《血管生成素和核糖核酸酶4基因表达调控及其生物学功能研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血管生成素和核糖核酸酶4基因表达调控及其生物学功能研究（162页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、鱼篮生盛塞狸趑鳖趑壁墼：4 基因鑫达调控区甚生堑堂功能盈窒论文评阅人评阅人2评阅人3评阅人4评阅人5答辩委员会主席委员1 ：委员2 ：委员3 ：委员4 ：委员5 ：委员6 ：丞囱盟垒丞自睦垒丛自睦生巫自睦生塞堡匿煎嚣虽生丑瞳上盘垒全盘堂盟蕉瞳金佳磊丛嚣基土盘塞垂盘堂医生睦盈建蛊熬控逝塑盘芏生金盘堂堂瞳垒要主兹燕逝匹盘堂生壹整芏芏瞳盟蕉壅熬控滥选盘芏医生壁量挂基熬援堑匹盘芏医生睦姐虚熬援堑匹盘芏医生隧答辩日期：2 Q l 生5 旦31 目I I I l l l l l l l U l l l lL l l l l l l U l l l l l l l l l I t l l l l l l 1
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6、证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：嘭签字日期：刀廖年占月伊学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝堑太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝塑太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：签字日期：力层年6 月斗日浙江大学博士学位论文致谢致谢( A c k n o w l e d g e m e n t s )当我在博士论文画上
7、句号的时候，意味着我即将结束自己的学生生涯。从进入大学到博士毕业整整十一年，是我人生成长最迅速的阶段。十一年来，陪我一路学习的同学越来越少，但是内心的那份感恩之情越来越重。在这十一年的求学生涯中，最令我难忘的莫属在浙江大学医学院的六年研究生生活。光阴似箭、岁月如梭，我已经从0 7 年入学时的初生牛犊成长为如今比较成熟的科研工作者。这六年里，虽然不能说自己有多么成功，但还是成长了许多许多。在此，我要向在学习、生活中支持和帮助我的家人、老师、同学、朋友表示衷心的感谢。感谢我的父母，上学二十余载，如果没有父母的方方面面支持就没有现在的我。从我高考填报志愿选择生物科学专业那一刻起，父母就一直无私支持我
8、追求自己的梦想。父母从来不希望我能够给家里带来多少回报，只愿我能有一份自己的事业。感谢我的妻子和她的家人，她们默默支持和无私奉献是我学业的支柱。从结婚至今，我和妻子一直两地分居，但是妻子未有任何怨言，反而一直鼓励我短暂的分开是为以后更幸福地在一起。感谢我的恩师许正平教授，很“幸运”能成为许老师的学生。衷心感谢许老师在过去六年对我学习、科研和生活倾注的大量时间和心血! 他毫无保留地与我分享他丰富的生活和科研经历，为我的成长提供一切可能的资源，对我的科研事业一如既往地支持。这六年来，伴随着许老师坦诚的谈话、严厉的批评和鼓励，我不断成长。我一辈子都会庆幸自己能做许老师的学生。值此之际，我要感谢我的国
9、外合作导师，美国塔夫斯医学中心的胡国富副教授。在波士顿联合培养的两年时间里，胡国富教授为我提供了优越的学习和研究环境，并创造了良好的学术交流氛围，让我在异国他乡度过了快乐而充实的两年。浙江大学博士学位论文致谢感谢课题组的陈光弟副教授和高向伟副教授，他们就像兄长一样，不仅在科研上给予我很大的帮助，在生活上，他们也总能在谈笑间帮助我成长。我要感谢浙江省生物电磁学重点研究实验室这个大集体。虽然我们只有3 0余人，但是这个大集体为我提供了宽松、舒适的科研环境和无私的帮助，使我能够踏踏实实的完成各项实验室工作。要特别感谢实验室的曾群力老师、包家立老师、孙文均老师、方晓老师、鲁德强老师在工作和生活上的支持
10、和帮助。感谢实验室已经毕业和现在的兄弟姐妹们，是你们的努力将实验室变成一个温暖的大家庭，让我的研究生生活更加丰富多彩。我还要特别感谢远在美国波士顿城的挚友们，他们是白惠君、罗驰、翁祖怡、高欣、蒋宇翔、杨海凌等，是他们的欢声笑语让我的异国他乡生活不再那么枯燥，在此也真诚地祝愿他们工作顺利、幸福与快乐永远陪伴。感谢浙江大学医学院中给予我帮助的各位老师。在人生的一个阶段结束、另一个阶段即将开启的时候，我唯有怀着一颗感恩之心，勤勉前行!I I浙江大学博士学位论文中文摘要血管生成素和核糖核酸酶4 基因表达调控及其生物学功能研究浙江大学医学院生物化学与分子生物学博士研究生：盛静浩导师：许正平中文摘要核糖核
