《产酶溶杆菌群体感应系统的鉴定及功能分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《产酶溶杆菌群体感应系统的鉴定及功能分析（107页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、I D E N T I F I C A T I O NA N DF U N C T I O NC H A R A C T E R I Z A T I O N O FQ U O R U MS E N S I N GS Y S T E MI NL Y S O B A C T E RE N Z Y M O G E N E SB yL i uY i r uAT H E S I SS u b m i t t e dt oN a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yI nP a r t i a lF u l f i l l m e n to
2、ft h eR e q u i r e m e n t sf o rt h eM a s t e rD e g r e eo f S c i e n c eS u p e r v i s e dby：5uoervlsedb yP r o f e s s o rL i uf e n g q u a n一一C o l l e g eo fP l a n tP r o t e c t i o nN a n jn gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yN a n j i n g210 0 9 5 ，ER C h i n aM a y2 0 1 2原创性声
3、明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文储( 需耥签鼢獬知p 年二日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论
4、文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。( 请在以上方框内打“”)学位论文作者( 需亲笔) 签名：。 。1 撅懦? 矿，2 年月，泪学位论文作者( 需亲笔) 签名：。孩临矿，2 年名月，姻导师( 需亲笔)矿年( 月J 2 日目录目录摘要手IA B S T R A C T I I I上篇文献综述第一章产酶溶杆菌研究进展11产酶溶杆菌( 三e n z y m o g e n e s ) 生物学特性12 溶杆菌的拮抗及生防机理一22 1胞外酶22 2次生代谢43诱导抗性5第二章细菌的群体感应与群体行为71原核生物群体感应的发现及主要类型71 1 依赖A H L s 的群体感应系统
5、81 2 依赖A I 2 的群体感应系统81 3 依赖D S F 的群体感应系统91 4D S F 对第二信使c y c l i cd i G M P 的调控1 2下篇研究报告。1 9第一章产酶溶杆菌r p f F 基因的克隆与功能分析1 91试验材料2 11 1 菌株、质粒和培养条件2 11 2 引物的设计与合成2 31 3培养基2 41 4 酶、抗生素、试剂盒和化学试剂一2 62实验方法2 62 1D N A 操作体系及程序2 62 2 细菌基因组D N A 的提取2 72 3r p f F 和L y s e g l 0 0 0 0 3 6 基因突变体的构建2 82 4 连接产物转化大肠杆
6、菌2 92 5 质粒的提取与酶切验证一2 92 6L y s o b a c t e re n z y m o g e n e s 电转化及缺失突变体的筛选3 0产酶溶杆菌群体感应系统鉴定及功能分析2 7S o u t h e r nB l o t 验证312 8 坦互补菌株的构建3 42 9X c c A r p f F 的r p f F L y s 互补菌株和空载体的构建3 42 1 0r p f F 基因是不是一个合成酶证明3 42 1 1对腐霉的拮抗3 52 1 2 重要此生代谢产物W A P 的提取3 62 13 对马铃薯环腐病拮抗3 62 1 4 对紫外光的耐受力3 62 1 5E
7、 P S 产生能力观察3 72 1 6 滑动性观察3 72 1 7 四种胞外酶检测3 72 1 8 相对实时荧光定量P C R 和反转录P C R 。3 82 1 9r p f p 基因的基因芯片分析4 03结果分析4 03 1L e n z y m o b a c t e r 中何基因簇同族体的鉴定4 03 2 重组自杀载体的构建及验证4 13 3r p f F 基因缺失突变体的获得4 23 4r p f F 基因缺失突变体的互补菌株构建4 43 5X c c A r p f F 的r p f F L y s 互补载体的构建4 63 6r p f F L y s 可以恢复X c c A r
8、p f F 蛋白酶产生能力4 63 7r p f F L y s 突变降低了D S F 产生能力4 73 8 硒伊基因突变对降低了H S A F 的产量4 83 9r p f F 基因突变降低了W A P 的产量，从而降低了对马铃薯环腐病的拮抗活性! ；( )3 1 0 对紫外光的耐受力5 13 1 1r p f F 基因突变降低了胞外多糖E P S 的产量5 23 1 2r p f F 基因突变提高了菌株的滑动性5 33 1 3四种胞外酶检测5 43 1 4 基因芯片结果5 54 讨论5 6第二章产酶溶杆菌r p f G 基因的克隆与功能分析5 91试验材料6 11 1 菌株、质粒及培养条件
9、6 1目录1 2引物6 22 方法6 22 1产酶溶杆菌中r p f G 基因的克隆6 22 2r p f G 突变体的构建及验证6 22 3H S A F 的提取以及其对腐霉( P y t h i u ma p h a n i d e r m a t u m ) 的拮抗活性6 32 4P K S - N R P S 表达量的实时定量P C R 6 32 5 胞外多糖与滑行能力观察6 32 6 四种胞外酶检测6 33结果分析6 33 1r p f G 基因的克隆6 33 2r p f G 基因的敲除验证6 43 3r p f G 突变降低了菌株O H l l 对腐霉的拮抗活性6 53 4r p
10、 f G 突变降低了H S A F 关键基因的表达量6 53 5r p p 突变降低了菌株O H l l 的胞外多糖产生能力，提高了滑动能力6 63 6r p f 6 突变不改变胞外酶的产生能力6 74 讨论6 7参考文献。6 9附录一产酶溶杆菌中受到r p f F 影响基因汇总( 基因芯片结果) 8 1攻读硕士期间发表或待发表的论文9 5j l I 谢9 7摘要产酶溶杆菌群体感应系统的鉴定及功能分析摘要产酶溶杆菌( L y s o b a c t e re n z y m o g e n e s ) O H l1 是由本实验室从辣椒根际土壤中分离得到的一种新型生防菌，属溶杆菌属( L y s o b a c t e r ) 、黄单胞科( X a n t h o m o n a d a c e a e ) 。该菌G C 含量较高，有滑行现象，能产生多种胞外酶，包括几丁质酶、蛋白酶、纤维素酶、
