临床生化检验参考方法

《临床生化检验参考方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床生化检验参考方法（41页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、临床生化检验参考方法临床生化检验参考方法 建立的工作进展建立的工作进展张天娇张天娇卫生部临床检验中心卫生部临床检验中心工作背景工作背景检验结果的准确性和可比性已受到广泛的重视检验结果的准确性和可比性已受到广泛的重视， 提高和保证检验结果的准确性和可比性的有效手提高和保证检验结果的准确性和可比性的有效手 段是开展量值溯源工作段是开展量值溯源工作，而检验量值溯源的基础而检验量值溯源的基础 是参考系统是参考系统。临床检验参考系统包括参考方法临床检验参考系统包括参考方法、参考物质和参参考物质和参 考实验室考实验室，其中参考方法是关键其中参考方法是关键，参考物质由参参考物质由参 考方法定值考方法定值，参

2、考实验室是运行参考方法的实验参考实验室是运行参考方法的实验 室室。工作背景工作背景国家国家“ 十一五十一五” 科技支撑计划资助项目科技支撑计划资助项目 （2007BAI05B09）国家国家863863计划资助项目计划资助项目 (2006AA020909)工作背景工作背景检验项目检验项目 1 1、代谢物类代谢物类：胆固醇胆固醇、甘油三酯甘油三酯、葡萄糖葡萄糖、肌酐肌酐、尿酸尿酸、尿素尿素 2 2、离子类离子类：钠钠、钾钾、氯氯、钙钙、镁镁 3 3、酶学类酶学类：丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶、 - -谷氨酰转移酶谷氨酰转移酶、天门冬氨酸天门冬氨酸 氨基转移酶氨基转移酶、肌酸激酶肌酸激酶、乳酸脱

3、氢酶乳酸脱氢酶、淀粉酶淀粉酶 4 4、非肽激素类非肽激素类：T3T3、T4T4、孕酮孕酮、雌二醇雌二醇、皮质醇皮质醇 5 5、脂蛋白类脂蛋白类：高密度脂蛋白胆固醇高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇低密度脂蛋白胆固醇 （共约共约2424项项）同位素稀释同位素稀释/ /色谱色谱/ /质谱联用技术质谱联用技术目前国际公认的可准确测定小分子化合物的方法目前国际公认的可准确测定小分子化合物的方法 可用于一级参考测量过程的测量原理可用于一级参考测量过程的测量原理同位素内标同位素内标 “ 理想理想” 的内标物的内标物，与待测物没有结构上的差异与待测物没有结构上的差异色谱色谱/ /质谱联用测定系统质谱联用

4、测定系统 高特异性高特异性高灵敏性高灵敏性色谱色谱/ /质谱联用测定系统质谱联用测定系统气相色谱气相色谱/ /质谱联用系统质谱联用系统 Agilent 6890 N /5975 MSD色谱色谱/ /质谱联用测定系统质谱联用测定系统液相色谱/串联质谱系统高效液相色谱仪高效液相色谱仪Agilent 1200和串联三重四极杆质谱仪和串联三重四极杆质谱仪API 4000血清孕酮血清孕酮方法方法 （1 1）以以3,43,4- -1313C C2 2 孕酮为内标孕酮为内标，用正己烷提取血清用正己烷提取血清 （2 2）以羟丙基以羟丙基- - -环糊精水溶液对提取液作净化处理环糊精水溶液对提取液作净化处理 （

5、3 3）用七氟丁酸酐对孕酮进行衍生化用七氟丁酸酐对孕酮进行衍生化 （4 4）用气相色谱分离衍生产物用气相色谱分离衍生产物，质谱选择离子监测模质谱选择离子监测模 式检测孕酮与内标的特定碎片离子式检测孕酮与内标的特定碎片离子 （5 5）包括法定量包括法定量血清孕酮血清孕酮OCOCH3OCOCH3COF7C3HFBA() 孕酮孕酮( (孕甾孕甾4 4烯烯- -3 3，2020二酮二酮) ) () 孕酮衍生产物孕酮衍生产物（孕甾孕甾- -3 3，5 5- -二烯二烯- -2020- -酮酮- -3 3- -七氟丁酸酯七氟丁酸酯）图图：孕酮和内标的衍生化孕酮和内标的衍生化()()血清孕酮血清孕酮1.1.

