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1、目目 录录一、目的：.1二、适用范围：.1三、作业流程：.1四、作业内容：.2（一） 、效价的测定：.31、原理：.32、方法：.4（二） 、总糖的测定：.41、原理：.42、测定：.4（三） 、还原糖的测定：.51、原理：.52、测定：.5（四） 、氨基氮的测定：.71、原理：.72、测定：.7五、注意事项：.8六、加强责任制及生产安全教育：.8安全生产管理制度.16职工安全生产公约.18第 1 页 共 18 页化验工段作业指导书化验工段作业指导书一、目的：一、目的：为了规范化验人员的操作技能，保证化验人员的人身安全，要做到操作必须规范，数据必须真实、准确。二、适用范围：二、适用范围：适用于
2、化验工段全体员工。三、三、 作业流程：作业流程：1. 按规定准时到岗，换好工作服，做好交接班准备，进行交接班。2. 交接班时，当场将工作交接清楚，将存在的问题找出来，看仪器是否正确（分光光度计、干燥箱、恒温水浴锅、电炉等） ，药品试剂是否够用，常用的玻璃仪器是否放入干燥箱，卫生是否清洁，双方交接无误后接班人签名，交接人方可离岗，接班人正常工作。3. 根据当日无菌室发的生产调度单和补料单做好本班工作计划。第 2 页 共 18 页4. 根据化验原始记录，看看各罐生长情况，效价长势情况，总糖、氨基氮消耗情况，如果结果偏差大的重新取样复样，认真寻找原因，将结果填入原始记录，并注明复样，如有特殊情况汇报
3、工作。5. 按规定时间取样，做样前对所做样的仪器和玻璃仪器做好充分的准备，放在工作台上，做效价和糖所用的试剂临用时混合。6. 取样后，进行各项含量分析，完成后将结果随时填入原始记录，如有填错应及时改正，并签名，原始记录填写完整后，认真核对确定无误后签字发出报告单。7. 随时清理和洗涤玻璃仪器和工作台，及时处理废料残液，始终保持现场的整洁有序，玻璃仪器轻拿轻放。8. 如有化验，结果偏差大，该复样的重新取样、复样。9. 剩余时间，折叠滤液用的滤纸。10. 清理卫生，做好交班准备。四、作业内容：四、作业内容：发酵过程的中间分析是生产控制的眼睛，它显示了发酵过程中微生物的主要代谢变化，供操作人员做好分
4、析控制发酵工艺并处理异常发酵的重要依据。第 3 页 共 18 页化验项目化验项目（每 8h 取样一次）项目罐类PH（无菌）杂菌（无菌）菌浓（无菌）总糖（化验）还原糖（化验）氨基氮（化验）效价（化验）消后接后种子罐30h移前消后接后发酵罐40h放罐糖罐第 4 页 共 18 页（一） 、效价的测定：1、原理：在培养过程中，产生菌体的生物合成能力和抗生素的积累程度，通常都以抗生素的效价单位表示。发酵过程中，定期测定发酵效价单位，可使我们及时了解发酵过程的趋势，帮助我们选择最合适的发酵条件，并控制最合适的发酵周期。效价单位测定一般采用化学测定和生物测定法。现我们采用化学测定法，方法简速。2、方法：（1
5、） 、准确吸取 2.5ml 发酵液于 25ml 的具塞比色管中，加无水乙醇将发酵液全部冲下（起步效价做 3 倍，加无水乙醇 5ml；效价超过 5500 改做 4 倍，加 7.5ml 无水乙醇） ，充分摇匀后放入 37恒温水浴中 30min，取出后摇匀过滤。（2） 、精确吸取 1ml 于盛有 10ml 硼缓溶液和 8ml 正丁醇溶液的25ml 的比色管中，充分摇匀再次放入 37恒温水浴中 20min。（3） 、吸取上清液 4ml，加 4ml 无水乙醇摇匀，在波长 408nm 的722 分光光度计上进行比色。讨论：讨论：（1） 、测定样品时，应力求与制作标准曲线和条件相同。（2） 、正丁醇和硼缓在
