《发热出疹症候群病毒核酸检测技术的应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《发热出疹症候群病毒核酸检测技术的应用（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、发热呼吸道症候群病毒 核酸检测技术的应用发热呼吸道症候群病毒检测内容核酸检测方法 荧光定量 ：敏感性 操作繁琐 成本高 普通RT-PCR：方便 快捷 性价比高 敏感 性Price!Price!xTAG RVP- Luminex 原理纽罗西敏 Seegene RV15-原理 DPO专利技术莱夫时代RespiFinder SMART 22 逆转录后分2管进行PCR扩增 溶解曲线法 QIAcell法北京卓城惠生 ABT 9+7A管名称RNase PHRVFluBCoV-229ECoV-OC43CoV-HKU1sH1N1FluAPIV1Adv扩增片段大小（bp）12514453918220021925
2、0 270283338B管名称RNase PRSVACoV-NL63PIV2HMPVPIV3RSVBHBoV扩扩增片段大小（bp）125158174193207229278290 9+7原理 两种引物：两种引物：多对靶基因特异性嵌合引物一对通用引物 三个退火温度三个退火温度9+7 检测实例胶图仅作为参考A3A10PIV1PIV19+7应用注意事项 1. 卡夹选择High Resolution 1200 2. Alignment Marker 15-600bp（注意有效期 ） 3. Size Marker 50-500bp 4. 对操作人员要求较高 5. 定期维护 5. 不看胶图看峰图！北京赛蓝
3、斯GenTouch 12重Tube A detection产产物大小内质质控863bp鼻病毒586 bp冠状病毒477 bp乙型流感病毒399 bp呼吸道合胞病毒通用型316bp甲型流感病毒249 bpTube B detection产产物大小内质质控863 bp副流感病毒2型544 bp偏肺病毒453bp副流感病毒1型354 bpTube C detection产产物大小内质质控863 bp腺病毒通用性663 bp肠肠道病毒通用型477 bp博卡病毒307 bp副流感病毒3型226 bp条带Size Marker ASize Marker BSize Marker C1#条带带863bp86
4、3 bp863 bp2#条带带586 bp544 bp663 bp3#条带带477 bp453bp477 bp4#条带带399 bp354 bp307 bp5#条带带316bp 226 bp6#条带带249 bp 北京赛蓝斯GenTouch 12重Tube ATube BTube CSizeMarker A内质控RVFluBRSVFluALane1 Lane2 Lane3Lane4Lane5 Lane6 Lane7RVFluBRSV FluAFluBFluAFluAFluA内质控内质控内质控内质控RVFluARSV内质控AdVEV71BoVPIV3内质控 内质控 内质控内质控AdVEV71Bo
5、VPIV3AdVAdV1. 能有效检测出多重感染 2. 3 个Size Marker, 容易判断结果SizeMarker C北京赛蓝斯GenTouch 12重DL2000 Size ASize BDL2000 Size CFluBRSV RSV RSV FluARSVHRV PIV1PIV1PIV2hMPV PIV1PIV1PIV3RSVADVhMPV EVGenTouch Tube1301 304 305 306 308 M1 309 311 313 314 315 M1 316 317 318 319 320 M1 321 322 323 324 325 DL 326 327 329 33
6、1 332 M1 DL非特异筛查FluARSVFluARSVFluAFluAFluBHRVFluAHRVHRVFluAGenTouch Tube2301 304 305 306 308 M2 309 310 311 312 314 M2 315 316 317 318 319 M2 321 322 323 324 325 DL M2 326 328 329 332PIV1非特异筛查GenTouch Tube3DL 301 304 305 306 308 M3 309 310 311 312 314 M3 315 316 317 318 319 M3 321 322 323 324 325 32