6、 孕酮孕酮2.2.内标内标 图图3 3同位素稀释同位素稀释/ /气相色谱气相色谱/ /质谱法测定血清孕酮质谱法测定血清孕酮（A A）和内标和内标（B B）色谱图色谱图血清孕酮血清孕酮方法学评价方法学评价 （1）精密度精密度： 血清孕酮测定的总变异系数血清孕酮测定的总变异系数为为0.69%2.12% （2）回收率回收率： 平均分析回收率为平均分析回收率为98.3%100.1%。 （3）参考物质分析参考物质分析: : 分析血清孕酮标准物质分析血清孕酮标准物质ERM- DA347，测定结测定结 果果与靶值得偏差小于与靶值得偏差小于1.5% 。血清孕酮血清孕酮参加国际比对的情况参加国际比对的情况CCQ

7、M- P77b（与中国计量科学研究院合作与中国计量科学研究院合作） CCQM- K63b（与中国计量科学研究院合作与中国计量科学研究院合作） RELA- 2007国际计量局物质量咨询委员会国际计量局物质量咨询委员会（CCQM）由国际计量局由国际计量局（BIPMBIPM）国际计量委员会于国际计量委员会于19931993年成立年成立包括包括3535个会员和观察员组织个会员和观察员组织下设下设7 7个工作组个工作组 ，每年召开两次工作会议每年召开两次工作会议针对不同领域针对不同领域，每年开展多项国际间比对活动每年开展多项国际间比对活动CCQM- P77b2006年进行年进行，由美国由美国NIST发起

8、发起，参加的机构包括参加的机构包括美国国家标准和技术研究所美国国家标准和技术研究所 NIST中国计量科学研究院中国计量科学研究院 NIM/NRCCRM德国国家计量研究院德国国家计量研究院 PTB日本国家计量研究院日本国家计量研究院 NMIJ韩国标准与科学研究所韩国标准与科学研究所 KRISS新西兰惠灵顿医院新西兰惠灵顿医院Wellington Hospital，New Zealand比对样品比对样品 冰冻人血清冰冻人血清（每种每种5ml4瓶瓶）男性血清男性血清：正常成年男性正常成年男性女性血清女性血清：正常成年正常成年、非绝经期女性非绝经期女性每种血清中的每种血清中的3瓶供正式测定瓶供正式测定

9、余下余下1 瓶用于预实验或结果的验证瓶用于预实验或结果的验证比对结果比对结果 女性血清女性血清未报回数据未报回数据KRISS（韩国韩国）免疫分析法免疫分析法1.75Wellington Hospital (新西兰新西兰)ID- LC/MS/MS0.0870.0432.26NMIJ（日本日本）ID- GC/MS0.0610.0251.946PTB（德国德国）ID- GC/MS0.040.021.90NIM（中国中国）ID- LC/MS/MS0.0470.0231.876NIST（美国美国）分析方法分析方法扩展不确定度扩展不确定度 （ng/g）标准不确定度标准不确定度 （ng/g）测定结果测定结果

10、 （ng/g）参与实验室参与实验室比对结果比对结果 男性血清男性血清未报回数据未报回数据NMIJ（日本日本）未报回数据未报回数据KRISS（韩国韩国）免疫分析法免疫分析法0.063Wellington Hospital (新西兰新西兰)未报回数据未报回数据PTB（德国德国）ID- GC/MS0.0060.0030.045NIM（中国中国）ID- LC/MS/MS0.00630.00320.0402NIST（美国美国）分析方法分析方法扩展不确定度扩展不确定度 （ng/g）标准不确定度标准不确定度 （ng/g）测定结果测定结果 （ng/g）参与实验室参与实验室比对结果比对结果 女性血清女性血清比对

