《载脂蛋白E基因多态性对脑损伤后血脑屏障紧密连接修复的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《载脂蛋白E基因多态性对脑损伤后血脑屏障紧密连接修复的影响（48页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、U D C ：密级：重庆医科大学硕士学位论文载脂蛋白E 基因多态性对脑损伤后血脑屏障紧密连接论文题目修复的影响作者姓名唐爽指导教师姓名( 职称、单位名称孙l 亮J l I 教授重庆医科大学临床学院申请学位级别硕士学科、专业名称外科学论文答辩年月2 0 1 3 年5 月2 0 1 3 年4 月f I I I I I II I II I I I I I I I I I lU l II IIIIfY 2 4 12 7 3 8重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发
2、表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：勰蟊日期h r7学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，并编
3、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。保密论文在解密后适用本授权书。论文作者签名：指导教师签名：日期：如I i ，7目录英汉缩略语名词对照1中文摘要3英文摘要5论文正文：载脂蛋白E 基因多态性对脑损伤后血脑屏障紧密连接修复的影响7前言71 材料与方法72 。结果1 53 讨论16参考文献2 0附图2 4全文总结、一2 9文献综述3 0致谢4 4攻读硕士学位期间发表论文4 5重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写1 B I姆Q Ea p o EK O、v T34M SF i gO DB B BA DH D LL D L RE BN a F IT J0 c l nA J英汉缩
4、略语名词对照英文全称T r a u m a t i cb r a i ni n j u r yA p o l i p o p r o t e i nEg e n eA p o l i p o p r o t e i nEp r o t e i nK n o c ko u tW i l dt y p eH u m a n 3a l l e l eH u m a n 4 a l l e l eM u h i s c l e r o s i sF i g u r eO p t i c a ld e n s i t y中文全称创伤性脑损伤载脂蛋白E ( 基因)载脂蛋白E ( 蛋白)敲除野生型人3 等位
5、基因人4 等位基因多发性硬化图光密度值B l o o db r a i nb a r r i e r血脑屏障A l z h e i m e r Sd i s e a s eH i g hd e n s i t yl i p o p r o t e i n阿尔茨海默病高密度脂蛋白L o wd e n s i t yl i p o p r o t e i nr e c e p t o r低密度脂蛋白受体E v a n sb l u eS o d i u mf l u o r e s c e i nT i g h tj u n c t i o nO c c l u d i ng e n eA d h
6、 e s i v ej u n c t i o n伊文思蓝荧光素钠紧密连接闭合蛋白基因粘附连接q R T - P C RQ u a n t i t a t i v er e a l - t i m ep o l y m e r a s e实时定量聚合酶链反应c h a i nr e a c t i o n重庆医科大学硬士研究生学位论文娃C l d n 5n MI t MhdP V D FP B SP M S FS D S1 i sA m m o n i u mp e r s u l f a t eC l a u d i n 一5g e n en a n o m o l ep e rl i t
7、e rm i c r o m o l ep e rl i t e rh o u rd a y过硫酸铵封闭蛋白一5 基因纳摩尔升微摩尔升小时天P o l y v i n y l i d e n ed i f l u o r i d e聚偏( 二) 氟乙烯p h o s p h a t eb u f f e rs a l i n e磷酸盐缓冲液p h e n y l m e t h a n e su l f o n y lf l u o r i d e苯甲基磺酰氟s o d i u md o d e c y ls u l f a t e十二烷基硫酸钠t r i sr h y d r o x y m
8、 e t h y l ) - a m i n o m e t h a n e三( 羟甲基) 氨基乙烷2重庆医科大学硕士研究生学位论文载脂蛋白E 基因多态性对脑损伤后血脑屏障紧密连接修复的影响摘要目的：探讨载脂蛋白E 基因( A P O E ) 不同亚型对创伤性脑损伤( T B I )后血脑屏障( B B B ) 修复的影响及相关机制。方法：以A P O E 转基因鼠( 3 、4 ) 、A P O E 敲除鼠及A P O E 野生鼠为研究对象，各型鼠随机分为脑损伤组、假手术组和正常对照组，以P S I 颅脑损伤撞击器精确打击制备T B I 模型；伤后1 d 、3 d 、7 d 通过检测伤灶皮层中
