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1、分类号：R 7 1密级：学位类别：科学学位O学校代码：10062学号：2 0 0 9 2 2 2 7学科门类：临床医学 又坪眚科袁母硕士学位论文M A S T E R SD I S S E R T A T I o N论文题目：抗苗勒氏管激素与多囊卵巢综合征的相关性研究TITLES t u d yo nt h ec o r r e l a t i o n so fa n t i m u i l e r i a n h o r m o n ea n dp o l y c y s t i co v a r ys y n d r o m e一级学科：临床医学二级学科：妇产科学论文作者：徐敏指导教师：宋
2、学茹副主任医师导师组成员：张慧英副主任医师张素珍主任医师天津医科大学研究生院二。一二年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：j 豁疋日舯劈可日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供
3、查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口在笋解密后适用本授权书。本论文属于不保密曰。( 请在以上方框内打“”)作者签名：敏日期洲】年J 月岁日导师签名：墼日期矽L 年j 月玉f 日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：探讨抗苗勒氏管激素( a n t i m u l l e r i a nh o r m o n e ，A M H ) 在多囊卵巢综合征、卵巢早衰、正常人群中的表达差异及其与多囊卵巢综合征不同临床类型的相关性。方法：收集2 0 1 0 年1 0 月2 0 1 1 年1 2 月在天津医科大学总医院妇科内分泌门诊及生殖医学中心就诊的P C O S 患者
4、1 2 4 例，卵巢早衰患者3 0 例，选择健康志愿者和因输卵管因素或男方因素在生殖医学中一C , 4 Y 助孕治疗的3 0 例卵巢形态、功能正常的患者为对照组。所有患者均排除其他内分泌疾患，近3 个月未使用过激素类药物。所有P C O S 患者于月经第3 一- 5 天或者闭经状态下( 无直径大于1 0 m m 卵泡发育) 留取空腹静脉血提取血清，进行血清性激素六项、胰岛素释放试验、游离甲功、肾上腺皮质功能测定：P O F 组及对照组患者测定性激素水平。测定上述所有标本的血清抗苗勒氏管激素水平。对上述所有入选对象均登记月经史、身高、体重。对1 2 4 例P C O S 患者按照胰岛素抵抗与非胰
5、岛素抵抗、高雄激素血症与非高雄激素血症、月经周期长短、肥胖与非肥胖、窦卵泡数五种不同临床特点进行分组，比较各种分组临床特点、内分泌特征及A M H 水平差异。结果：1 P C O S 、P O F 患者临床及内分泌特征及A M H 表达差异1 1P C O S 患者的发病特征：患者平均年龄( 2 5 9 0 - 士4 2 1 ) 岁；初潮年龄( 1 3 8 5 土0 7 6 )岁；B M I ( 2 7 7 1 + 4 2 1 ) k g m 2 ；肥胖的发生率约为6 4 ，2 3 ( 7 9 1 2 4 ) ；高雄激素血症发生率约为6 2 1 0 ( 7 7 1 2 4 ) ；高胰岛素血症的
6、发生率约为6 6 1 3 ( 8 2 1 2 4 ) ；闭经的发生率约为4 0 3 2 ( 5 0 1 2 4 ) ，月经稀发的发生率约为5 9 6 8 ( 7 4 1 2 4 ) ；窦卵泡数3 0 个组2 9 例，3 0 个 4 5 个组3 9 例：A M H ( 1 3 ，2 3 + 5 2 0 ) n g m l 。1 2 对照组的一般情况：P O F 组患者平均年龄( 2 6 1 9 + 4 6 1 ) 岁，初潮年龄( 1 5 5 8 ：L 0 7 2 ) 岁，A M H ( 2 9 8 ：L 1 。9 8 ) n g m l ；萨常对照组平均年龄( 2 6 0 1 + 4 3 2 )
7、岁，初潮年龄( 13 5 8 士0 7 2 ) 岁，A M H ( 6 2 7 士2 7 9 ) n g m l 。1 3 比较P C O S 组、P O F 组与正常对照组A M H 水平，差异有显著统计学意义( p 4 5 个组依次增高差异有统计学意义( 正0 0 5 ) 。2 3 按照H O M A - I R 分组：A M H 水平在胰岛素抵抗组低于非胰岛素抵抗组，差异有统计学意义( P A F C 4 5g r o u pa n d 4 5 ， A F Cg r o u p t h ed i f f e r e n c ew e r es i g n i f i c a n t (
8、p 2 5g r o u p ( p 2 5g r o u p ( p 2 5g r o u pt h a ni nB M I 1 0 m m 和( 或) 超声下见1 2 个以上直径2 9 m r n 的小卵泡；上述3 项有任意2 项即可诊断，并除外先天性肾上腺皮质增生症、C u s h i n g 综合征、甲亢、分泌雄激素的肿瘤等可导致雄激素增多的疾病。( 2 ) P O F 目前没有统一的诊断标准，公认的卵巢早衰的诊断标准是4 0 岁以前出现至少4 个月以上闭经，并有2 次或以上血清F S H 4 0 I U L ( 两次检查间隔1 个月以上) ，雌二醇水平 ：2 6 9 或任意时天滓医科
9、大学硕士学位论文研究对象和方法间段胰岛素水平超过l O O m I U L 笋r l 定为胰岛素抵抗 8 J 。( 5 ) 肥胖的诊断标准：肥胖的诊断标准采用中国成人超重和肥胖症预防控制指南标准 9 1 体重指数B M I = 体重身高2 ( k g m 2 ) ，体重指数B M I 2 5 k g m 2 为肥胖。( 6 ) 月经稀发与闭经的诊断标准：月经稀发是指月经周期超过3 5 天以上小于3个自身月经周期或3 个月者为月经稀发；闭经是指月经周期超过3 个自身月经周期或者超过3 个月者。( 7 ) 灵敏度：指金标准确诊的病例中被评试验也判断为阳性者所占的百分比。特异度：指金标准确诊的非病例
