《千金藤素逆转MCF7ADR细胞的多药耐药性及其与GSTπ和DNA Topo Ⅱ的关系》由会员分享，可在线阅读，更多相关《千金藤素逆转MCF7ADR细胞的多药耐药性及其与GSTπ和DNA Topo Ⅱ的关系（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、郑州大学硕士学位论文千金藤素逆转MCF-7/ADR细胞的多药耐药性及其与GST-和DNA Topo 的关系姓名：夏薇申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：王庆端;范魁生20030430郑卅大学2 0 0 3 届硕士学位论文千金i 鞭罐转M 呀a 勰细胞的多药咝别汲其与O s r - “和D 1 和奇哄系千金藤素逆转M C F 7 儿牺R 细胞的多药耐药性及其与G S T 和D N AT o p o I I 的关系中请人夏薇推荐导师王庆端范魁生郑州大学医学院河南省医学科学研究所郑州4 5 0 0 5 2摘要背景与目的肿瘤细胞多药耐药性( M u l t i d r u gr e s i s t
2、 a n c e ，M D R ) 是造成肿瘤化疗失败的主要原因。M D R 是指肿瘤细胞对种药物产生耐药性，同时对结构与作用机理不同的药物也产生交叉耐药性。近年来国内外研究表明谷胱甘肽硫转移酶( G l u t a t h i o n eS - t r a n s f e r a s ep i ，G S T - ) 通过对异生物质的生物转化和解毒功能参与肿瘤细胞耐药性的形成；而D N A 拓扑异构酶I I ( T o p o i s o m e r a s eI I ，T o p oI I ) 活性数量或性质上的改变引起药物诱导产生的可裂解复合物的形成减少，从而导致M D R 的产生。千金藤
3、素( C e p h a r a n t h i n e ，C E P ) 是从防己科干金藤属植物的块根中提取分离出的一种双苄基异喹啉类生物碱单体化合物，具有较强的多种生物活性。最近国外研究显示其具有逆转肿瘤多药耐药的作用，其机制是否与G S T - n 及D N AT o p oI I 有关，目前尚未见报道。本实验运用细胞学和分子生物学的检测方法，观察C E P 对肿瘤细胞耐药性的逆转作用，并对M D R 的分子机制进行深入探讨。方法实验选择人乳腺上皮细胞癌M C F 7 及由阿霉素( A d r i a m y c i n ，A D R ) 诱导的具有稳定M D R 表型的耐阿霉素细胞株M
4、 C F - 7 A D R ，采用M T I ? ( 3 ( 4 ，5 - d i m e t h y l t h i a z 0 1 )一2 ，5 - d i p h e n y l t e - 2 H - t e t r a z o l i u mb r o m i d e , M r T ) 分析法，测定A D R 单用及与C E P 、维拉帕米( V e r a p a m i l ，V E R ) 合用对M C F 7 、M C F 7 t A D R 细胞的直接细胞毒作用；采用免疫组织化学( I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y , I
5、H C ) 法测定M C F 7 、M C F 7 A D R 细胞内G S T n 的表达，以及药物对G S T 表达水平的影响；从M C F - 7 、M C F - 7 A D R 细胞中提取D N AT o p oI I 采用考马斯亮兰G - 2 5 0 染色法测定酶提取液蛋白含量；采用对郑J 惴2 0 0 3 屉硕士学位论丈： - M C F - 7 t A D R 细胞的多药耐药性及其与G S T - n 和D N A I 碓I I 自帙系超螺旋p B R 3 2 2D N A 的解旋能力测定D N AT o p oI I 的活性，以及药物对T o p oI I 活性的影响。通过上
6、述实验来阐明M C F 一7 A D R 对A D R 产生耐药性与C A S T - 、D N AT o p oI I 之间的关系及C E P 逆转耐药性的机理。结果1 A D R 对M C F 一7 、M C F 7 t A D R 细胞的细胞毒作用采用M T T 法测定A D R 对M C F 7 、M C F 7 1 A D R 细胞的I C 5 0 值，分别为O 5 0 +o 0 31 - tm o l L 。和2 7 3 7 土0 8 3um o l L - l , 二者比较差异有显著性( P O 0 5 ) ：对M C F 一7 A D R 细胞的I C 5 。值为20 3 O
7、0 91 , 1t o o l L ，与单用A D R比较差异有显著性( P O 0 5 ) 。M C F 饥m R 对照组为4 9 5 8 7 6 1 ，9 1 2um o l L 1 A D R 单用组为4 8 8 6 7 9 3 ，与41 1m o l L 1 C E P 合用组及与8I Xm o l L 。1 V E R合用组分别为1 2 8 8 - - + 45 9 ，2 3 9 0 + 5 8 2 ；M C F 7 A D R 细胞对照组G S T 的表达高于M C F - 7 细胞，二者比较差异有显著性( P O 0 5 ) 。M C F 7 t A D R 细胞单用9 1 2u
8、m o lt A D R 、A D R 与8 妊t o o l L 1 V E R 舍用组D N AT o p o i 活性与如酶涎药对照组比较差舅无摄著然( D 啦、0 5 ) ；A D R 与4 弘t o o l 0 1 C E P 合嫣终可瞧避藩分导豹D N A 解旋律鬟，与燕酶无蘩对照绻、A D R 单鬟缝魄较差异有羹著经( p 0 0 5 ) C o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u pa n dA D Rg r o u p ，t h ee x p r e s s i o no fG S T 一o fA D Rc o m b i n e d
