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1、山东中医药大学硕士学位论文关节止痛胶囊治疗膝骨性关节炎的实验及临床研究姓名：王式鲁申请学位级别：硕士专业：中医骨伤科学指导教师：毕荣修2003.4.20提要0 1 1 _ !目的。观察关节止痛胶囊治疗膝骨性关节炎的疗效，并探讨其作用机理及膝骨性关节炎的发病机制。方法实验研究将3 2 只新西兰兔分为A 正常组、B 模型组、C 对照组、D 治疗组jB 、C 、D 三组按照H u l t h 造模方法造成膝骨性关节炎模型。D 组给予关节止痛胶囊，C 组给予壮骨关节丸。给药8 周后拍摄膝关节J 下位C R 片并测定血清、关节液超氧化物歧化酶( s O D ) 、一氧化氮( N O ) 含量，动物处死后
2、取股骨髁进行光镜观察，测定软骨细胞核D N A 含量，T U N E L 法标记凋亡软骨细胞，琼脂糖凝胶电泳观测软骨细胞D N A 梯形带，并取胫骨平台软骨行软骨生化指标测定。临床研究应用关节止痛胶囊、壮骨关节丸治疗膝骨性关节炎患者各3 0 例，对照观察临床总疗效及症状、体征改善情况。结果实验研究显示模型组膝关节软骨有明显退行性改变及滑膜炎性改变，关节液中S O D 含量明显降低，N O 含量明显升高，软骨细胞凋亡旺盛，细胞核内异染色质含量增多，电泳出现明显的梯形带，糖醛酸含量显著降低，胶原类型发生改变。对照、治疗两组病理改变介于正常、模型组之间。治疗组细胞核内异染色质、糖醛酸含量与正常组比较
3、无显著差异( P O 0 5 ) ，软骨细胞凋亡散在量少，电泳梯形带模糊，关节液S O D 升高及N O 含量降低的程度与对照组比较，差异显著( P O 0 5 ) ，t h ea p o p t o s i So fc a r t i l a g ew a sd i s p e r s ea n dl e s s ，t h el a d d e r so fD N Aw e r eo b s c u r e T h ec h a n g eo fS O Da n dN Oc o n t e n t sw a sr e m a r k a b l et h a nt h a ti nG r o
4、 u pC ( P O 0 5 ) ；与模型组比较，对照组糖醛酸含量升高，有显著性差异( P 0 0 5 ) 。提示兔膝骨性关节炎模型8 周时胫骨平台软骨蛋白多糖含量显著降低，应用壮骨关节丸和关节止痛胶囊均促进了软骨蛋白多糖的合成抑或抑制其分解，但两种药物作用无明显差别。2 羟脯氨酸含量测定：羟脯氨酸是胶原的特异成分，应用盐酸直接水解组织的方法可以折算测定胶原的含量。经统计学处理，胶原含量各组间比较无显著性差异( P O 0 5 ) 。提示兔膝骨性关节炎模型8 周时软骨中胶原含量变化较小，考虑与胶原自身特殊稳定的三联螺旋结构，不易被分解，代谢缓慢有关。结合M a s s o n三色染色的结果，
5、进一步提示病变软骨中胶原的性质发生了改变。壮骨关节丸和关节止痛胶囊对胶原含量无显著影响。3 含水率测定：各组间含水率比较，经统计学处理，无显著性差异( P O 0 5 ) 。提示兔膝骨性关节炎模型8 周时软骨含水率无明显变化，考虑与其影响因素复杂有关，诸如胶原、蛋白多糖的含量、结构、亚成分变化等；壮骨关节丸和关节止6墨堇圭生鉴壅兰塑壁量兰墨羔叁塑壅壁垒堕生竺垄一痛胶囊对病变软骨的含水率影响不显著。结果见表1 。表1 软骨生化指标的测定( 叉士s )与正常组比较+ p 0 0 5 ) 。关节液S O D 含量，模型组较正常组明显降低，有显著性差异( P 0 0 5 ) ，而与模型组比较均明显升高