10、中被评试验也判断为阴性者所占的百分比。假阳性：指金标准确诊的非病例中被评试验错判为阳性者。假阴性：指金标准确诊的病例中被评试验错判为阴性者。约登指数= 灵敏度+ 特异度11 1 2 标本采集所有受试者排除其他内分泌疾患，近三个月内未使用过激素类药物，P C O S患者于月经第3 5 天( 闭经患者在任意一天阴道B 超未发现卵巢内直径大于l O m m 卵泡) 空腹抽取静脉血，静置2 4 小时后，3 0 0 0 d m 离心取血清，一2 0 摄氏度冰箱冻存，待标本收集完善统一测A M H 水平，所有P C O S 患者均检测性激素水平，胰岛素释放试验；所有受试研究对象已婚者行阴道超声检测，记录双
11、侧卵巢窦卵泡数，未婚者行肛门直肠超声检查，记录双侧卵泡数。P O F 组间隔一个月检测2 次性激素水平，对照组检测性激素水平，所有纳入研究的对象均记录月经史、婚育史、身高、体重等一般情况。1 2 研究方法性激素六项及胰岛素测定采用A C S 全自动化学发光免疫仪及配套试剂盒测定，采用化学发光法测定浓度质控由伯乐公司提供仪器，批内变异系数 t 5 U m l( 3 ) 磷酸盐缓冲液 1 5 U m l( 4 ) 4 氨基安替比林0 2 5 m m o l L( 5 ) 变旋酶 2 U m l ( 6 ) 苯酚0 7 5m m o l L( 7 ) 稳定剂1 2 3E L I S A 主要实验原理
12、采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法( E L I S A ) 测定样品中人抗苗勒氏管激素( A M H ) 的水平。向预先包被了人抗苗勒氏管激素( A M H ) 单克隆抗体的酶标孔中加入抗苗勒氏管激素( A M H ) ，温育；温育后，加入生物素标记的抗A M H抗体，再与链霉亲和素一H R P 结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A 、B ，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人抗苗勒氏管激素( A M H ) 的浓度呈正相关。1 2 4E L I S A 主要实验方法( 1 ) 标准品的稀释：( 上述试剂配置中讲述) ：根据待测
13、样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔做复孔。加样：1 ) 空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的抗A M H 抗体，链霉亲和素一H R P ，只加显色剂A & B 和终止液，其余各步操作相同；2 ) 标准品孔：加入标准品5 0 9 l ，链霉素H R P 5 0 9 l ( 标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加) ；3 ) 待测样品孔：加入样本4 0 1 x l ，然后各加入抗一A M H 抗体1 0 9 l 、链酶亲和素一H R P 5 0 1 t l ，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，3 7 温育6 0 分钟。( 2 ) 配液：将3 0 倍浓缩洗涤液用蒸馏水3 0 倍
14、稀释后备用。( 3 ) 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置3 0 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。( 4 ) 显色：每孔先加入显色剂A 5 0 9 l ，再加入显色剂B5 0 u 1 ，轻轻震荡混匀，3 7 避光显色1 0 分钟。7天津医科人学硕十学位论文研究对象和方法( 5 ) 终止：每孔加终止液5 0 1 a l ，终止反应( 此时蓝色立转黄色) 。( 6 ) 测定：以空白孔调零，4 5 0 n m 波长依序测量各孔的吸光度( O D 值) 。测定应在加终止液后1 0 分钟以内进行。( 7 ) 根据标准品的浓度及对应的O D 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样
15、品的O D 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。1 2 5 显色后板孔图为清晰显示不同表型P C O S 患者血清A M H 表达之间的差异特拍摄P C O S 组血清在滴入终止显色液后显色图样，本图清晰的显示了P C O S 组内不同表型患者之间A M H 表达存在显著差异。l哥：自，0 i ”蟛簟鞫黪骖饕j 静鞲 秘灞哺翩随嘲1 。q 。l l + ： k4，翟l 擎图2P C O S 组滴入终止液后显色图样天津医科大学硕士学位论文研究对象和方法1 2 6E L I S A 结果判断绘制标准曲线：在E X C E L 工作表格中，以标准品浓度做横坐标，对应O
16、D值做纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。O D 值，：”。钟红。3 9 2 0 2 n 蚋蝴 。 ， j广0 。0 0 00 。$ 0 0l ，0 0 0l 。5 0 02 。0 0 02 。5 0 0拿，0 0 0 n g m l图3A M H 标准品线性回归曲线1 。3 统计方法应用S P S Sl7 0 软件进行数据分析。计量资料结果采用i S 表示。样本采用k S 检验各组数据正态分布情况，比较三组问各项指标行方差分析，两组问各项指标比较采用f 检验。各项指标问的关系用直线相关分析和P e a r s o n , 泪关分析，P 0 0 5 P C O S 组、P O F 组与正常对照组各项指标比较：三组间年龄差异无统计学意义( 矿O 0 5 ) ，P C O S 组B M
