各实验组H 9 c 2 心肌细胞p - J N K l 和J N K l 的表达F i 9 4 - 1 C o m p a r i s o no ft h ee x p r e s s i o no fH 9 c 2c a r d i o m y o c y t ep - J N K la n dJ N K lb e t w e e ng r o u p s10 80 60 40 20 N GN G + E XH GH G + E XS图4 - 2 实验组
14、H 9 c 2 心肌细胞p - J N K I J N K l 的表达F i 9 4 - 2 C o m p a r i s o no ft h ee x p r e s s i o no f H 9 c 2c a r d i o m y o c y t ep - J N K I I J N K Ib e t w e e ng r o u p sP 0 0 1 ：H GV SN G ：H G + E XV SH G1 8_)IZr，叫)IZ7厶重庆医科大学硕士研究生学位论文3 讨论高血糖是l 型和2 型糖尿病的主要特征，能够引起氧化应激致糖尿病患者出现包括心血管系统在内的多种器官损害。高血糖环
15、境可以诱导心肌细胞凋亡，影响心肌功能，导致糖尿病心肌病【1 4 1 。G L P l 在人体多系统( 心血管系统、消化系统、中枢神经系统等) 中发挥着多效性，心血管疾病是导致糖尿病患者死亡的主要原因，G L P l 对心血管的保护作用已日益受到关注。虽然关了二G L P 1 保护体内或体外心肌细胞的作用已多有报道，但主要集中于缺血再灌注模型，对于高糖诱导的受损心肌细胞的保护作用却鲜有报道。H 9 c 2 细胞源于胚胎期大鼠心脏，保持很多心肌细胞的特征，可用于高糖的体外作用研究。参考多项l 临床研究及相关报道，分别采用5 m m o l L 和3 3 m m o l f L 糖浓度作为正常对照组和高糖诱导H 9 c 2 心肌细胞凋亡组【1 5 I 。在本实验中首先选取0 1 n m o l L 、l n m o l l