9、的大分子伊文思蓝( E B ) 和小分子荧光素钠( N a F I )含量来评价B B B 通透性的变化，同时通过干湿重法测定脑组织含水量；伤后7 d 采用q R T P C R 法及w e s t e r nb l o t 法检测不同A P O E 基因型鼠损伤灶脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白o c c l u d i n 及C l a u d i n 一5 的转录及表达。结果：各型鼠正常对照组间B B B 对E B 和N a F I 通透性比较，4鼠和敲除鼠B B B 对E B 和N a F I 通透性明显高于3 鼠和野生鼠；伤后各型鼠B B B 通透性明显增高，伤后l d 、3 d 各
10、型鼠问B B B 对E B 和N a F I 的通透性比较，差异无统计学意义：伤后7 d 野生鼠及3 鼠B B B 对E B的通透性已降至各自的未损伤水平( P O 0 5 ) ，但A P O E 敲除鼠及4鼠B B B 对E B 的通透性仍高于各自的未损伤水平( P 0 0 5 ) w h i l et h ep e r m e a b i l i t yt oE Bi ne 4a n dK Og r o u p ss t a y e dh i g h e rt h a nt h a to ft h ec o n t r o lg r o u p sr e s p e c t i v e l
11、 y ( P O 0 5 ) ，见图l A 和图1 B 。伤后7 d 野生鼠及3 鼠B B B 对E B 的通透性降至各自的正常对照水平( P O 0 5 ) ，而A P O E ( - - ) 鼠及4 鼠B B B 对E B 的通透性仍明显高于各自的正常对照水平( P 0 0 5 ) w h i l et h ep e r m e a b i l i t yt oE Bi ne 4a n dK Og r o u p ss t a y e dh i g h e rt h a nt h a to ft h ec o n t r o lg r o u p sr e s p e c t i v e
12、l y ( + P 0 0 5 ) ，但A P O E 敲除鼠及4 鼠B B B 对E B 的通透性仍高于各自的未损伤水平( P ( O 0 1 ) ； P O E 敲除鼠及4 鼠B B B 对N a F I 的通透性明显高于野生鼠及3 鼠( P ( O 0 1 ) 。2 伤后1 d 、3 d 、7 d 各型鼠间脑组织含水量比较，差异无统计学意义。3 A P O E 敲除鼠及4 鼠脑微血管中的o c c l u d i n 及C l a u d i n 一5 在基因转录和翻译均明显低于野生鼠及e3 鼠( P ( O 0 5 ) 。结论：A P O E 在维持B B B 正常功能及损伤后B B
13、B 的修复过程中发挥了重要作用，并在表现出亚型特异性，e4 在维持B B B 正常通透性及损伤后修复两方面均明显减弱，通过作用于紧密连接的修复进而影响B B B 损伤后的修复。重庆医科大学硕士研究生学位论文文献综述血脑屏障在维持健康与疾病发生中作用中枢神经系统是调节某一特定生理功能的神经元群，包括位于椎管内的脊髓和位于颅腔内的膻。它既是机体最重要的系统，也是机体最敏感的器官系统。首先，神经元正常的功能与否有赖于细胞外微环境的变化，包括细胞外K + 、C a ”、N a + 的浓度；其次，神经组织的新陈代谢是十分旺盛的，脑组织氧耗量约占机体总耗氧量的2 0 n 1 ，因此足够的营养物质供应是保证
14、中枢神经系统功能正常的前提条件；中枢神经系统也极易受到大量外周的化学物质的影响，正常情况下它们能在外周器官中迅速的代谢和分解而不导致损伤，但大量蓄积或进入脑内则具有较强神经毒性作用。因此中枢神经系统和外周血液之间存在一个分子界面，起着动态调节细胞外离子平衡、转运营养物质入脑、限制有害物质入脑等作用，即血脑屏障( b l o o db r a i nb a r r i e r ，B B B ) ，对于脑内的稳态的维持发挥十分重要作用。1 B 陷的结构与功能1 8 8 5 年P a u lE h r li c h 首次通过实验发现脑血管壁可能存在一种特殊的屏障结构乜1 ，但直到2 0 世纪6 0
15、年代电子显微镜的发明，人们才从从形态学上首次证实B B B 的存在，B r J g h t m a n 等认为B B B 是一个脑微血管内皮细胞水平的选择性弥散屏障，其特征为内皮细胞间广泛存在紧密连接、缺乏有利于物质透过的窗孔、细胞胞饮作用弱n 13 。进一步研究发现周细胞、星形胶质细胞终足、血管基膜也参与构成B 1 3 B m 。脑微血管内皮细胞表现出其独特的形态与功能，因此有人认为脑血管内皮细胞在本质上就有别于外周血管内皮细胞，也有人认为可能是某些细胞外的因素诱导内皮细胞表现出如此的形态及功能特异性。既往大量的实验研究已经表明，星形胶质细胞能够诱导血管内皮细胞的表达紧密连接蛋白，并形成紧密连接复合体；新近一些研究也表明周细胞和细胞外基质可能也在诱导内皮细胞的屏障作用中发挥作用8 。1 1 l ，S t e w a r t 和W
