《脊髓损伤后慢性中枢性疼痛大鼠脊髓背角的生化改变和可能机制》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脊髓损伤后慢性中枢性疼痛大鼠脊髓背角的生化改变和可能机制（58页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、首都医科大学硕士研究生论文中文摘要慢性中 枢性疼痛 ( C h r o n i c c e n t r a l p a i n , C C P ) 是脊髓损伤 ( s p i n a l c o r d i n j u r y , S C I )的 顽固 性并发症， 发作剧烈， 难以 治愈， 严重影响 患者的生存质量，由于其发生机制尚不明确，临床限于对症处理，效 果并不理想，成为国内外康复医学界一个棘手的难题。实验目 的: 深入探讨S C I 后C C P的神经生化机制。实验方法:选取S D大鼠2 8 只，随机分为四组:正常组 ( A组) ; 假手术组 ( B组) ; S C I 组: 用 W
2、 A D E法致伤L 1 脊髓节段， 复制出S C I 的大鼠 动物模型，依据大鼠有无痛行为表现，将其分为S C I 后无C C P 组 ( C组) ;S C I 后C C P组 ( D组) 。取以上四组大鼠T 1 3 和 L 2 脊髓 节段，采用免疫组织化学染色法结合图像分析观察其脊髓背角 I 组 1 型 代 谢性 谷 氨 酸受 体 ( m e t a b o t r o p i c g lu t a m a t e r e c e p t o r 1 , m G 1u R 1 ) 含 量的变化;采用N A D P H黄递酶组化法观察其脊髓背角一氧化氮合酶 ( n it r i c o x
3、i d e s y n t h as e , N O S )阳 性细胞数的变化; 采用免疫荧光组织 化学染色法结合激光共聚焦显微镜技术观察其脊髓背角 P物质 ( s u b s t a n c e P , S P ) 的 变 化。结果:S C I 组大鼠术后1 5 天， 7 只未出现C C P ( C组) ，9 只慢性 痛超敏和自 发痛现象明显，出现了 C C P ( D组) ，C C P的发生率为 5 6 .2 5 %o D组大鼠T 1 3 和L 2 节段脊髓背角的m G 1 u R 1 含量、 N O S 阳 性细胞数与C组大鼠 相比 较呈显著增加 ( P C ( P A ,D B ( P
4、 0 .0 1 ) ; t h a t o f g r o u p C i s h i g h e r t h a n t h a t首都医科大学硕士研究生论文o f g r o u p A a n d B ( P 0 .0 5 ) . C o n c e n t r a t i o n o f S P i n g r o u p D d e c r e a s e d s i g n i fi c a n t l y c o m p a r e d w i t h t h e g r o u p s C , A a n d B : D C ( P 0 .0 5 )， D A , D B (
5、P 0 . 0 1 ); t h a t o f g r o u p C i s l e s s t h a n t h a t o f g r o u p A a n d B( P 0 . 0 5 ).C o n c l u s i o n: T h e a n i m a l m o d e l e s t a b l i s h e d妙 W A D E m e t h o d i s s u i t a b l e f o r d o i n g t h e s t u d y o n o c c u r r e n c e m e c h a n i s m o f C C P a
6、ft e r S C I MG 1 u R 1 a n d N O i n t h e d o r s a l h o rn o f s p i n a l c o r d p a r t i c i p a t e e x c e s s i v e l y e x c it a t i o n o f c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m ， h a v e c l o s e d r e l a t i o n s h i p w i t h o c c u r r e n c e o f C C P i n S C I , a n d p l
7、a y a n i m p o r t a n t p a r t i n i t . S P m a y i n h i b i t t h e C C P a ft e r S C I t o a c e r t a in e x t e n t . T h e r e a r e c o m p l i c a t e d c h a n g e s i n t h e d o r s a l h o rn o f s p i n a l c o r d a ft e r S C I , w h i c h m a y a ff e c t t h e w h o l e C N S ,
8、 i t n o t o n l y m a y b e c o n c e rn e d w i t h C C P , a l s o m a y p a r t i c i p a t e in t h e p a t h o l o g y p r o c e s s o f s e c o n d a r y in j u ry a ft e r S C I .K e y Wo r d s : S C I , c h r o n i c c e n t r a l S p i n a l d o r s a l h o rn, m G 1 u R 1 ， S P , c o n f