6、，有显著性差异( P 0 0 5 ) 。关节液N O 含量，模型组与正常组比较明显升高，有显著性差异( P 0 0 5 ) ，而与模型组比较均明显降低，有显著性差异( P 0 0 5 ) 。提示兔膝骨性关节炎8周时异染色质明显增多。2 与模型组比较，对照组及治疗组软骨细胞核灰度值为小，有显著性差异( P 0 0 5 ) ，提示壮骨关节丸及关节止痛胶囊可以明显减少兔膝骨性关节炎模型软骨细胞核内异染色质的含量，但两种药物作用无明显差别。结果见表3 。表3 软骨细胞核灰度值( 叉土s )与正常组比较”P 0 0 5 ) ；末端原位标记、琼脂糖凝胶电泳结果显示关节止痛胶囊能减轻内源性D N A 氧化性
7、损伤，减少D N A 键断裂及低分子片段数量，减少兔软骨细胞凋亡9山东中医药大学2 0 0 3 届硕士学位论文数目；通过软骨生化指标的测定，显示关节止痛胶囊具有促进兔软骨基质合成，抑制其降解的作用，与对照组比较无明显差异( P 0 0 5 ) ，结合M a s s o n 染色结果证实关节止痛胶囊亦具有阻止兔软骨内胶原转型的作用：通过测定兔膝关节液的S O D 、N O 含量表明，关节止痛胶囊可降低兔关节内N O 和氧自由基的含量，增加关节内S O D 的含量，与对照组比较有显著性差异( P 3 8 岁；( 5 ) 有骨性膨大；( 6 ) X 线片示骨赘形成。满足1 + 2 + 3 + 4 条
8、，或1 + 2 + 5 条，或1 + 4 + 5 或1 + 6 条者可诊断膝骨性关节炎。2 纳入标准符合以上诊断标准，且近期未用其他方式治疗或服用其他药物者。3 排除标准( 1 ) 膝关节间隙显著狭窄或关节间形成骨桥连接而成骨性强直者；( 2 ) 膝关节肿瘤、类风湿、结核、化脓及关节内骨折急性期者；( 3 ) 有明显膝关节内外翻畸形及患肢有血管神经损伤史者；( 4 ) 合并有一I I , 、脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病及精神病患者；( 5 ) 妇女妊娠期及哺乳期；( 6 ) 未按规定服药无法判定疗效者。( 二) 一般资料全部病例共6 0 例，均来自2 0 0 1 年3 月至2 0
9、0 2 年1 1 月山东中医药大学附属医院骨科门诊，随机分为治疗组和对照组。治疗组3 0 例，男性1 3 例，女性1 7 例，年龄4 2 6 9 岁，平均5 8 3 8 4 岁，病程9 个月8 年，平均3 2 1 8 年；对照组3 0 例，男性1 4 例，女性1 6 例，年龄4 1 - - 6 7 岁，平均6 1 2 9 1 岁，病程1 1 个月8 年，平均3 4 2 0 年。经统计学处理，治疗组与对照组在性别、年龄、病程、症状及体征分布等方面均无显著性差异( P O 0 5 ) ，具有可比性。二、治疗方法( 一) 治疗药品1 关节止痛胶囊：主要成分为独活、威灵仙、苍术、萆薜、鸡血藤、桑寄生、
10、川牛膝。由山东中医药大学附属医院制剂室提供。生查垦苎垄兰! ! ! ! 壁翌主兰竺堡查一一2 壮骨关节丸：主要由狗脊、骨碎补、淫羊藿、独活、木香、鸡血藤、川断、熟地黄等药物组成。南方制药厂生产，批号：2 0 0 1l 1 0 6 。( 二) 给药方法治疗组给予关节止痛胶囊口服，每日3 次，每次2 粒；对照组口服壮骨关节丸，每日2 次，每次6 9 。4 周为一疗程，服药8 周( 两个疗程) 后观察疗效。三、观察指标( 一) 安全性指标一般体检项目及血、尿、便和肝、肾功能，治疗前后各查一次。( 二) 临床观察指标治疗组与对照组治疗后的总疗效及治疗前后症状、体征评分的改善情况。四、疗效评定( 一)
11、评分标准参照中药新药临床研究指导原则中“中药新药治疗骨性关节病临床研究指导原则”( 中华人民共和国卫生部制定发布，1 9 9 7 年) 的标准，于治疗前后分别对以下项目评分分级：1 临床症状评分标准( 1 ) 卧床休息时疼痛或不适无活动或处于某一位置时疼痛不活动亦痛( 2 ) 晨僵或起床后痛1 分钟l 4 分钟5 分钟( 3 ) 从座位站立无需手帮助需手帮助( 4 ) 行走时疼痛或不适无1 20 分1 分2 分0 分1 分2 分0 分1 分0 分墨堇生塑鉴查兰塑堕! 丝墨堇叁箜壅竺兰竺查竺垄行走一段距离后出现开始行走或继续步行后增加( 5 ) 最大行走距离无限制 1 k m ，但有限5 0 0
