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1、1RP-HPLC 法测定补血口服液中异嗪皮啶的含量【关键词】 补血口服液;刺五加; 异嗪皮啶;RP-HPLC 法补血口服液是由黄芪、刺五加等多种中药组成的复方制剂，具有益气补血、扶正固本之功效。临床用于癌症化疗、放疗，苯、放射线等原因引起的白细胞减少症以及贫血症等。刺五加为方中之臣药，笔者采用反向高效液相色谱法（RP-HPLC ）测定其中异嗪皮啶的含量，方法准确，重现性好。1 仪器与试药日立-635 型高效液相色谱仪，SAGE 色谱工作站; 乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，其它试剂均为分析纯;异嗪皮啶对照品（供鉴别用）购于中国药品生物制品检定所，批号:0837-9701 ，高效液相色谱归一化法测定
2、其含量为 98.37%;益气补血口服液测定样品由吉林省靖宇凯维有限公司提供。2 色谱条件色谱柱:HpersilODS （2504.6）mm，5m （USA）;流动相: 乙腈 -0.1%磷酸溶液（10:90 ）;流速:1.0ml.min; 检测波长:344nm;柱2温: 室温 ;理论塔板数以异嗪皮啶峰计算，应不低于 7000。3 供试溶液制备对照品溶液: 精密称取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇制成每毫升含 80g 的溶液作为对照品溶液。供试品溶液 :精密吸取本品25ml，缓缓加入无水乙醇 70ml，边加边振摇，静置，分取上清液，残渣加水 10ml，充分振摇，使残渣溶散，缓缓加入无水乙醇30ml，边加
3、边振摇，静置，分取上清夜，残渣加水 5ml，充分振摇，使残渣溶散，缓缓加入无水乙醇 15ml，边加边振摇，静置，分取上清夜，合并上清夜，蒸干，残渣加水 30ml 使溶解并转移至分液漏斗中，加醋酸乙酯萃取 5 次，每次 25ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至 5ml 量瓶中，作为供试品溶液。阴性对照液: 按处方比例配制缺刺五加的阴性对照品，吸取 25ml，同样品溶液的制备方法制得阴性对照液。4 方法学考察4.1 测定波长的选择经 UV-2201 分光光度计扫描，异嗪皮啶在 342.0nm 波长处有最大吸收。中国药典 2000 年版中异嗪皮啶的液相测定波长（肿3节风项下） 1为
4、344nm，故选择测定波长为 344nm。4.2 系统适用性试验依据上述条件，分别精密吸取上述 3 种溶液各 10l，分别注入液相色谱仪，测得异嗪皮啶对照品及样品、阴性对照品的色谱图（图略） ，理论塔板数以异嗪皮啶峰计算，n=7441，阴性对照无干扰。4.3 流动相的选择试验比较了乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80） 1 、 （18:82） 、（15:85） 、 （10:90）4 种比例的流动相，结果以后者分离效果为好，故选后者。4.4 线性关系考察精密吸取对照品溶液（84.32g.ml ）2 、4、6、8 、10l ，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值为总坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，
5、计算回归方程为:y=187226.64x+2685.70，r=0.9993。结果表明异嗪皮啶在（0.1690.843）g 范围内呈良好的线性关系。44.5 精密度试验取批号 20000320 样品，重复进样 5 次，测得异嗪皮啶峰面积的 RSD 为 0.88%。4.6 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液 10l，每间隔 2h 进样 1 次，共进样 6 次。结果表明供试品溶液在 10h 内基本稳定，RSD 为1.39%（n=6） 。4.7 重现性试验取同一批样品（20000320） ，依法独立测定 5 次，结果 RSD为 2.04%（n=5）4.8 回收率试验精密量取同法测定已知含量的样品（批号
6、20000320，含量14.3439g.ml）15ml，加入对照品适量，依法测定，计算回收率。结果平均回收率为 97.54%;RSD 为 0.51%。55 样品测定依法测定样品（批号:20000120、2000121、2000322、2000410、2000412）5 批，结果异嗪皮啶含量分别为0.128、0.130、0.150、0.162、0.146mg. 支。6 讨论6.1 由于本品含糖量较高，且有阿胶胶质蛋白的影响，直接加试剂（正丁醇、氯仿、醋酸乙酯等）萃取，乳化严重，故先进行醇沉，沉掉一部分糖及蛋白，然后再进行萃取，可大大减轻乳化现象。6.2 刺五加中异嗪皮啶的含量测定文献报道有薄层 比色法2 、高效液相色谱法 3 （刺五加药材、刺五加注射液） ，刺五加在复方制剂中异嗪皮啶的含量测定笔者未见报道，参照文献1 ，调整流动相比例至乙腈-0.1%磷酸溶液（10:90） ，可使异嗪皮啶峰与其它峰完全达到基线分离。【参考文献】61中华人民共和国卫生部.中国药典M .北京:人民卫生出版社，2000.2许正斌. 刺五加各部位有效成分的含量测定J.中草药，1984，15 （ 5）:32.3田 明，陈大忠. 高效液相色谱法测定刺五加注射液中异嗪皮啶含量J.黑龙江中医药，1997，10（1）:25.