6、临用时混合，混合时不能快。第 5 页 共 18 页（3） 、空白，样品所用之比色皿，应分别固定使用。（4） 、比色前 15min，打开分光光度计预热。（二） 、总糖的测定：1、原理：淀粉系多糖类，经酸水解后生产单糖，利用其分子中的醛基在碱性溶液中将高价铜还原成低价铜，剩余铜在酸性溶液中与碘化钾作用析出游离碘，可用硫代硫酸钠滴定，根据空白与样品之差推出糖含量。2、测定：（1） 、发酵液过滤后，精吸滤液 2.5ml 于盛有 5ml（6mol/L）的HCl 的 25ml 刻度试管中，在沸水中加热 15min，冷却，用蒸馏水稀释至刻度。（2） 、正确吸取上述水解溶液 5ml，斐林 A10ml、斐林 B
7、10ml 于150ml 的三角瓶中，稍震摇，在电炉上加热，煮沸 3min，同时以A、B 液各 10ml、水 5ml 做空白。（3） 、冷却至室温，加 KI5ml、加 6mol/L 的 HCl 10ml，立即以0.1mol/L 的 Na2S2O3，滴定至淡黄色，加淀粉指示剂 2ml，继续滴至蓝色消失。样品消耗的 Na2S2O3毫升数为 A，空白消耗的毫升数为 B， （B-A）计算得。（三） 、还原糖的测定：1、原理：第 6 页 共 18 页测还原糖是看玉米淀粉的转化率，还原糖是培养液内含自由醛基的单糖，通常指葡萄糖，葡萄糖可以直接被微生物吸收利用，因而还原糖这个数值是反映产生菌体直接利用糖的情况
8、与发酵关系的较为密切。2、测定：发酵液经过滤，吸滤液 1ml，不经酸水解，其它按总糖的方法测定。注意：注意：1、煮沸时间应以沸腾开始起严格控制 3min。2、A 液 B 液必须准确加入，因为+1 价铜离子是计算得依据。3、淀粉指示剂不能过早的加入，因为生产大量的淀粉吸附物达到终点时仍不易褪色，造成误差。4、滴定至终点后放置一下，又呈蓝色，这是因为过量的碘。碘化钾在酸化情况下，被空气氧化而析出的碘遇淀粉重显蓝色。糖曲线表：（本表以葡萄糖计）糖曲线表：（本表以葡萄糖计）查查 糖糖 浓浓 度度 表表滴定值00.10.20.30.40.50.60.70.80.900.06 0.13 0.2010.27
9、 0.34 0.40 0.47 0.54 0.61 0.68 0.75 0.82 0.8920.95 1.02 1.09 1.16 1.23 1.30 1.37 1.44 1.50 1.5731.64 1.71 1.78 1.85 1.92 1.99 2.06 2.12 2.19 2.26第 7 页 共 18 页42.33 2.40 2.47 2.54 2.61 2.67 2.74 2.81 2.88 2.9553.02 3.09 3.16 3.22 3.29 3.36 3.43 3.50 3.57 3.6463.71 3.77 3.84 3.91 3.98 4.05 4.12 4.19 4.
10、26 4.3274.39 4.46 4.53 4.60 4.67 4.74 4.81 4.87 4.94 5.0185.08 5.15 5.22 5.29 5.36 5.43 5.49 5.56 5.63 5.7095.77 5.84 5.91 5.98 6.04 6.11 6.18 6.25 6.32 6.39106.46 6.53 6.59 6.66 6.73 6.80 6.87 6.94 7.01 7.08注：注：还原糖查表除以 2，即得；超出范围值用公式计算：C%=滴定差值0.612/1.454（四） 、氨基氮的测定：1、原理：生产上通常仅测定氨基氮和氨氮，测定氨基氮和氨氮都可以用甲醛
11、法，简便迅速，氨基氮测定数据作为中间补料和代谢控制的主要依据（含量：以 mg/100ml） 。2、测定：、发酵液过滤。、吸取滤液 5ml 于 250ml 三角瓶中，加蒸馏水 20ml，甲基红3 滴，以 0.5mol/LH2SO4调至红色，放置 5min，再用 0.075mol/L第 8 页 共 18 页的 NaOH 调至黄色，加 18%的中性甲醛 5ml 摇匀，放置 5min，加酚酞 3 滴，以 0.075mol/L 的 NaOH 滴定至为红色为终点。滴定毫升数200 即为氨基氮的含量。讨论、注意：讨论、注意：1、在加甲醛前，酸性应调节好，第一步调节，H2SO4可适当多一点，因为发酵液中含有 CO3+消耗 HCl。2、中性甲醛随用随时中和。