12、 m I k m3 0 0 m 5 0 0 ml O O m 3 0 0 m 2 3 。3 “ f i r ：疼痛基本消失，关节屈伸活动轻度受限，参加活动或工作的能力有改善，病情轻重程度积分下降 1 3 。4 无效：未达到有效标准者。五、统计学方法采用S P S S 统计软件处理，计量资料采用t 检验，计数资料采用x 2 检验。六、治疗结果( 一) 安全性指标观察服药期间，患者无明显不适，各项安全性指标均在正常范围之内。( 二) 治疗后总疗效治疗组临床控制4 例，显效1 2 例，有效9 例，无效5 例，显效率为5 3 3 3 ，总有效率为8 3 3 3 。对照组2 例临床控制，显效6 例，有效
13、1 3 例，无效9 例，显效率为2 6 6 7 ，总有效率7 0 0 0 。关节止痛胶囊组显效率明显高于对照组，差异显著( P 0 0 5 ) 。显效率= ( 临床控制+ 显效) N ，总有效率：( 临床控制+ 显效+ 有效) N 。结果见表4 。表4 治疗后总疗效与对照组比较 P 0 0 5 ) ，具有可比性。2 治疗后，两组的总积分比治疗前均明显减少，经统计学处理，有显著性差异( P 0 0 5 ) ，具有可比性。2 治疗后，治疗组休息疼痛、晨僵疼痛及行走疼痛的消失率分别为7 8 9 5 、8 3 3 3 、7 5 0 0 ，明显高于对照组( P 0 0 5 ) ，具有可比性。2 治疗后，
14、治疗组关节压痛、肿胀及浮髌试验消失率分别为6 2 6 7 、5 2 1 7 、8 1 8 2 ，明显高于对照组( P 3 8 岁5 有骨性膨大满足1 + 2 + 3 + 4 条，或1 + 2 + 5 条，或1 + 4 + 5 条者可诊断膝骨性关节炎临床+ 实验室+ 放射学1 前月大多数时间有膝痛2 骨赘形成3 关节液检查符合骨性关节炎4 年龄 4 0 岁5 晨僵 3 0 m i n6 有骨摩擦音满足1 + 2 条，或1 + 3 + 5 + 6 条，或1 + 4 + 5 + 6 条者可诊断膝骨性关节炎( 引自施桂英，栗占国关节炎概要，北京：中国医药科技出版社，2 0 0 0 ，第一版：3 3 9
15、 )4 9生查! 垦塑垄兰! ! ! ! 竺竺! ! ! 兰兰竺墨一图1 免膝关节正位c R 片 - 正常组关节面光滑，关节间隙均匀致B 模型组关节面硬化，关节内侧间隙明显狭窄，骨赘形成，膝内翻畸形C 对照组关节面轻微硬化，关节内侧间隙狭窄，骨赘形成，膝内翻畸形D 治疗组关节面轻微硬化，关节内侧间隙稍狭窄，未见明显骨赘图2兔关节软骨切片H E 染色光镜图1 0 0A 正常组软骨面光滑，细胞排列整齐，潮线完整B 模型组软骨面粗糙，可见裂隙，细胞排列紊乱，有成簇现象，潮线不完整C 对照组软骨面欠光滑，有浅表裂隙，细胞排列欠规则，潮线尚完整D 治疗组软骨面尚光滑，细胞排列整齐，潮线完整图3兔滑膜组织
16、切片H E 染色光镜图1 0 0A 正常组滑膜细胞排列整齐B 模型组滑膜细胞大量增生，成绒毛状，其下见大量纤维结缔组织C 对照组滑膨哪酬目生明显D 治，铷滑膜耋哪嘴生轻微，较多的脂肪细胞清晰可见图4兔软骨切片M a s s o n 三色染色光镜图1 0 0 正常组软骨胶原呈蓝绿色，深层钙化软骨及软骨下骨胶原红染B 模型组软骨胶原蓝绿色脱失严重，潮线上升起火焰状红染色，几乎达软骨表层c 对照组软骨胶原蓝绿色保存较多，潮线上的红色突起低且少D 治疗组软骨胶原蓝绿色脱失较少，潮线上的红色突起低且少山东中医药大学2 0 03 届硕士学位论文图5T U N E L 法标记兔软骨细胞光镜图2 0 0 正常组软骨全层未见, T U