7、6 328 329 332 M3PIV3非特异筛查 1. 内质控扩增效率较好 2. 无明显非特异条带 3. 引物二聚体，但不影响结果判断*多重非特异条带多GenTouch序列测定试剂盒 配有12种病毒序列测定试剂盒 进一步确定病原体、分子流病、基因特征 分析2014年核酸盲样考核 麻疹/风疹核酸盲样考核 手足口病核酸盲样考核 发热呼吸道症候群病毒核酸盲样考核 发热伴出疹症候群病毒核酸盲样考核麻疹风疹、HFMD核酸盲样考核考核内容：包括不同基因型 的麻疹和风疹病毒10份标本 ：1. Negative 2. Negative 3. RV 1E 4. MV H1a 5. RV 2B 6. MV H1
8、a 7. MV H1a 8. RV 2B 9. MV H1a 10.RV 1E考核内容：包括不同基因 型的HFMD 病原10份标本 ：1. EV71 1000+ CA16 100 2. EV71 10 3. EV71 B5 1000 4. EV71 C5 1000 5. CA16 1000+ EV71 100 6. CA16 100 7. CA6 10000 8. CA10 10000 9. Echo30 10000 10.Negative考核单位：全国各省级疾控中心麻疹/风疹盲样考核Ct值河北、湖南和山东CDC鉴定了麻疹病 毒基因定型，湖南也鉴定了风疹病 毒基因定型。MV/RV与平均CT值相
9、比，过低,Why？！ ！通用道肠道病毒定量检测结果肠道病毒EV71定量检测结果肠道病毒CA16定量检测结果HFMDCA16 1000+ EV71 100EV71 100发热呼吸道症候群病毒核酸检测盲样考核参加单位： 1.陕西省疾控中心 2.湖南省疾控中心 3.河北省疾控中心 4.山东省疾控中心 5.中国检科院 6.新疆自治区疾控中心 7.上海浦东新区疾控中心共计7家课题 参与单位。考核内容：核酸检测 的病 原学范围为发热 呼吸道症 候群监测 方案中的必检病 毒，包括： 1.流感病毒(Iflu) 2.呼吸道合胞病毒(RSV) 3.腺病毒(Adv) 4.副流感病毒(PIV) 5.偏肺病毒(hMPV
10、) 6.冠状病毒(hCoV) 7.博卡病毒(hBoV) 8.鼻病毒(hRv)。7家单位正确率为94%； 陕西、湖南、河北和山东四家正确率为100%； 新疆和上海浦东正确率为90%；在Influ、ADV和RSV血清型别鉴定能力方面: 1. 湖南、河北和山东鉴定了上述三种病毒的血清型别，其中湖南和河北 血清型别鉴定结果正确率为100%，山东正确率为90%。 2. 陕西、新疆和上海浦东鉴定了RSV血清型别，正确率均为100%。发热伴出疹症候群病毒核酸检测盲样考核参加单位： 1.陕西省疾控中心 2.湖南省疾控中心 3.河北省疾控中心 4.山东省疾控中心 5.山西省疾控中心 6.新疆自治区疾控中心 7.
11、上海浦东新区疾控中心共计7家课题 参与单位。考核内容：核酸检测 的病 原学范围为 发热 伴出疹症 候群监测 方案中的必检病 毒，包括： 1. 肠道病毒（EV） 2. 麻疹病毒（MV） 3. 风疹病毒（RV） 4. 水痘-带状疱疹病毒VZV 5. 登革病毒(DenV) 6. 人类小DNA病毒B19 7. EB病毒 8. 人类疱疹病毒6型7家单位整体正确率为99%； 陕西、湖南、河北、山东、新疆和上海浦东六家单位正确率为100%； 山西正确率为90%。在MV、RV、EV71和CA16病毒基因型别鉴定能力方面: 湖南、河北和山东鉴定了上述四种病毒的基因型别，其中湖南和河北正确率 为100%，山东正确
12、率为90%。注意事项 1.实验室仍要注意控制实验污染，如发现有污染的可能 ，应及时排查并尽快消除污染； 2.商品化试剂盒质量至关重要，敏感性高、特异性强、 稳定可靠的试剂盒用于常规检测，需不同品牌试剂用于 对可疑结果进行复合； 3. 同一品牌不同批号的试剂也要进行试剂质量评估； 4. 不能完全相信产品注册证； 5.各实验室应制备手足口病、麻疹风疹病毒核酸组合盘 ，用于实验室质量控制及商品化试剂盒的验证； 6. 手足口病原交叉 6.每年一次定期组织各省的市级、区县级疾控中心进行 手足口病、麻疹风疹病毒核酸盲样考核工作，提高各地 区核酸检测水平。总 结 敏感性 特异性 稳定性 简便性 性价比No perfect! Just compatible!No perfect! Just compatible!E-mail: Tel:010-58900189THANK YOU FOR YOUR THANK YOU FOR YOUR ATTENTIONATTENTION