9、C E Pg r o u pd e c l i n e ds h a r p l y ( P 0 0 5 ) ，w h i l et h eg r o u po f A D Rc o m b i n e dw i t h4um o l L 1C E Pc o u l de n h a n c et h ea c t i v i t yo f D N AT o p o l Im e d i a t e ds u p e r c o i l e dD N Ar e l a x a t i o n T h e r ew a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n
10、c ec o m p a r e dw i t hg r o u po fA D Ra l o n ea n dc o n t r o lg r o u p 伊 O 0 5 ) ；而对M C F 7 A D R 细胞的I C j o 值有明显降低作用( 户 00 5 ) ；对M C F 7 f A D R 的细胞毒作用增强，I C 5 0 值明显下降( P O 0 5 ) ，单用9 1 2pt o o l L 1 A D R 处理M C F 一7 1 A D R 细胞不影响G S T 表达( P o 0 5 ) ，A D R 与4t - tt o o l L 1 C E P 合用使M C F
11、- 7 A D R 细胞1 4j 封H 大学2 0 0 3 届硬士学位敞千赫嬲l 邀跨M c N 恍D R 组胞搬多药甜薹砒及苒与G s T - W 和跳1 碡I I 的关系G S T n 表达下降，与对照组、单用A D R 组比较差异有显著性( P 0 0 5 ) ；A D R 与4um o lL 。1 C E P 合用可促进M C F 7 A D R细胞D N A T o p o l I 介导的D N A 解旋作用，与加酶无药对照组、单用A D R 组相比，差异有显著性( P C o 凇啦瓣羲瓣薛型翌塑：竺竺! 撇( “m 。1 。1 、A D R4 测P - t o 睁。姻l “ L 巍
12、“ 18 张1 1t o R o il 矗转L 袋“ lT a b 2 E f f e c t o f A D R o n t h e i n h i b i t o r yr a t e o f M C F - 7 A D R c e l l s ( n = t 2 ，i 士s )C o n c e n t r a t i o no f A D 廷 ( H m o t 0 1 )I n h i b i t o r yf 鼓e( 铺)8 6 2 l4 3 1 02 l + 5 51 0 85 。3 98 5 ，5 2 圭2 。8 66 9 ，9 2 1 2 03 4 4 4 圭 7 51 7
13、6 0 Z 4 59 4 3 1 1 22 7 ，3 7 0 ，8 3赫b 3E f f e c to fA D Ri nC o m b i n a t i o nw i t hV E Ro re 嚣Po i lt h ei n h i b i t o r yr a t eo fM C F - 7 A D Rc e l l s i i - - 1 2 , x - + s )C o n c e n t r a f i o n 。f A D R 墅塑至鬯塑f 驻m o t * F 1 4 弘m o l o 8 茹m o l L - C E P + A D RV E R + A D R郑州太学2 0
14、 0 3 届硕士学位论文千金藤蔚辫寺M c F 捌A D R 细胞的多药耐药性及其与G S T - 和D 眺I b p o I I 的关系T a b 4C 、d t o t o x i c i t yo fA D Ra l o n ea n di nc o m b i n a t i o nw i t hV E Ro rC E Pi nM C F - 7a n dM C F - 7 A D Rc e l ll i n e s ( n = 1 2 ，z J )+ P 0 0 5V SM C F - 7t r e a t e dw i t hA D R 、A D R + C E Pa n dA D
15、 R W E RP 0 0 5V SM C F 7 A D Rt r e a t e dw i t hA D R尸 00 5V SM C F 一7 A D Rt r e a t e dw i t hA D I H C E PT a b 5 C y t o t o x i c i t yo f C E Pa n d V E R i n M C F - 7a n d M C F - 7 A D R c e l l l i n e s ( n = 1 2 ，i s )T a b 6E x p r e s s i o no fG S T - i nM C F - 7a n dM C F - 7 A D
16、 Rw i t ho rw i t h o u td r u g s( n = 7 ，x s )G r o u p sC o n c e n t r a t i o n ( u m o l L 1 )G S T 一v a l u eM C F 一7M C F - 7 ，A D R1P_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 一C o n t r 0 1A D R3 4 3 1 9 l4 9 5 8 7 6 1 47 7