9、o c a l l a s e r s c a n n i n g m i c r o s c o p e ,p a inNOS ,( a l l o d y n i a , s p o n t a n e o u s p a i n ) ，i mmu n o h i s t o c h e mi c a l me t h o d ,o c c u r r e n c e me c h a n i s m.首都医科大学硕士研究生论文前， -J一匀脊髓损伤 ( s p in a l c o r d in j u r y , S C I ) 是威胁人类健康的常见 创伤之 一， 1 性中 枢性疼痛
10、( c h r o n i c c e n t r a l p a i n , C C P ) 是S C I 的 顽固性合并 症，其具体表现是损伤平面以下皮肤感觉己消失区域出现的形式多样 的 慢性疼痛， 通常包括自 发 痛 ( s p o n t a n e o u s p a i n ) 和诱发 痛 ( e v o k e d p a in ) 。 诱发痛又分为 痛觉超敏( a l l o d y n i a ) 和 痛觉过敏( h y p e r a l g e s i a ) o 其发生率较高， 且近年来呈逐年增高的趋势， 由于S C I 后的C C P 的发 病机理尚不明确，虽有多种治
11、疗方法，但效果却不满意，严重影响着 患者的生存质量，成为国内外康复医学界的一个难题。为从根本上解 决这一 难题，驱除患者的病痛， 迫切需要探明这种疼痛的发生机制。自1 9 6 9 年O l n e y 等提出 谷氨酸可 使幼鼠 视网 膜和丘脑下部 神经元 变性， 认为它具有兴奋性毒性作用2 1 。 后来大量的 研究证实，中 枢神 经系统受损后会有谷氨酸的显著升高，它在脑和脊髓继发性损伤中起 着重要的作用3 1 ，其兴奋性毒性作用是通过与其受体结合来实现的。 目 前的研究大多数局限于脑和脊髓的急性损伤及其兴奋性氨基酸本身 含量的变化，对慢性脊髓损伤及其兴奋性氨基酸受体含量的变化则研 究较少，且主
12、要集中 在N M D A或非N MD A受体等离子型谷氨酸受体 方面， 也有对S C I 后大鼠m G l u R I 含量变化的研究报道， 但是， 迄今为止 尚未见到对于m G 1 u R 1 在S C I 后C C P 中可能作用的专门 报道。N O参与外周及中枢的 痛觉调制，目 前的研究主要集中于其在伤 害性刺激引起的疼痛中的作用， 罗永湘等报道: S C I 后1 0 分钟， 1 , 2 , 4 , 8 , 2 4 小时 取伤段脊髓检测， 发现N O S 含量呈非常显著性升高4 1 也有药理学研究报道，一氧化氮合酶 ( N O S )抑制剂对神经源性疼痛 有镇痛作用5 1 ， 但对于S
13、 C I 后1 5 天的大鼠 脊髓内N O S 含量是否有特 征性变化、其变化与C C P 大鼠痛行为改变有何关系尚未见报道。P物质作为一种重要的神经调质，与痛觉调制有密切的关系，目 前关于P 物质与疼痛关系的 研究主要集中于外周伤害性刺激引起的急首都医科大学硕士研究生论文,陛疼痛中的作用， 对其在S C I 后C C P中的变化及作用的研究也未见报道。本实验在复制脊髓损伤后慢性中枢性疼痛模型后，用免疫组织化 学方法， N A D P H黄递酶组化法和免疫荧光组织化学结合激光共聚焦 显微镜技术观察了 S C I 以及 S C I 后伴有 C C P时脊髓背角 m G 1 u R 1 , N O
14、 S , S P含量的变化，探讨了兴奋性氨基酸中的代谢性谷氨酸受体 m G 1u R 1 , N O S 和S P 在脊髓损伤后中 枢性疼痛发生中可能的作用，以 期为脊髓损伤后慢性中 枢性疼痛的发生机制的研究和治疗提供理论和 实验依据。首都医科大学硕士研究生论文材料与方法1 . 实 验所用试剂和溶液1 . 1 本实验所用试剂( 1 ) R a b b it a n t i - m G 1 u R 1( 兔抗1 型 代谢性谷氨酸受体多克隆抗体) :购自U p s t a t e B i o t e c h n o l o g y , L a k e P l a c i d , N Y , U S
15、 A .( 2 ) N A D P H( 还原型烟酞胺腺嚓吟二核普酸磷酸) : 购自 华美生物技术公司 ( S i n o - A m e r i c a n B i o t e c ) o( 3 ) N B T ( 硝基四 氮哇 蓝 ) : 购自B l o m o l F a l n o m o h a m l k a l l a n G m b H .H a m b u r g . T a l a f a n o( 4 ) S t r e p t a v i d i n / P e r r o x i d a s e免 疫组化试剂盒: ( 过氧化物酶 标记的链酶卵白素染色试剂盒) :购自
16、北京中山生物技术有限公司。( 5 ) R a b b i t a n t i - S u b s t a n c e P( 兔抗P 物质多 克隆抗体) : 购自 北京中山生物技术有限公司。( 6 ) D i m e t h y l B ip h e n y la m in e ( D A B ， 二甲 基 联 苯 胺) : 购自 北 京中山生物技术有限公司。( 7 ) fl u o r e s c e i n i s o t h i o c y a n a t e ( F I T C ， 硫氢酸荧光素) : 购自 北京中山生物技术有限公司。( 8 ) 其余试剂均为分析纯。1 .2 所用溶液的配制 1 . 0 . 1 M N a 2 H P 氏原液N a 2 H P 0 4 . 1 2 H 2 0 1 7 .9 g双蒸水5 0 0 m 1 2 . 0 . 1 M N a H 2 P O ; 原液N a H 2 P 0 4 . 2 H 2 0 7 . 8 g双蒸水5 0 0 m 13