11、结果比对结果 男性血清男性血清CCQM- K66b2007年进行年进行，由美国由美国NIST发起发起，参加机构包括参加机构包括美国国家标准和技术研究所美国国家标准和技术研究所 NIST中国计量科学研究院中国计量科学研究院 NIM/NRCCRM德国国家计量研究院德国国家计量研究院 PTB日本国家计量研究院日本国家计量研究院 NMIJ英国政府化学家实验室英国政府化学家实验室 LGC墨西哥国家计量科学研究院墨西哥国家计量科学研究院CENAM澳大利亚国家计量科学研究院澳大利亚国家计量科学研究院NMIA比对样品比对样品 冰冻人血清冰冻人血清（每种每种5ml4瓶瓶）女性血清女性血清：正常成年正常成年、非绝

12、经期女性非绝经期女性 每种血清中的每种血清中的3瓶供正式测定瓶供正式测定余下余下1 瓶用于预实验或结果的验证瓶用于预实验或结果的验证比对结果比对结果ID- GC/MS0.0850.0382.834PTB（德国德国）ID- GC/MS0.0630.0312.85NMIJ（日本日本）ID- C/MS/MS0.0760.0382.799NMI（澳大利亚澳大利亚）ID- C/MS/MS0.070.0352.806NIST( (美国美国) )ID- GC/MS0.080.042.88NIM（中国中国）ID- C/MS/MS0.090.042.74LGC（英国英国）ID- C/MS/MS0.18610.0

13、8462.891KRISS（韩国韩国）ID- GC/MS0.230.123.15CENAM（墨西哥墨西哥）分析方法分析方法扩展扩展 不确定度不确定度 （ng/g）标准标准 不确定度不确定度 （ng/g）测定结果测定结果 （ng/g）参与实验室参与实验室比对结果比对结果LGCNMIANISTPTBNMIJNIMKRISSCENAM2.72.82.93.03.13.23.3Progesterone, ng/gRELA- 20072003年，国际临床化学联合会（IFCC）为配合检验医学 溯源联合会（JCTLM）的工作，与德国临床化学会 （DGKL）共同发起的环形比对试验（Ring- trial），每

14、年 进行一次。参加2007- RELA激素类比对RELA- 2007比对样品：A、B两水平，每水平个5瓶。比对结果：2008年5月中旬报告血清尿素血清尿素方法方法 （1）以以13C,15N2尿素为内标尿素为内标 （2）用无水乙醇沉淀用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质去除血清中的蛋白类物质 （3）依次使用丙二醛依次使用丙二醛- -二甲基缩醛和二甲基缩醛和N- 甲基甲基- (三甲三甲 基硅烷基基硅烷基) )- -三氟乙酰胺三氟乙酰胺（MSTFA）将尿素衍生成将尿素衍生成 为三甲基硅烷氧基嘧啶为三甲基硅烷氧基嘧啶 （4）用GC/MS分析衍生产物分析衍生产物，以包括法定量以包括法定量血清尿素血清尿

15、素()()()():尿素尿素（碳酰胺碳酰胺）； ():2- 羟基嘧啶羟基嘧啶； ():尿素衍生产物尿素衍生产物（ 三甲基硅烷氧基嘧啶三甲基硅烷氧基嘧啶） 图图 尿素衍生化反应过程尿素衍生化反应过程CONH2NH2NN OH NN OSiCH3CH3CH3MDBMAHClMSTFA血清尿素血清尿素a：尿素；b：内标图图2 GC/MS2 GC/MS分析尿素和内标衍生产物的色谱图分析尿素和内标衍生产物的色谱图血清尿素血清尿素方法学评价方法学评价 （1 1）精密度精密度： 批内批内、批间和总变异系数的平均值分别为批间和总变异系数的平均值分别为0.38%（范范 围围0.12%0.47 %）、0.62%（范围范围0.49 %0.87 %） 和和0.73%(范围范围0.51%0.93 %)。 （2 2）回收率回收率 回收试验的回收率范围为回收试验的回收率范围为99.37100.95%。 （3 3）参考物质分析参考物质分析： 分析美国国家标准和技术研究院分析美国国家标准和技术研究院（NIST）2个水平的个水平的 血清标准物质血清标准物质SRM909b，测定结果与靶值的偏差小于测定结果与靶值的偏差小于 0.2%血清尿素血清尿素参加国际比对 RELA- 2007血清肌酐血清肌酐方法方法（1 1）以以 2 2H H3 3