11、酸酶A 超家族是一类可以水解R N A 的核酸内切酶，其同源基因通常在染色质上成簇排列。核糖核酸酶- 4 ( R i b o n u c l e a s e 4 ，R N a s e 4 ) 和血管生成素( A n g i o g e n i n ，A N G ) 作为超家族的第四和第五个成员，它们的基因共享相同的启动子区域以及部分5 非翻译区( 5 - U n t r a n s l a t eR e g i o n ，5 - U T R ) ，之后紧随两个独立的分别编码A N G 和R N a s e - 4 蛋白的外显子。这种基因排列方式在核糖核酸酶A 超家族中是唯一的，并且在整个基因组
12、中也是非常罕见的。目前，对于这种特殊排列结构基因的转录调控仍知之甚少。因此，我们利用生物信息学手段分析了人类A N G 和R N a s e - 4 基因座位上可能的调控元件，希望从其调控元件着手阐明这种特殊基因结构的调控模式。根据基因表达加帽分析( C a p - A n a l y s i so fG e n eE x p r e s s i o n ，C A G E ) 数据库绘制了A N G 和R N a s e 4 基因转录起始位点，确定了基因启动子的位置。进一步，通过体内的双荧光素酶报告基因分析，我们发现A N G和R N a s e 4 基因的启动子区域存在着两个活性位点，即远端
13、启动子活性位点( P 1 ) 和近端启动子活性位点( P 2 ) ，并且被两个t R N A 顺式作用元件( T I 和T 2 ) 隔开。其中，远端启动子活性位点P 1 的启动子活性被紧随其后的t R N A 顺式作用元件T 1 所抑制，而位于近端启动子活性位点P 2 前端的t R N A 顺式作用元件T 1 和T 2 可以显著增强P 2 的启动子活性。t R N A 顺式作用元件也可以位置依赖性的方式影响猿猴病毒4 0 ( S V 4 0 ) 启动子的转录活性。除此之外，实验发现转I I I浙江大学博士学位论文中文摘要录因子C T C F ( C C C T C - b i n d i n
14、gf a c t o r , C T C F ) 结合于A N G 蛋白编码外显子两侧的内含子中，从而促使基因内染色质环状结构的形成，并将A N G 蛋白编码外显子包裹于此结构中，最终促进A N G 和R N a s e 4 基因的表达水平。我们的研究结果为揭示人类A N G 和R N a s e 4 基因的转录调控机制奠定了基础。人类核糖核酸酶A 超家族共有1 3 个成员，每一个成员都具有其各自特有的生物学功能，例如宿主防御、血管新生、促进抑制肿瘤生长和激活免疫系统等。A N G 是第一个基于其促血管新生功能从肿瘤细胞培养液中分离纯化的核糖核酸酶，经过近3 0 年的研究，对其在生理和病理条件
15、下的作用机制已经有一定了解。已有实验证明A N G 可以与r R N A 基因的A B E ( A n g i o g e n i nB i n d i n gE l e m e m ，A B E ) 序列结合并促进r R N A 的转录，但是其具体的分子机制仍不明确。我们通过体内染色质免疫共沉淀技术在细胞内验证了A N G 除了可以与r R N A 基因的A B E 位点结合外，还可以结合于r R N A 基因启动子的U C E ( U _ U _ p s t r e a mC o n t r o lE l e m e n t ，U C E ) 位点，通过调控r R N A 基因启动子区域的
16、组蛋白修饰( 包括组蛋白H 4 的乙酰化、组蛋白H 3 的第四位上赖氨酸的二甲基化以及第九位上赖氨酸的二甲基化修饰) 以及D N A 甲基化等表观遗传学修饰，促进R N A 聚合酶I 转录前起始复合物( P r e i n i t i a t i o nC o m p l e x ，P I C ) 的组装，最终增强r R N A 基因的转录。除与r D N A 区域结合外，一般认为A N G 也可以作为转录因子促进细胞内其它基因的表达，但A N G 是否可以结合在这些基因的启动子区域? 本论文通过体内染色质免疫共沉淀与启动子基因芯片筛选相结合的技术，绘制了A N G 基因组结合位点图谱，并且验证了几个直接受A N G 调控的基因。R N a s e 4 和A N G 是同时被发现的，但是目前R N
