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1、 普洛麦格（北京）生物技术有限公司 Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 电话： 800 810 8133， 010 58256268 中文网址： 英文网址： 2 / 24 目录目录 1. 产品描述 . 2 2. 产品组分及储存条件 . 3 3. 一般注意事项 . 4 3.A 光谱特性 . 4 3.B MgCl2浓度 . 4 3.C 兼容仪器 . 4 4. GoTaq qPCR Master Mix 操作步骤 . 5 4.A 应用 ABI PRISM 7000/7300/7500/7500 Fast/7700/7900HT Real- Time PCR Sy
2、stem 的操作方法 . 6 4.B 应用 Bio-Rad iQ5 Optical System 的操作方法 . 7 4.C 应用 Roche LightCycler Real Time PCR 扩增仪的操作方法 . 8 4.D 应用 Cepheid Smart Cycler System Real Time PCR 扩增仪的操作方法 . 10 4.E 应用 Stratagene Mx3000PTM Real Time PCR 扩增仪的操作方法 . 11 5 附录 . 12 5.A 快速操作指南 . 13 5.B 进行 RT-qPCR 时的实验方法 . 14 5.C 实验条件的优化 . 16
3、5.D 引物设计及使用说明 . 17 5.E Real Time PCR 数据分析 . 18 5.F 相对定量 vs 绝对定量 . 19 5.G 常见问题 . 21 5.H 相关产品 . 22 1. 产品描述产品描述 GoTaq qPCR Master Mix 是采用染料法进行 Real Time PCR 的专用试剂。 本产品采用一种新的专利专利荧光染荧光染 料料 BRYT Green dye，此染料与双链 DNA 特异性结合后，会发出比 SYBR Green I 更强的荧光信号。用于基 因定量，尤其适合低拷贝基因的检测。 GoTaq qPCR Master Mix 产品提供易用的、2X 的预
4、混液。本产品中已包含：专利的双链 DNA 结合染料 BRYT Green dye，低浓度的 CXR（carboxy-X-rhodamine）参比荧光染料（性质与 ROX 相同） ，GoTaq热启动 酶，MgCl2，dNTP 和专利的反应缓冲液。另外独立包装的 100X CXR 用于需要高浓度参比荧光染料的仪器。 GoTaq qPCR Master Mix 的优点的优点 染料：与 SYBR Green I 染料相比，GoTaq qPCR Master Mix 专利染料 BRYT Green dye 结合双链结合双链 DNA 后后 发出的荧光更强发出的荧光更强，而且对对 PCR 反应无抑制作用反应
5、无抑制作用。可以让样品的 CT值更早出现，线性范围更广。BRYT Green dye 与参比荧光染料 CXR 的激发和发射波长分别与 SYBR Green I 和 ROX 相近。在实验过程中采用与 SYBR Green I 和 ROX 完全相同的设置。 DNA 聚合酶/缓冲液配方：GoTaq热启动酶采用专利的抗 Taq 酶抗体，在室温时阻断 Taq 酶的活性。当普洛麦格（北京）生物技术有限公司 Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 电话： 800 810 8133， 010 58256268 中文网址： 英文网址： 3 / 24 在 95加热 2 分钟时，酶
6、活性被完全激活。专利的酶/缓冲液配方，能耐受更多的循环数（耐受更多的循环数（4545- -5050 个循环）个循环） ， 并且与需要较长预变性时间较长预变性时间的热循环程序（95，10min）兼容。对 GCGC 含量较高（含量较高（60%60%以上）的以上）的 DNADNA 片段片段或 DNADNA 模板中有模板中有 PCRPCR 反应抑制剂存在反应抑制剂存在时，此缓冲液配方也能保证扩增顺利进行。 GoTaq qPCR Master Mix 系统提供最小的批与批之间的差异，在宽广的线性范围内保证高效、敏感的扩 增。 2. 产品组分及储存条件产品组分及储存条件 Product Size (50l
7、 反应体系反应体系) Cat.# GoTaq qPCR Master Mix 200 反应 A6001 包含： 5 1ml GoTaq qPCR Master Mix, 2X 100l 100X CXR Reference Dye 2 13ml Nuclease-Free Water Product Size (50l 反应体系反应体系) Cat.# GoTaq qPCR Master Mix 1000 反应 A6002 包含： 25 1ml GoTaq qPCR Master Mix, 2X 5 100l 100X CXR Reference Dye 10 13ml Nuclease-Free Water 储存条件：GoTaq qPCR Master Mix 采用-20运输。到货后，将全部组分储存于-20，避光保存。使 用过程中，所有组分可避光 2-8保存 3 个月。 普洛麦格（北京）生物技术有限公司
